一种舒肝丸的含量测定方法技术

本发明专利技术提供了一种舒肝丸的含量测定方法。该方法采用高效液相色谱法同时测定舒肝丸中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷四种成分的含量，方法灵敏，准确，可用于舒肝丸的质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及到一种舒肝丸的含量测定方法，属中药
具体的，涉及一种舒肝丸中芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷四种成分同时测定的含量测定方法。
技术介绍
舒肝丸为理气剂，具有舒肝和胃，理气止痛之功效。主治肝郁气滞，胸肋胀满，胃脘疼痛，嘈杂呕吐，嗳气泛酸。该药物由川楝子、醋延胡索、片姜黄、白芍(酒炒)、沉香、枳壳(炒)、木香、砂仁、陈皮、豆蔻仁、茯苓、姜厚朴、朱砂组成，药效明确。舒肝丸(大蜜丸)标准最早收录在《中国药典》1985年版，2000年版中增加水蜜丸规格，2005年版增加水丸规格，并对标准进行修订，检验内容同现行标准，2010年版第二增补本中增加小蜜丸规格，检验内容同《中国药典》2005年版，未作修定。该药物现行标准为《中国药典》2015年版，记载了该药物的处方、制法及质量控制方法。该药物所含药味多，《中国药典》2015年版中的含量测定项中，样品经过复杂的处理过程后，仅对白芍中芍药苷进行了含量测定，舒肝丸处方中陈皮中橙皮苷、枳壳中柚皮苷、新橙皮苷等成分在药材中含量较高，但并未进行测定。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了一种同时测定舒肝丸中芍药苷、橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷四种成分含量的方法。本专利技术含量测定方法采用高效液相色谱法，该方法如下：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05％-0.10％磷酸为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱梯度为0-40分钟，流动相A由15％渐变至25％；检测波长为210-240nm；流速为1ml/min，理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000-10000；对照品溶液的制备取芍药苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取舒肝丸，取样量0.5-1.2g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流70-100分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本专利技术含量测定方法中，流动相B优选为0.05％磷酸；检测波长优选为230nm；理论板数优选为按芍药苷峰计算应不低于8000；取样量优选为0.8g；测定法中分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液的量优选为5μl，注入液相色谱仪。为了验证测定含量方法的稳定性、准确性、专属性及系统适应性，对方法进行了以下方法学验证试验，以确保该含量测定方法可以作为舒肝丸的质量控制。1仪器与试药1.1仪器高效液相色谱仪：Waterse2695；色谱柱：ThermoAccliam(5μm，4.6mm×250mm)；电子天平：MettlerAE163；MettlerAE240；超纯水仪：Integral10(Millipore)。1.2试药与试剂对照品：芍药苷(批号：110736-201035，含量96.4％)、柚皮苷(批号：110722-201111)、橙皮苷(批号：110721-201014，含量95.3％)、新橙皮苷(批号：111857-201102，含量99.6％)购自中国食品药品检定研究院；制备阴性对照用药材：川楝子、醋延胡索、白芍(酒炒)、片姜黄、木香、沉香、豆蔻仁、砂仁、姜厚朴、陈皮、枳壳(炒)、茯苓、朱砂均购自市场，经河北省药品检验研究院主任药师段吉平鉴定为正品。试剂：甲醇、乙腈(色谱纯，Merck公司)；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。2方法确定2.1色谱条件的确定2.1.1测定波长的选择分别称取芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品适量，用甲醇溶液配制成适宜浓度的对照品溶液，在200nm～400nm进行光谱扫描。结果表明，芍药苷在232nm波长附近有最大吸收，橙皮苷在213、282nm波长附近有最大吸收，柚皮苷、新橙皮苷在225、282nm波长附近有最大吸收。282nm波长下，芍药苷紫外吸收极低，在确保测定值的准确性的基础上，为方便实验，选择四个成分均有较大吸收的210-240nm作为测定波长，此波长下各待测成分与杂质峰分离良好，阴性无干扰，其中230nm测定更优。采用芍药苷最大吸收波长处测定数据与按选定波长测定数据进行比较，结果两者基本一致，见表1。表1不同波长处各待测成分的含量测定结果对比2.1.2流动相的选择样品处方中药味多，成分复杂，杂质多，性质相近的成分多，流动相以甲醇作有机相时，未能得到良好分离，结合提取方法考察及色谱条件的考察，最终选择乙腈作为有机相，梯度洗脱，根据各待测成分的极性及出峰时间，将梯度初始比例设为乙腈-0.05％磷酸溶液(15∶85)，梯度洗脱表见表2，分离良好。表2梯度洗脱表2.2对照品溶液的制备2.2.1配制对照品溶剂的选择供试品溶液的溶剂为甲醇溶液，故对照品溶液的稀释选择甲醇溶液。2.3供试品溶液的制备方法确定2.3.1提取方法的初选供试品溶液的制备方法1(现标准方法)取舒肝丸适量，剪碎，混匀，取1g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率260W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精蜜量取续滤液5ml，蒸干，残渣加水5ml使溶解，通过GDX-201型大孔吸附树脂柱(内径为0.9cm，柱高为12cm)，用30％甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。供试品溶液的制备方法2取舒肝丸适量，剪碎，混匀，取1g，精密称定。置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理(功率260W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。结果：方法1得到的供试品溶液色谱峰较少，难以选择待测成分进行多成分含量测定方法的探索。而且不同品牌GDX-201型大孔吸附树脂对样品测定结果影响较大。方法2得到的供试品溶液色谱峰较多，且各色谱峰之间分离良好，因此初步选择方法2。2.3.2取样量的考察取同一批样品(大蜜丸，批号：4015087)，分别精密称取0.5g、0.8g、1.2g，按正文方法试验。结果表明三种取样量所得含量基本无差别，在保证色谱峰面积合适的前提下并使提取充分，选择取样量为0.8g(见表3)。表3取样量考察结果2.3.3提取方式的考察取同一批样品(大蜜丸，批号：4015087)适量，分别超声处理(功率400W，频率40kHz)90分钟、加热回流90分钟，按拟定色谱条件测定。结果表明加热回流比超声处理提取率略高，故选择加热回流的提取方式，见表4。表4不同提取方式的含量测定结果2.3.4提取时间的考察取同一批样品(大蜜丸，批号：4015087)适量，分别加热回流30min、45min、60min、90min、120min，按拟定色谱条件测定。结果表明基本无差别，为确保提取完全，选择加热回流90min，见表5。表5不同提取时间的含量测定结果2.3.5提取溶剂的考察取同一批样品(大蜜丸，批号：4015087)适量，分别以50％、70％的甲醇溶液、甲醇、稀乙醇为提取溶剂，按拟定色谱条件测定。结果表明以甲醇为提取溶剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种舒肝丸的含量测定方法，该方法采用高效液相色谱法，其特征在于该含量测定方法如下：色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05％‑0.10％磷酸为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱梯度为0‑40分钟，流动相A由15％渐变至25％；检测波长为210‑240nm；流速为1ml/min，理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000‑10000；对照品溶液的制备 取芍药苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，即得；供试品溶液的制备 取舒肝丸，取样量0.5‑1.2g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流70‑100分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5‑10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

【技术特征摘要】
1.一种舒肝丸的含量测定方法，该方法采用高效液相色谱法，其特征在于该含量测定方法如下：色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05％-0.10％磷酸为流动相B，进行梯度洗脱，洗脱梯度为0-40分钟，流动相A由15％渐变至25％；检测波长为210-240nm；流速为1ml/min，理论板数按芍药苷峰计算应不低于8000-10000；对照品溶液的制备取芍药苷对照品、柚皮苷对照品、橙皮苷对照品、新橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取舒肝丸，取样量0.5-1.2g，精密称定；置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流70-100分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述流动相B为0.05％磷酸。3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于所述检测波长为230nm。4.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙慧珠，刘永利，刘晓明，冯丽，
申请(专利权)人：河北省药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：河北;13