一种测定铜离子含量的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种测定铜离子含量的试剂盒。它包括参数采集试剂、参数采集设备和可读性载体；所述参数采集试剂包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的试剂；所述参数采集设备包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的设备；所述可读性载体上记载了测定铜离子含量的步骤。本发明专利技术试剂盒提高了检测的准确性，能消除了样品基质中其它成分对检测的干扰；无需复杂的样品前处理和贵重仪器；检测方法成本低，抗干扰能力强，检测限低，既可定量检测，也可以用肉眼观察，比较铜标准溶液产生的颜色，对铜离子浓度进行半定量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种测定铜离子含量的试剂盒，属于重金属快速检测领域。
技术介绍
铜是人类和动物机体必需的微量元素之一。铜参与了机体内蛋白质、脂肪、碳水化合物三大营养物质的代谢，并且在生长、免疫、繁殖等生理过程中起着极其重要的作用。自英国学者Braude首次发现高剂量铜对仔猪生长有促进作用后，铜作为微量元素补充剂广泛添加到饲料中。添加高剂量铜已被认为是一种高效、廉价、使用方便的促生长方式，但高剂量的铜添加往往会造成动物中毒，同时会通过动物排泄物污染周围环境，并在动物产品中蓄积和残留，影响动物产品品质，消费这类动物产品会危害人体健康。因此，我国对饲料中铜的允许量制定了严格的指标：如猪饲料中铜含量不得高于200mg/kg。同时，人体通过各种途径摄入的铜的过量时会导致严重的健康问题，如急性缺血性心脏病、肾脏疾病、神经退行性疾病、贫血和骨功能紊乱等，因此各国对环境和食品中铜的限量均作出了规定。如美国环保署规定饮用水中铜的含量不得超过1.30mg/L；欧盟食品委员会规定人体每天通过食物摄取的铜含量应在1.2-4.2mg范围内。另外，铜在儿茶酚胺代谢、自由基清除、以及血红蛋白、弹性蛋白和胶原合成中起着重要的作用，铜的浓度是一些疾病如Wilson病、小细胞低色素性贫血和骨疾病的诊断指标。因此，建立饲料、环境、血清中铜含量的检测方法是非常必要的。现有的铜检测方法仍以传统仪器法为主，包括原子吸收分光光度法(AAS)、电感耦合等离子体-原子发射光谱法(ICP-AES)、电感耦合等离子体质谱分析(ICP-MS)和原子荧光光谱分析(AFS)等为主。但是，此类常规检测方法由于需要昂贵的大型仪器，复杂的样品前处理过程，以及专业技术人员操作，无法在短时间内对大量样品进行检测，并在基层实验室中推广。虽然目前有很多文献报道了一些铜离子的新型检测方法，如基于纳米金和纳米银的的可视化检测方法、电化学分析法以及基于抗铜螯合物抗体的免疫分析方法，但这些方法基本上只能应用于比较简单的样品基质如饮用水和湖水等。对于复杂的样品如饲料、食品和血清等，样品中含有大量的其它金属离子如钙、锌、铁、镁以及其它营养成分如蛋白质、氨基酸、维生素及各种添加剂，这些物质均会对测定产生严重的干扰。因此，现有的快速检测手段难以对这些复杂样品进行准确的定量分析。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种测定铜离子含量的试剂盒，本专利技术试剂盒提高了检测的准确性，能消除了样品中其它成分对检测的干扰。本专利技术提供的测定铜离子含量的试剂盒，其包括参数采集试剂、参数采集设备和可读性载体；所述参数采集试剂包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的试剂；所述参数采集设备包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的设备；所述可读性载体上记载了如下测定铜离子含量的步骤：1)吸光度值的检测标准曲线组：配制至少3种不同浓度的铜离子标准溶液，将所述铜离子标准溶液分别与BCA工作液混合，测定混合后体系在354nm下的吸光度值，记为A；样品组：将待测样品溶液与空白BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A1；将待测样品溶液与所述BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A2；所述BCA工作液为BCA试剂与盐酸羟胺溶液的混合液；所述空白BCA工作液为空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的混合液；2)计算铜离子标准溶液标准曲线的斜率根据式Ⅰ对吸光度值A进行校正，得到校正吸光度值，记为Ac，式Ⅰ中，VBCA、VCu分别表示步骤1)中加入的所述BCA工作液和所述铜离子标准溶液的体积，单位为μL；CBCA0表示所述BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442；以所述校正吸光度值为纵坐标，以所述铜离子标准溶液的浓度为横坐标，进行线性拟合，得到所述铜离子标准溶液在354nm下的标准曲线的斜率，记为βCu；根据式Ⅱ得到βCu-BCA，式Ⅱ中，MBCA、MCu、MCu-BCA分别表示BCA、铜和Cu-BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和铜离子标准溶液的体积，单位为mL；βBCA为0.00442，为试剂盒提供值。3)吸光度值A2与A1的差值记为ΔA，根据式Ⅲ得到所述待测样品溶液中铜离子的浓度Ccu-sample，式Ⅲ中，βCu-BCA为通过式Ⅱ的测定值，MBCA、MCu、MCu-BCA分别表示BCA、铜和Cu-BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和样品溶液的体积，单位为mL，CBCA0为BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442，为试剂盒提供值。所述的试剂盒中，所述待测样品溶液为待测样品的三氯乙酸溶液的提取液；所述三氯乙酸溶液按照如下步骤制备：称取适量的三氯乙酸固体，溶于水中，得到质量体积浓度为1g/100mL(1％,w/v)的所述三氯乙酸溶液，所述水具体可为纯水；所述待测样品为饲料和/或血清和/或饮用水，所述饲料具体可为猪配合饲料、鸡配合饲料、浓缩饲料和预混料中的至少一种以及宠物饲料；当所述待测样品为为固体样本时，所述待测样品与所述三氯乙酸溶液的质量体积比为1g：(50～100)mL；当所述待测样品为液体样本时，所述待测样品与所述三氯乙酸溶液的体积比为1：1～10。所述的试剂盒中，所述BCA试剂为BCA、无水碳酸钠、酒石酸钠、氢氧化钠和碳酸氢钠的水溶液，各组分的浓度依次为：0.5g/L、1g/L、0.8g/L、0.5g/L和0.475g/L；所述BCA试剂的pH值为11.25；所述盐酸羟胺溶液由盐酸羟胺固体溶于碳酸缓冲液中得到，其质量体积浓度为1g/100mL；所述BCA工作液中，所述BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的体积比为5：3；所述空白BCA试剂为无水碳酸钠、酒石酸钠、氢氧化钠和碳酸氢钠的水溶液，各组分的浓度依次为：1g/L、0.8g/L、0.5g/L和0.475g/L；所述空白BCA试剂的pH值为11.25；所述空白BCA工作液中，所述空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的体积比为5：3；所述铜离子标准溶液的质量体积浓度为0～10μg/mL，具体可为0、0.1、0.5、1、2、5和10μg/mL。所述的试剂盒中，所述可读性载体为试剂盒说明书；所述测定铜离子含量的步骤的内容印刷在卡片上；和/或，所述可读性载体为计算机可读载体。所述参数采集设备包括酶标板和酶标仪。本专利技术进一步提供了测定铜离子含量的方法，包括以下步骤：1)吸光度值的检测标准曲线组：配制至少3种不同浓度的铜离子标准溶液，将所述铜离子标准溶液分别与BCA工作液混合，测定混合后体系在354nm下的吸光度值，记为A；样品组：将待测样品溶液与空白BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A1；将待测样品溶液与所述BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A2；所述BCA工作液为BCA试剂与盐酸羟胺溶液的混合液；所述空白BCA工作液为空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的混合液；2)计算铜离子标准溶液标准曲线的斜率根据式Ⅰ对吸光度值A进行校正，得到校正吸光度值，记为Ac，式Ⅰ中，VBCA、VCu分别表示步骤1)中加入的所述BCA工作液和所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定铜离子含量的试剂盒，其包括参数采集试剂、参数采集设备和可读性载体；所述参数采集试剂包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的试剂；所述参数采集设备包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的设备；所述可读性载体上记载了如下测定铜离子含量的步骤：1)吸光度值的检测标准曲线组：配制至少3种不同浓度的铜离子标准溶液，将所述铜离子标准溶液分别与BCA工作液混合，测定混合后体系在354nm下的吸光度值，记为A；样品组：将待测样品溶液与空白BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A1；将待测样品溶液与所述BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A2；所述BCA工作液为BCA试剂与盐酸羟胺溶液的混合液；所述空白BCA工作液为空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的混合液；2)计算铜离子标准溶液标准曲线的斜率根据式Ⅰ对吸光度值A进行校正，得到校正吸光度值，记为Ac，式Ⅰ中，VBCA、VCu分别表示步骤1)中加入的所述BCA工作液和所述铜离子标准溶液的体积，单位为μL；CBCA0表示所述BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442；以所述校正吸光度值为纵坐标，以所述铜离子标准溶液的浓度为横坐标，进行线性拟合，得到所述铜离子标准溶液在354nm下的标准曲线的斜率，记为βCu；根据式Ⅱ得到βCu‑BCA，式Ⅱ中，MBCA、MCu、MCu‑BCA分别表示BCA、铜和Cu‑BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和铜离子标准溶液的体积，单位为mL；βBCA为0.00442；3)吸光度值A2与A1的差值记为ΔA，根据式Ⅲ得到所述待测样品溶液中铜离子的浓度Ccu‑sample，式Ⅲ中，βCu‑BCA为通过式Ⅱ的测定值，MBCA、MCu、MCu‑BCA分别表示BCA、铜和Cu‑BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和铜离子标准溶液的的体积，单位为mL，CBCA0表示BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442。...

【技术特征摘要】
1.一种测定铜离子含量的试剂盒，其包括参数采集试剂、参数采集设备和可读性载体；所述参数采集试剂包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的试剂；所述参数采集设备包括采集所述可读性载体中涉及的各项参数的设备；所述可读性载体上记载了如下测定铜离子含量的步骤：1)吸光度值的检测标准曲线组：配制至少3种不同浓度的铜离子标准溶液，将所述铜离子标准溶液分别与BCA工作液混合，测定混合后体系在354nm下的吸光度值，记为A；样品组：将待测样品溶液与空白BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A1；将待测样品溶液与所述BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A2；所述BCA工作液为BCA试剂与盐酸羟胺溶液的混合液；所述空白BCA工作液为空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的混合液；2)计算铜离子标准溶液标准曲线的斜率根据式Ⅰ对吸光度值A进行校正，得到校正吸光度值，记为Ac，式Ⅰ中，VBCA、VCu分别表示步骤1)中加入的所述BCA工作液和所述铜离子标准溶液的体积，单位为μL；CBCA0表示所述BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442；以所述校正吸光度值为纵坐标，以所述铜离子标准溶液的浓度为横坐标，进行线性拟合，得到所述铜离子标准溶液在354nm下的标准曲线的斜率，记为βCu；根据式Ⅱ得到βCu-BCA，式Ⅱ中，MBCA、MCu、MCu-BCA分别表示BCA、铜和Cu-BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和铜离子标准溶液的体积，单位为mL；βBCA为0.00442；3)吸光度值A2与A1的差值记为ΔA，根据式Ⅲ得到所述待测样品溶液中铜离子的浓度Ccu-sample，式Ⅲ中，βCu-BCA为通过式Ⅱ的测定值，MBCA、MCu、MCu-BCA分别表示BCA、铜和Cu-BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和铜离子标准溶液的的体积，单位为mL，CBCA0表示BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述待测样品溶液为待测样品的三氯乙酸溶液的提取液；所述待测样品为饲料和/或血清和/或饮用水；当所述待测样品为固体样本时，所述待测样品与所述三氯乙酸溶液的质量体积比为1g：(50～100)mL；当所述待测样品为液体样本时，所述待测样品与所述三氯乙酸溶液的体积比为1：1～10。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述BCA试剂为BCA、无水碳酸钠、酒石酸钠、氢氧化钠和碳酸氢钠的水溶液，各组分的浓度依次为：0.5g/L、1g/L、0.8g/L、0.5g/100mL和0.475g/mL；所述BCA试剂的pH值为11.25；所述盐酸羟胺溶液由盐酸羟胺固体溶于碳酸缓冲液中得到，其质量体积浓度为1g/100mL；所述BCA工作液中，所述BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的体积比为5：3；所述空白BCA试剂为无水碳酸钠、酒石酸钠、氢氧化钠和碳酸氢钠的水溶液，各组分的浓度依次为：1g/L、0.8g/L、0.5g/L和0.475g/L；所述空白BCA试剂的pH值为11.25；所述空白BCA工作液中，所述空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的体积比为5：3；所述铜离子标准溶液的质量体积浓度为0～10μg/mL。4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述可读性载体为试剂盒说明书；所述测定铜离子含量的步骤的内容印刷在卡片上；和/或，所述可读性载体为计算机可读载体。5.一种测定铜离子含量的方法，包括以下步骤：1)吸光度值的检测标准曲线组：配制至少3种不同浓度的铜离子标准溶液，将所述铜离子标准溶液分别与BCA工作液混合，测定混合后体系在354nm下的吸光度值，记为A；样品组：将待测样品溶液与空白BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A1；将待测样品溶液与所述BCA工作液混合，测定混合体系在354nm下的吸光度值，记为A2；所述BCA工作液为BCA试剂与盐酸羟胺溶液的混合液；所述空白BCA工作液为空白BCA试剂与所述盐酸羟胺溶液的混合液；2)计算铜离子标准溶液标准曲线的斜率根据式Ⅰ对吸光度值A进行校正，得到校正吸光度值，记为Ac，式Ⅰ中，VBCA、VCu分别表示步骤1)中加入的所述BCA工作液和所述铜离子标准溶液的体积，单位为μL；CBCA0表示所述BCA工作液的浓度，单位为μg/mL；βBCA为0.00442；以所述校正吸光度值为纵坐标，以所述铜离子标准溶液的浓度为横坐标，进行线性拟合，得到所述铜离子标准溶液在354nm下的标准曲线的斜率，记为βCu；根据式Ⅱ得到βCu-BCA，式Ⅱ中，MBCA、MCu、MCu-BCA分别表示BCA、铜和Cu-BCA复合物的相对分子质量，单位为g/M；VBCA和VCu分别为加入的BCA工作液和铜离子标准溶液的体积，单位为mL；βBCA为0.00442；3)吸光度值A2与A1的差值记为ΔA，根...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈义强，钮一鸣，周金玉，张弛，王嘉熠，李煜，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11