一种高转化效率的大肠杆菌表达菌株制造技术

本发明专利技术涉及一株高转化效率的大肠杆菌表达菌株CGMCCNo.7123。该菌株是将大肠杆菌异源蛋白表达菌株BL21(DE3)基因组中编码I型限制性内切酶的hsdR基因通过重组工程法敲除后而获得。hsdR基因敲除后不携带任何外源碱基序列。该菌株的转化效率是BL21(DE3)原株的14.5倍。CGMCCNo.7123可成为通用的异源蛋白表达菌株以及直接用于筛选表达突变体库蛋白的菌株。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程领域，具体是涉及一种高转化效率的大肠杆菌表达菌株。
技术介绍
酶是工业化生产的关键材料，也是现代绿色经济和工业生物技术的基础。野生型的酶常常难以具有人们所期望的最佳活性。高催化活性以及高催化专一性的酶的获得常常依赖于基因突变，由于突变的随机性，目标突变只占最终突变的极小比例，一般在百万分之一的级别，因此高转化效率的菌株是获得高覆盖率的蛋白突变体库的基础之一。突变体库也是研究基因或蛋白的结构和功能的关键手段。常规的得到蛋白突变体的实验步骤是将通过特定方法(如DNA shuffling和易错PCR)所获得的突变体基因库以限制性内切酶进行酶切后所得的DNA片段和同样酶切的载体在T4连接酶的作用下相连，连接液转化至克隆宿主菌大肠杆菌如DHlOB或JM109，培养所得抗性菌株，从中提取质粒后，再转化至异源异源蛋白表达宿主菌。其中大肠杆菌BL2KDE3)是最为常用的宿主菌，其他的菌株一般为此菌株的衍生菌株。采用提取质粒再转化BL21(DE3)的两步法而非直接转化BL21(DE3)的原因在于后者的转化效率较低，一般低十倍以上。低效率使得获得目的突变的几率大大降低而不被采用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株高转化效率的大肠杆菌表达菌株，其特征在于，是将大肠杆菌异源蛋白表达菌株BL21(DE3)基因组中编码I型限制性内切酶的hsdR基因通过重组工程法敲除后而获得。

【技术特征摘要】
1.一株高转化效率的大肠杆菌表达菌株，其特征在于，是将大肠杆菌异源蛋白表达菌株BL21 (DE3)基因组中编码I型限制性内切酶的hsdR基因通过重组工程法敲除后而获得。2.如权利要求1所述的大肠杆菌表达菌株，是大肠埃希氏菌(Escherchiacoli)CGMCCN0.7123。3.权利要求1所述高转化效率的大肠杆菌表达菌株的构建方法，是指通过重组酶催化PCR所获得的线性片段和基因组上的...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚广东，石牡丹，王瑞青，李玲，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：