一种抗TOM22蛋白的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种能特异性结合线粒体Tom22蛋白的单克隆抗体及其在治疗肝病中的功用。该单克隆抗体稳定性好、特异性强。本发明专利技术提供了该抗体的可变区序列。本发明专利技术还提供了一种药物组合物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药
，具体而言本专利技术提供一种单克隆抗体，该抗体能特异识别线粒体中的Tom22蛋白；以及所述抗体在制备用于治疗肝脏疾病的药物中的应用，本专利技术还提供药物组合物，其包含所述单克隆抗体作为活性成分。
技术介绍
抗体作为疾病预防、诊断和治疗的制剂已有上百年的发展历史。随着基因工程抗体技术的发展和完善，抗体药物已从鼠单克隆抗体发展到人鼠嵌合抗体、人源化抗体及人源抗体。截至2010年美国FDA已批准超过40个抗体药物。此外还有超过120种抗体药物处于临床研究，超过500种抗体药物处于临床前研究。这些抗体主要应用于自身免疫性疾病、感染性疾病以及肿瘤的治疗。线粒体含有1000-2000种蛋白质，作为半自主性细胞器，其中，2%是由线粒体基因编码;98%的蛋白是由核基因编码的，它们经胞质核糖体合成后转运进入线粒体，每一种蛋白在特定位置才能发挥功效，所以定向的将蛋白质转运至线粒体的各部位十分重要。Tom复合体作为线粒体前体蛋白进入线粒体的门户，它调节未折叠的前体蛋白通过线粒体外膜。Tom复合体包括 核心亚基Tom40、Tom22、Tom5、Tom6和Tom7,以及外周亚基Tom20和Tom70。其中hTom22、Tom20以及Tom7是线粒体前体蛋白定位到线粒体上的受体；Tom40是Tom复合体的核心组成,形成了蛋白转运的通道(GIP) ;Tom5、Tom6和Tom7具有组装以及稳固Tom复合体的功能。它们各司其职，实现线粒体前体蛋白的转运。线粒体的不同前体蛋白的转运不是一个重复的过程，具有不同的路径，不同的机制，分别定位于外膜、内膜、基质以及膜间隙。高文祥等的“线粒体蛋白转运的研究进展”综述了有关转位分子介导的线粒体蛋白转运的研究进展，从不同复合物介导蛋白转运角度出发叙述线粒体前体蛋白的转运途径:Τ0Μ- Μ23介导内膜蛋白转运、Τ0Μ- Μ22介导内膜蛋白转运、TOM-SAM介导外膜蛋白转运、IMS蛋白转运以及OXAl复合物介导蛋白向外转运。孟紫强等的文章中简述了线粒体前体蛋白转运过程中的有意义部分:转运需要的能量、分子伴侣、线粒体前体蛋白的导肽、Tom复合体、Tim复合体以及位于膜间隙的异型多亚基蛋白质复合物的作用。而杨福愉的“蛋白质跨线粒体膜的运送”一文中从转送的目标位点出发，阐述了定位于基质蛋白质运输途径、定位于外膜的蛋白质运送途径、定位于膜间隙的蛋白质运输途径。hTom22是线粒体外膜上转运线粒体前体蛋白的重要组成成分。hTom22由三部分组成包括N-端、C-端以及虚拟存在的横跨膜。hTom22 N-端暴露在细胞溶质区域，富含84个酸性氨基，包括19个负电荷域以及9个正电荷域。这一区域主要是通过静电作用与线粒体前体蛋白带正电荷的导肽(含有将要到达线粒体部位的信息，致使线粒体前体蛋白准确定位)结合，是线粒体前体蛋白结合的受体领域之一。对于组装hTom22以及定位于线粒体外膜上hTom22正电荷域发挥着重要的作用，但是Court DA等提出hTom22的负电荷域却不是必需的成分，也不是线粒体前体蛋白的结合以及转运的必要成分。T0M22 N-端的转移膜螺旋束缚着Tom40的两个亚基，这样的作用并不影响线粒体前体蛋白的前序列。hTom22C-端即IMS功能域暴露在膜间隙区域具有将自身组装成Tom复合体以及转运前体蛋白的作用，但是对于前体蛋白的定位以及结合不是必需的组成部分。hTom22的MS功能域对于T0M22-TIM23前体蛋白三聚物的稳定性是必需的。hTom22的MS功能域和Tim23 N-末端50个氨基酸残基的片段可以促使前体蛋白由TOM复合物转运至 Μ23复合物。DEBORAH A.COURT通过中断方法使N.crassa的基因失活，使用遗传学的方法分析特定突变的等位基因。通过实验产生了 2种hTom22突变蛋白(缺乏2/3或者整个IMS)，发现hTom22的MS域不是hTom22组装成Tom复合体必须的组成部分,也不是线粒体前体蛋白的转运到线粒体的至关重要的组分，但是对于反式结合位点识别的前体蛋白的转运具有提高效率的作用。hTom22的IMS可以方便的将线粒体前体蛋白释放到线粒体外膜的脂质双分子中或是IMS，也是Tom复合体与线粒体内膜的接口。肝是人体内十分重要的器官，俗称“化工厂”，具有解毒以及代谢产物的作用。在Silvia Curado等的实验中，他们提出了 T0MM22突变体为肝再生提供了模型，是一个重要的脊椎动物的遗传模型，用来研究线粒体生物学和线粒体肝疾病。奥利弗突变体tom22s469在内胚层器官中高度的表达(如肝脏、肠)，是肝脏的特异性表型。他们在实验中使用tom22mo诱导肝细胞的凋亡以及吗啉反义寡核苷酸的方法抑制T0MM22基因的表达。当使用tom22mo处理肝时诱发肝细胞的凋亡，肝细胞中出现奥利弗突变体tom22s469。用吗啉反义寡核苷酸的方法抑制T0MM22基因的表达，使T0MM22基因瞬时中断。当T0MM22出现中断表达时，就会在tom22s469中出现肝细胞特异性再生表型并且可以达到野生水平并且在T0MM22恢复之时已经完成肝细胞的再生。T0MM22基因的临时中断对于成熟的肝细胞无影响。因此，我们可以发现，抑制T0MM22基因的表达或者抑制tom22蛋白的功能将有助于肝细胞和肝脏的再生恢复，本专利技术就是基于这个规律，筛选特异识别人源tom22蛋白的抗体，再运用该抗体来中和tom22蛋白的功能，从而为各种肝脏疾病患者的肝细胞再生提供一种新的治疗药物。 本专利技术的特色是运用重组表达的tom22蛋白膜外区直接在非免疫鼠源ScFv噬菌体表面呈现表达库中筛选。本专利技术提供的单克隆抗体命名为HX1，经过检测单克隆抗体对特异性识别结合tom22蛋白。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体可与Tom22蛋白特异性结合，从而可以用于制备治疗肝病的药物。具体地，本专利技术提供以下:1.一种单克隆抗体，其特征在于，它的重链可变区由120个氨基酸残基组成，序列如下:Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lyslie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys GlnAla Leu Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Asn Thr Gly Glu Pro ThrTyr Val Glu Glu Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Asp Thr Thr AlaTyr Leu Gln lie Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Val Arg AspGly Ser Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ala LysThr 编码重链可变区的cDNA序列为:gaggtgaagctt本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单克隆抗体，其特征在于，它的重链可变区由120个氨基酸残基组成，序列如SEQ?ID?NO：1所显示；其轻链可变区由108个氨基酸残基组成，序列如SEQ?ID?NO：2所显示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：安祺，
申请(专利权)人：北京和信非凡生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：