【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多重基因检测试剂盒及其检测方法,尤其是涉及一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
细胞色素P450 (CYP)酶系在药物代谢中占有极其重要地位。CYP2C19 (S-美芬妥英羟化酶)是CYP酶系中占主导地位的酶之一,其遗传多态性影响着许多临床药物的代谢,其活性存在明显的个体差异,对不同个体的药物治疗作用和不良反应及药物的毒性产生重要影响。FDA已将17种药物列入医生需要参考病人的CYP2C19的基因多态性信息用药。临床上CYP2C19基因多态性检测可以为个体化用药提供依据。目前,国内外已有多个CYP2C19基因型检测试剂盒,其主导方法为DNA微阵列芯片法。基因芯片是通过微加工技术,将数以万计、乃至百万计的特定序列的DNA片段(基因探针),有规律地排列固定于硅片、玻片等支持物上,构成的一个二维DNA探针阵列,利用这类芯片与标记的生物样品进行杂交,可对样品的基因表达谱生物信息进行快速定性和定量分析。DNA芯片:由于高通量等优点在SNP检测中得到大量应用,依靠野生型与突变型基因杂交动力学的差异对突变位点进行检测。其优点是I)高通量并行检测;2)操作简便快速:整个检测只需4-8小时基本可以出结果。但也存在如下缺点:1)不同SNP位点之间的杂交动力学差异不同,在进行多位点同时检测时条件难以控制;2)技术成本昂贵、复杂:每个样品需要一个芯片,成本大于Y1000/样品,不利于大规模推广;探针的合成与固定比较复杂,特别是制作高密度的探针阵列,是主要的限速步骤;3)重复性差,准确性低,易出现假阳性、假阴性结果;4)灵敏度较低:芯片法需 ...
【技术保护点】
一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒,包括超纯水、X溶液、10×PCR缓冲液,PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品,其特征在于所述的PCR引物包括以下CYP2C19基因上的3个SNP位点上的不同基因型的正反向扩增引物、DNA内参的正反向扩增引物及反应内参的正反向扩增引物,其基因序列如下表所示:其中,2*G/2*A表示该2号SNP位点有两种可能基因型G或A,两条反向引物分别指检测该SNP位点相应基因型G或基因型A的引物,在检测该SNP位点时两条引物要同时加到反应液中,3*G/3*A表示该3号SNP位点有两种可能基因型G或A;17*C/17*T表示该17号SNP位点有两种可能基因型C或T。
【技术特征摘要】
1.一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒,包括超纯水、X溶液、IOXPCR缓冲液,PCR引物、25mM氯化镁溶液、DNA聚合酶和阳性对照品,其特征在于所述的PCR引物包括以下CYP2C19基因上的3个SNP位点上的不同基因型的正反向扩增引物、DNA内参的正反向扩增引物及反应内参的正反向扩增引物,其基因序列如下表所示:2.根据权利要求1所述的一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒,其特征在于:包括三磷酸脱氧核苷酸和通用引物,所述的通用引物正向扩增弓I物序列为AGGTGACACTATAGAATA ;反向扩增引物序列为GTACGACTCACTATAGGGA,所述的通用引物正向扩增弓I物带荧光标记。3.根据权利要求1所述的一种CYP2C19基因多态性检测试剂盒,其特征在于:所述的阳性对照品为克隆到载体PMD18-T上的7个DNA片段和I个质粒pcDNA3.1 (+),所述的7个DNA片段分别为包含有SNP位点上rs4244285的G型基因和A型基因、rs4986893的G型基因和A型基因、rsl2248560的C型基因和T型基因及人类基因beta-globin的片段。4.一种利用权利要求1-3中任一项所述的CYP2C19基因多态性检测试剂盒的检测方法,其特征在于具体包括以下步骤: (1)DNA样品的收集和提取 将刮取到口腔上皮细胞的口腔拭子放入300y L DNA裂解缓冲液中,在恒温混匀仪中于95° C,IOOOrpm的条件下,处理5分钟后取出,室温放置至冷却,然后在样品中加入...
【专利技术属性】
技术研发人员:南丽,孙婷婷,吴勇,
申请(专利权)人:海尔施生物医药股份有限公司,
类型:发明
国别省市:
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