本发明专利技术公开了用于检测ALK-1基因突变的引物组，至少包括ALK-1基因第1到第10外显子区，3’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组和PCR测序引物组。本发明专利技术还公开了所述引物组的用途、包含所述引物组的试剂盒以及使用所述引物组对ALK-1基因进行PCR扩增方法。所述的引物组可以专一性鉴别ALK-1基因是否突变，确保了测定结果的准确性和唯一性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及引物，具体涉及用于检测ALK-1基因突变的引物组，本专利技术还涉及该引物组的用途，以及包含该引物组的试剂盒。
技术介绍
活化素受体激酶I (activin receptor type I1-like kinase-l, ALK-1 也称为ACVRL1)位于12qll_ql4，含10个外显子，基因组全长约15kb+。它突变能引起遗传性出血性毛细血管扩张症(hereditary hemorrhagic telangiectasia HHT)或遗传性肺动脉高压(heritable pulmonary arterial hypertension PAH)。有些突变携带者同时具有两种病症。HHT是一种常染色体显性遗传性出血性疾病，以皮肤黏膜多发性毛细血管扩张伴反复出血为特征，临床上一般可分为I型HHT和II型HHT两种表型。其中II型HHT由ALK-1基因 突变引起，HHT-1I最常见的临床表现为反复的自发性出血或轻度创伤出血，以鼻出血最常见，而临床处理却非常棘手。肺动脉高压是各种原因引起的静息状态下右心导管测得的肺动脉平均压(meanpulmonary arterial pressure, mPAP) ^ 25mmHg的一组临床病理生理综合征。肺动脉高压可以作为一种疾病而独立存在，更常见的是很多疾病进展到一定阶段的病理生理表现。由于肺血管重塑引起肺循环血流动力学改变，最终可导致右心衰竭，甚至死亡。这是一种极度恶性的疾病，七成多患者是年轻人，几乎每个人都知道癌症预后差，但没有人知道肺动脉高压室一种极度恶性疾病，它的病因复杂、发病率高、误诊率高、危害性强，其愈后是灾难性的，可以说，这种病就是心血管疾病中的癌症。这种疾病平均发病年龄是36岁，75%患者集中于20-40岁年龄段，还有15%患者年龄在20岁以下，几岁的孩子也会发病。世界上该病的发病率在I X 1(Γ5 I X ΙΟ—6之间，其中约6%为家族性的。目前，ALKl基因突变的肺动脉高压患者患病年龄比骨形成蛋白2 (BMPR2)基因突变的患者更加年轻化，一旦发病进展更加迅速，更加凶险。因此采用DNA检测寻找ALK-1基因突变有助于查清病因，识别家系中高风险的成员，以及未出生孩子的患病风险，这对提高人口素质，优生优育有重要的意义。对临床上指导用药，寻找病因，基因评估等具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种用于检测ALK-1基因突变的引物组。ALK-1基因的第I到第10外显子区，3’ UTR和启动子中的任意一个区域在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变，都视为ALK-1基因发生了突变。因而，根据ALK-1基因第I到第10外显子区，3’UTR和启动子序列分别设计出能专一性鉴别ALK-1基因是否突变的特异性引物组。可通过PCR扩增和测序测定ALK-1基因上述区域是否发生改变，以鉴定ALK-1基因是否发生突变。因此，本专利技术的用于检测ALK-1基因突变的引物组可以是ALK-1基因第I到第10外显子区、3’ UTR和启动子中任一区域对应的引物组。本专利技术第一个目的提供的用于检测ALK-1基因突变的引物组，包括ALK-1基因第I到第10外显子区，3’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，即选自ALK-1基因第I到第10外显子区、3’ UTR和启动子分别对应的PCR扩增引物组，具体地，所述引物组选自ALK-1基因的第I外显子区(Exonl)的PCR扩增引物组、第2外显子区(Exon2)的PCR扩增引物组、第3外显子区(Exon3)的PCR扩增引物组、第4外显子区(Exon4)的PCR扩增引物组、第5外显子区(Εχοηδ)的PCR扩增引物组、第6外显子区(Εχοη6)的PCR扩增引物组、第7外显子区(Εχοη7)的PCR扩增引物组、第8外显子区(ExonS)的PCR扩增引物组、第9外显子区(Εχοη9)的PCR扩增引物组、第10外显子区(ExonlO)的PCR扩增引物组、3’ UTR的PCR扩增弓丨物组和启动子的PCR扩 增弓丨物组中的任意一组，所述的上述各PCR扩增弓丨物组为表I所示。表1:ALK_1基因PCR扩增引物序列AT T, I ~引物~~ΓΓ门扩增产物长度ALK-1 _Γ1序列(5’—3’))予列表编14、 j予可(bp) PFI GCATCATTTCCGTCTATTCTCA SEQ ID NO.1,1---589 Ii im J■ PRTCTCCCGATCCGCACTCSEQ1DN0.2 (promcLci t PF2 ATACCCCTGTGCTGAGTGCSEQ IDN0.3 ----- 708 __PR2 AAATGTTTCTTATTCCAGCGTC SEQ ID N0.4__PF.3 GCTGGGCAATAGGAAACGSEQ 丨D NO.5Exonl---—-—- 71 b PR3 GGACTGATCTGGGAAAGGTG SEQ ID N0.6 PF4 TCATGGCTCTTACTCCACCTC SEQ ID N0.7 Exon^605 ^ PR4 TCATGGCTCTTACTCCACCTC SEQ ID N0.8 PF5 GAGGGACAGTAGGACAGAAATG SEQ ID N0.9Exon3---τ-7——— 569PR5 GCTGCTCCGAAGGAGGTTSEQ ID NO.1OExon4 PF6~ GCAGGACTCTGGGATCTAAC'T — SEQIDNOil60权利要求1.用于检测ALK-1基因突变的引物组，其特征在于，包括ALK-1基因的第I到第10外显子区，3’ UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，所述的PCR扩增引物组包括所述启动子的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的引物PFl 和具有SEQ ID NO. 2所示的核苷酸序列的引物PRl的引物组、具有SEQ ID NO. 3所示的核苷酸序列的引物PF2和具有SEQ ID NO. 4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物组；所述Exonl的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO. 5所示的核苷酸序列的引物PF3 和具有SEQ ID NO. 6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物组；所述Exon2的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO. 7所示的核苷酸序列的引物PF4 和具有SEQ ID NO. 8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物组；所述Exon3的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO. 9所示的核苷酸序列的引物PF5 和具有SEQ ID NO. 10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物组；所述Exon4的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO. 11所示的核苷酸序列的引物PF6 和具有SEQ ID NO. 12所示的核苷酸序列的引物PR6 ；所述Exon5的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO. 13所示的核苷酸序列的引物PF7 和具有SEQ ID NO. 14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物组；所述Exon6的PCR扩增引物组包括具有SEQ ID NO. 15所示的核苷酸序列的引物PF8 和具有SEQ ID NO. 16所示的核苷酸序列的引物P本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测ALK?1基因突变的引物组，其特征在于，包括ALK?1基因的第1到第10外显子区，3’UTR和启动子中任一区域对应的PCR扩增引物组，所述的PCR扩增引物组包括:所述启动子的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列的引物PF1和具有SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列的引物PR1的引物组、具有SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列的引物PF2和具有SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列的引物PR2的引物组；所述Exon1的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列的引物PF3和具有SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列的引物PR3的引物组；所述Exon2的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.7所示的核苷酸序列的引物PF4和具有SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列的引物PR4的引物组；所述Exon3的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列的引物PF5和具有SEQ?ID?NO.10所示的核苷酸序列的引物PR5的引物组；所述Exon4的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.11所示的核苷酸序列的引物PF6和具有SEQ?ID?NO.12所示的核苷酸序列的引物PR6；所述Exon5的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.13所示的核苷酸序列的引物PF7和具有SEQ?ID?NO.14所示的核苷酸序列的引物PR7的引物组；所述Exon6的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.15所示的核苷酸序列的引物PF8和具有SEQ?ID?NO.16所示的核苷酸序列的引物PR8的引物组；所述Exon7的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.17所示的核苷酸序列的引物PF9和具有SEQ?ID?NO.18所示的核苷酸序列的引物PR9的引物组；所述Exon8的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.19所示的核苷酸序列的引物PF10和具有SEQ?ID?NO.20所示的核苷酸序列的引物PR10的引物组；所述Exon9的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.21所示的核苷酸序列的引物PF11和具有SEQ?ID?NO.22所示的核苷酸序列的引物PR11的引物组；所述Exon10的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.23所示的核苷酸序列的引物PF12和具有SEQ?ID?NO.23所示的核苷酸序列的引物PR12的引物组；所述3’UTR的PCR扩增引物组:包括具有SEQ?ID?NO.24所示的核苷酸序列的引物PF13和具有SEQ?ID?NO.24所示的核苷酸序列的引物PR13的引物组、具有SEQ?ID?NO.25所示的核苷酸序列的引物PF14和具有SEQ?ID?NO.25所示的核苷酸序列的引物PR14的引 物组、具有SEQ?ID?NO.26所示的核苷酸序列的引物PF15和具有SEQ?ID?NO.26所示的核苷酸序列的引物PR15的引物组。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：卢文菊，张晨婷，王健，
申请(专利权)人：广州医学院第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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