一种STK11基因突变检测特异性引物和液相芯片制造技术

本发明专利技术公开了一种STK11基因检测特异性引物和液相芯片，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22；SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；SEQ?ID?NO.25及SEQ?ID?NO.26；SEQ?ID?NO.27及SEQ?ID?NO.28；SEQ?ID?NO.29及SEQ?IDNO.30；SEQ?ID?NO.31及SEQ?ID?NO.32；SEQ?ID?NO.33及SEQ?ID?NO.34；SEQ?ID?NO.35及SEQ?ID?NO.36；SEQ?ID?NO.37及SEQ?ID?NO.38；和/或SEQ?ID?NO.39及SEQ?ID?NO.40；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种STKll基因突变检测特异性引物和液相芯片。
技术介绍
目前，对STKll基因突变进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点 的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供STKll基因突变检测液相芯片。该液相芯片可用于单独或并行检测STKll基因十种常见基因型C109T、169delG、180delC、G196A、C508T、G511A、C842T、837delC、C910T和G996A的野生型和突变型。实现上述目的的技术方案如下一种STKll基因突变检测液相芯片，包括有(A).针对STKll基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为针对C109T位点的SEQ ID NO. 21及SEQ ID NO. 22 ;针对169delG位点的 SEQ ID NO. 23及 SEQ ID NO. 24 ;针对 180delC位点的 SEQ ID NO. 25及 SEQ ID NO. 26 ；针对 G196A 位点的 SEQID NO. 27 及 SEQ ID NO. 28 ;针对 C508T 位点的 SEQ ID NO. 29 及 SEQID NO. 30 ;针对 G51IA 位点的 SEQ ID NO. 31 及 SEQ ID NO. 32 ;针对 C842T 位点的 SEQ IDNO. 33 及 SEQ ID NO. 34 ;针对 837delC 位点的 SEQ ID NO. 35 及 SEQ ID NO. 36 ;针对 C910T位点的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ IDN0. 38 ;和 / 或针对 G996A 位点的 SEQ ID NO. 39 及 SEQ IDNO. 40 ;所述 tag 序列选自 SEQ IDN0.1 SEQ ID NO. 20 ；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID NO. 41 SEQ ID NO. 60，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。优选地，所述扩增引物为针对C109T、169delG、180delC或G196A位点的SEQ IDNO. 61 及 SEQ ID NO. 62 ;针对 C508T 或 G511A 位点的 SEQ ID NO. 63 及 SEQ ID NO. 64 ;针对C842T 或 837delC 位点的 SEQ ID NO. 65 及 SEQ ID NO. 66 ;针对 C910T 位点的 SEQ ID NO. 67及 SEQID NO. 68 ;和 / 或针对 G996A 位点的 SEQ ID NO. 69 及 SEQ ID NO. 70。优选地，所述ASPE引物为针对C109T位点的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO. 21组成的序列以及由SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 22组成的序列；针对169delG位点的由SEQIDN0. 3和SEQ ID NO. 23组成的序列以及由SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 24组成的序列；针对180delC位点的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 25组成的序列以及由SEQ ID NO. 6和SEQ IDN0. 26组成的序列；针对G196A位点的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 27组成的序列以及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 28组成的序列；针对C508T位点的由SEQ ID NO. 9和SEQ IDN0. 29组成的序列以及由SEQ ID NO. 10和SEQ ID NO. 30组成的序列；针对G511A位点的由 SEQ ID NO. 11 和 SEQ ID NO. 31 组成的序列以及由 SEQ ID NO. 12 和 SEQ ID NO. 32组成的序列；针对C842T位点的由SEQ ID NO. 13和SEQ ID NO. 33组成的序列以及由SEQID NO. 14 和 SEQ ID NO. 34 组成的序列；针对 837delC 位点的由 SEQ ID NO. 15 和 SEQ IDNO. 35组成的序列以及由SEQ ID NO. 16和SEQ ID NO. 36组成的序列；针对C910T位点的由 SEQ IDN0. 17 和 SEQ ID NO. 37 组成的序列以及由 SEQ ID NO. 18 和 SEQ ID NO. 38 组成的序列；和/或针对G996A位点的由SEQ ID NO. 19和SEQ ID NO. 39组成的序列以及由SEQID NO. 20和SEQ ID NO. 40组成的序列。本专利技术的另一目的是提供用于STKll基因突变检测的特异性引物。实现上述目的的技术方案如下用于STKll基因突变检测液的特异性引物，其为针对C109T位点的SEQ IDN0. 21及 SEQID NO. 22 ;针对 169delG 位点的 SEQ ID NO. 23 及 SEQ ID NO. 24 ;针对 180delC 位点的 SEQ IDN0. 25 及 SEQ ID NO. 26 ;针对 G196A 位点的 SEQ ID NO. 27 及 SEQ ID NO. 28 ;针对 C508T 位点的 SEQ ID NO. 29 及 SEQ ID NO. 30 ;针对 G511A 位点的 SEQ ID NO. 31 及 SEQID NO. 32 ;针对 C842T 位点的 SEQ ID NO. 33 及 SEQ ID NO. 34 ;针对 837delC 位点的 SEQID NO. 35 及 SEQ IDN0. 36 ;针对 C910T 位点的 SEQ ID NO. 37 及 SEQ ID NO. 38 ;和 / 或针对G996A 位点的 SEQ IDN0. 39 及 SEQ ID NO. 40。本专利技术的主要优点在于 1.本专利技术所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100%。且检测所需要的时间远远低于常用的测序技术，特别符合实际应用需要。所制备的STKll基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及ant1-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、ant1-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体ASPE引物的结合，能够避免交叉反应，实现多个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种STK11基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有：(A).针对STK11基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对C109T位点的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22；针对169delG位点的SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；针对180delC位点的SEQ?ID?NO.25及SEQ?ID?NO.26；针对G196A位点的SEQID?NO.27及SEQ?ID?NO.28；针对C508T位点的SEQ?ID?NO.29及SEQ?ID?NO.30；针对G511A位点的SEQ?ID?NO.31及SEQ?ID?NO.32；针对C842T位点的SEQ?ID?NO.33及SEQ?ID?NO.34；针对837delC位点的SEQ?ID?NO.35及SEQ?ID?NO.36；针对C910T位点的SEQ?ID?NO.37及SEQ?IDNO.38；和/或针对G996A位点的SEQ?ID?NO.39及SEQ?ID?NO.40；所述tag序列选自SEQ?IDNO.1～SEQ?ID?NO.20；(B).有anti?tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti?tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti?tag序列选自SEQ?ID?NO.41～SEQ?ID?NO.60，且所述anti?tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，甘丹翠，邹凤文，
申请(专利权)人：广州益善生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：