本发明专利技术内容提供了用于增强或提高多肽(如Taq聚合酶)稳定性的肽、多肽、融合多肽、组合物和方法。这些肽、多肽、融合多肽或组合物包括与能增强多肽稳定性的肽标签相连接的多肽。这些肽、多肽、融合多肽、组合物还可增强反应混合物中的其他多肽的活性、特异性和/或保真度。本发明专利技术内容还提供了使用这些肽、多肽、融合多肽、组合物的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与相关串请的交叉引用本专利申请要求提交于2009年11月19日的美国临时申请号61/262，919，提交于2010年6月I日的美国临时申请号61/350，457，提交于2010年6月18日的美国临时申请号61/356，541，以及提交于2010年10月7日的美国临时申请号61/390，857的权益，以上专利申请以全文引用的形式并入本文。
技术介绍
本领域需要能够增强蛋白质稳定性的方法和组合物。尤其需要能够增强聚合酶，如Taq聚合酶的稳定性，使其在短期或长期暴露于冰点以上的温度后仍然能够保持酶活性的组合物。本领域还需要能够提高聚合酶的保真度、敏感性和产率的组合物。
技术实现思路
本公开内容提供了肽、多肽、融合多肽、组合物以及方法，它们能使酶(如DNA聚合酶、RNA聚合酶、核酸酶、逆转录酶、DNA脱氨酶、RNA脱氨酶、蛋白酶)或者蛋白质(如促红细胞生成素、人白血病抑制因子(hLIF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、胰岛素、血管内皮生长因子(VEGF)、瘦素、贝伐珠单抗)在短期或长期暴露于约_20°C至约35°C的温度后仍保持活性。在一些实施方案中，本文所提供的肽、多肽、融合多肽或组合物能提高酶或蛋白质在室温下的稳定性。在一些实施方案中，本文提供的酶或蛋白质为任意核酸结合蛋白，例如，DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，其片段或其任意组合。在一些实施方案中，本文所提供的酶或蛋白质与其他蛋白质如激素受体结合。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物在_20°C到50°C之间的温度下保持活性。在一些实施方案中，多肽、融合多肽或组合物在_20°C和50°C之间的温度下保持酶活性或激素活性。在一些实施方案中，多肽、融合多肽或组合物在暴露于_20°C至50°C的温度后其酶活性或激素活性至少是暴露于所述温度之前的酶活性的50%。在一些实施方案中，本文所提供的肽标签提高多肽、融合多肽或组合物的稳定性。在一些实施方案中，肽标签稳定多肽、融合多肽或组合物。在一些实施方案中，肽标签抑制多肽、融合多肽或组合物的酶活性丧失。在一些实施方案中，肽标签抑制多肽、融合多肽或组合物的降解。在一些实施方案中，肽标签提高多肽、融合多肽或组合物的稳定性或抑制其酶活性丧失持续至少一天。在一些实施方案中，肽标签提高多肽、融合多肽或组合物的稳定性或抑制其酶活性丧失持续至少一周。在一些实施方案中，肽标签提高多肽、融合多肽或组合物的稳定性或抑制其酶活性丧失持续至少一个月。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物，较之不含本文所提供的肽标签的相似多肽，显现出增强的稳定性、酶活性或激素活性。在一些实施方案中，多肽、融合多肽或组合物所具有的酶活性或激素活性是不含本文所提供的肽标签的相似多肽的酶活性或激素活性的至少50 %、60 %、70 %、80 %、90 %或95 %。在一些实施方案中，多肽、融合多肽或组合物在暴露于_20°C至50°C的温度后，其酶活性或激素活性是不含本文提供的肽标签的相似多肽的酶活性或激素活性的至少50%、60%、70%、80%、90%或95%。在一些实施方案中，多肽、融合多肽或组合物在暴露于_20°C至50°C的温度后，其酶活性和激素活性比不含本文提供的肽标签的相似多肽的酶活性和激素活性高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或 200%。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种具有与SEQID NO 1至少70%相同的氨基酸序列的肽标签。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种具有与SEQ ID NO :1有50%至98%相同的氨基酸序列的肽标签。在一些实施方案中，肽标签具有如SEQ ID NO USEQ ID N0:13或SEQID NO :14所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，肽标签具有与SEQID N0:13或SEQ ID N0:14至少70%相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物含有一种与SEQIDN0:6、SEQ ID NO :8或SEQ ID NO :11至少70%相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物含有一种如SEQ ID NO 6, SEQ ID NO :8或SEQ IDNO: 11所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，融合多肽包含一种与SEQ ID NO=USEQ IDN0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16、SEQ IDNO 18,SEQ ID NO 20,SEQ ID NO :22至少70%相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物不具有如SEQ ID NO :2、SEQ ID NO 6或SEQ IDNO 11所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种由与SEQ IDNO :3或SEQ ID NO :15至少70%相同的核苷酸序列编码的肽标签。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种由SEQ ID NO :3或SEQ ID N0:15所示的核苷酸序列编码的肽标签。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种由与 SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 7 或 SEQ ID NO 12 至少 70%相同的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含由SEQIDNO :4、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO 7或SEQ ID NO 12所示的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种具有与SEQID NO :10至少70%相同的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种具有如SEQ ID NO :10所示的氨基酸序列的多肽。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种多肽，该多肽包含能与双链DNA结合的基序。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种由与SEQ IDNO 9至少70%相同的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，本文所提供的多肽、融合多肽或组合物包含一种由SEQ ID NO :9所示的核苷酸序列编码的多肽。在一些实施方案中，融合多肽包含一种由 SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :5、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 12,SEQ IDNO: 15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO :21 或 SEQ ID NO :23 编码的多肽。在一些实施方案中，本文所提供的融合多肽包含具有与SEQ IDNO :1有50%至98%相同的氨基酸序列的肽标签，以及至少一个多肽，其中该肽标签与所述至少一个多肽相连接，并且该肽标签在_20°C至50°C的温度下稳定融合多肽。在一个实施方案中，肽标签与所述至少一个多肽共价连接。在一个实施方案中，肽标签与所述至少一个多肽非本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：奥乐福·卡雷，卡德里·阿特玛，蒂纳·卡雷，
申请(专利权)人：索利斯拜欧代因公司，
类型：
国别省市：
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