具有抗氧化剂的细胞培养组合物和多肽生产方法技术

本发明专利技术提供包含抗氧化剂的细胞培养基、以及该培养基用于细胞培养和从细胞生产多肽的方法。本发明专利技术还提供包含由本文的方法生产的多肽，例如治疗性多肽的组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有抗氧化剂的细胞培养组合物和多肽生产方法相关专利申请的交叉引用本申请要求2013年3月15日递交的美国临时申请系列号61/799,602的优先权，其内容特此完整地并入此处作为参考。专利
本专利技术涉及包括抗氧化剂的细胞培养基，使用该培养基进行细胞培养和多肽生产的方法，以及包括由本文提供的方法所生产的多肽的组合物和试剂盒。
技术介绍
细胞培养生产技术被广泛用于生产基于蛋白质的产品，如治疗性蛋白质的药物制剂。基于蛋白质的产品，例如抗体产品的商业化生产，需要优化细胞培养参数，以便细胞产生足够的蛋白质产品来满足生产要求。然而，当优化细胞培养参数以提高蛋白质产品的生产率时，还需要保持该产品的期望品质属性，如糖基化谱，聚集物水平，电荷异质性以及氨基酸序列完整性(Lietal.,mAbs,2010,2(5):466-477)。另一个值得关注的品质属性是蛋白质产品的颜色。对于供人类使用的治疗产品的液体制剂，必须满足有关可接受颜色水平的监管要求(UnitedStatesPharmacopoeiaInc.,2000,p.1926-1927和CouncilofEurope.EuropeanPharmacopoeia,2008,7thEd.p.22)。因此，生产具有可接受的颜色的蛋白产品是治疗性蛋白生产的一个重要方面。最近向皮下递送诸如单克隆抗体的治疗性蛋白质的趋势伴随着所配制的蛋白物质的浓度增加，例如在约100mg/mL或以上的浓度(Daughertyetal.,AdvDrugDeliverRev,2006,58(5-6):686-706)。已经观察到组合物中治疗性蛋白质的增加量与组合物的颜色强度增加之间的相关性，导致这种关系的原因可能是：以前通过监控所配制产品的颜色强度的标准方法未能观察到的低水平的蛋白产品变体。氧化是蛋白质药物的主要化学降解途径。例如，甲硫氨酸、半胱氨酸、组氨酸、色氨酸和酪氨酸由于其与活性氧类别(ROS)的反应性而是易于氧化的氨基酸残基，在药物蛋白质制剂储存期间常观察到该氧化。虽然已知细胞培养条件可以影响蛋白质产品的品质属性(如生产足够用于大规模制造的量)，但尚不清楚这些条件对最终蛋白质产品的颜色强度的影响。持续需要提供生产具有可接受的产品品质属性(例如颜色强度)的蛋白质(例如，抗体)的改进的且成本有效的方法。具有以较低的颜色强度始终如一地递送蛋白质产品、同时保持所需蛋白质浓度(例如，≥100mg/mL)的组分的细胞培养基，无论是化学不确定的或化学确定的，都可以用于蛋白质产品，例如抗体的开发中。专利技术概述在一些方面，本专利技术提供培养包含编码多肽的核酸的细胞的方法，其中该方法包括使细胞与包含亚牛磺酸或其类似物或其前体的细胞培养基接触的步骤，其中相比于包含在不含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基降低包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度。在一些实施方案中，相比于包含在不含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低至少约0.1％。在一些实施方案中，相比于包含在不含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低约5％至约50％。在此的一些实施方案中，细胞培养基以至少约0.0001mM的浓度包含亚牛磺酸或其类似物或其前体。在此的一些实施方案中，细胞培养基以约0.0001mM至约500.0mM的浓度包含亚牛磺酸或其类似物或前体。在此的一些实施方案中，细胞培养基以约1.0mM至约40.0mM的浓度包含亚牛磺酸或其类似物或前体。在此的一些实施方案中，细胞培养基以约1.0mM至约10.0mM的浓度包含亚牛磺酸或其类似物或前体。在此的一些实施方案中，亚牛磺酸或其类似物或前体选自亚牛磺酸，s-羧甲基半胱氨酸，半胱胺，半胱亚磺酸和牛磺酸。在此的一些实施方案中，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基是化学确定的细胞培养基。在此的一些实施方案中，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基是化学不确定的细胞培养基。在此的一些实施方案中，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基是基础细胞培养基。在此的一些实施方案中，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基是补料细胞培养基。在此的一些实施方案中，细胞与包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基在细胞生长期相接触。在此的一些实施方案中，细胞与包含所述亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基在细胞生产期相接触。在此的一些实施方案中，亚牛磺酸或其类似物或前体在细胞培养周期的至少一天加入到细胞培养基中。在此的一些实施方案中，亚牛磺酸或其类似物或前体在14天的细胞培养周期的第0天加入到细胞培养基中。在此的任何实施方案中，亚牛磺酸或其类似物或前体可以在细胞培养周期的任一天添加到细胞培养基中。在此的一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞。在此的一些实施方案中，哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。在此的一些实施方案中，多肽是抗体或其片段。在其它方面，本专利技术提供培养包含编码多肽的核酸的细胞的方法，其中该方法包括使细胞与细胞培养基接触的步骤，其中细胞培养基包含组分(a)-(h)中的一种或多种：(a)亚牛磺酸；(b)s-羧甲基半胱氨酸；(c)肌肽；(d)鹅肌肽；(e)丁基化羟基苯甲醚；(f)硫辛酸；(g)槲皮苷水合物；及(h)氨基胍；并且其中相比于包含在不含所述组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基降低包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度。在一些实施方案中，相比于包含由在不含所述组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低0.1％。在一些实施方案中，相比于包含在不含所述组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低约5％至约75％。在一些实施方案中，相比于包含在不含所述组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低约5％至约50％。在此的一些实施方案中，包含组分(a)-(h)之一种或多种的细胞培养基以选自如下的量包括所述组分(a)-(h)之一种或多种：(a)至少约0.0001mM浓度的亚牛磺酸；(b)至少约0.0001mM浓度的s-羧甲基半胱氨酸；(c)至少约0.0001mM浓度的肌肽；(d)至少约0.0001mM浓度的鹅肌肽；(e)至少约0.0001mM浓度的丁基化羟基苯甲醚；(f)至少约0.0001mM浓度的硫辛酸；(g)至少约0.0001mM浓度的槲皮苷水合本文档来自技高网...

【技术保护点】
培养包含编码多肽的核酸的细胞的方法，其中所述方法包括使细胞与包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基接触的步骤，其中相比于包含在不含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度，包含亚牛磺酸或其类似物或前体的细胞培养基降低包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.03.15 US 61/799,6021.生产重组多肽的方法，包括在细胞培养基中培养包含编码所述多肽的核酸的细胞的步骤，其中所述细胞培养基包括组分(a)-(d)之一种或多种：
(a)亚牛磺酸；
(b)s-羧甲基半胱氨酸；
(c)丁基化羟基苯甲醚；和
(d)槲皮苷水合物；
并且其中相比于包含在不含所述组分(a)-(d)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(d)之一种或多种的细胞培养基降低包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度。


2.权利要求1的方法，其中相比于包含在不含所述组分(a)-(d)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(d)之一种或多种的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低至少0.1％。


3.权利要求1的方法，其中相比于包含在不含所述组分(a)-(d)之一种或多种的细胞培养基中培养的细胞所生产的多肽的组合物，包含组分(a)-(d)之一种或多种的细胞培养基使包含细胞所生产的多肽的组合物的颜色强度降低5％至50％。


4.权利要求1-3中任一项的方法，其中细胞培养基以选自以下的量包含组分(a)-(d)之一种或多种：
(a)至少0.0001mM的浓度的亚牛磺酸；
(b)至少0.0001mM的浓度的s-羧甲基半胱氨酸；
(c)至少0.0001mM的浓度的丁基化羟基苯甲醚；和
(d)至少0.0001mM的浓度的槲皮苷水合物。


5.权利要求4的方法，其中细胞培养基包含2.0mM至50.0mM浓度的亚牛磺酸。


6.权利要求4的方法，其中细胞培养基包含8.0mM至12.0mM浓度的s-羧甲基半胱氨酸。


7.权利要求4的方法，其中细胞培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·维贾亚桑克兰，S·J·迈耶，S·瓦尔马，Y·杨，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH