调节NF-κB的人遍在蛋白连接酶E3制造技术

本发明专利技术涉及调节NF-κB的人遍在蛋白连接酶E3。本发明专利技术提供了用于调节核因子κB(NF-κB)活化的组合物和方法。所述组合物包含一种或多种调节磷酰化IκBα和/或IκBβ的遍在蛋白化的物质。这些组合物可用于治疗与NF-κB活化相关的疾病。调节剂包括人E3遍在蛋白连接酶、其抗体及其变体以及相关蛋白。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术在总体上涉及用于调节核因子κ B (NF-κ B)活化的组合物和方法。本专利技术具体地涉及调节磷酰化ΙκΒα和/或ΙκΒβ的遍在蛋白化的物质，以及与NF- κ B活化相关的疾病的治疗方法。本专利技术所使用的调节剂包括Ε3遍在蛋白连接酶、其部分及其变体。
技术介绍
NF-K B是ー种转录因子，它在针对免疫、炎症及急性期的应答基因(包括白细胞介素I、白细胞介素8、肿瘤坏死因子和某些细胞粘附分子)所观察到的基因表达的高特异 模式中起关键作用。如同转录激活因子Rel家族的其他成员，NF-κ B以非活化形式被隔离在大多数细胞类型的胞质中。包括促细胞分裂原、细胞因子、抗原、应激诱发剂、UV光和病毒蛋白在内的多种细胞外刺激物引发信号转导途径，该途径最终导致NF-κ B的释放和活化。重要的NF- κ B活化调节剂是抑制剂蛋白I κ B α和I Κ B β(在此称作I κ B)，它们与未受激细胞的胞质中的NF-κ B结合(并因此失活)。在发生信号引导的I κ B磷酰化之后，发生NF-κ B的活化和核易位，这导致经遍在蛋白途径发生蛋白质的水解。对于I κ Ba，刺激诱发的在第32和36位丝氨酸上的磷酰化使所述抑制剂成为在第21和22位赖氨酸上遍在蛋白化的目标靶，而这将导致降解。与之相似，I κ Ββ在第19和23位丝氨酸上的磷酰化使所述抑制剂成为在第9位赖氨酸上遍在蛋白化的目标靶。然而，还没有鉴定出介导I κ B识别的遍在蛋白系统的成分。蛋白经遍在蛋白途径的降解通过两个非连续和连续步骤进行(a)多个遍在蛋白分子共价附着到蛋白底物上，和(b)通过26S蛋白体复合物降解靶蛋白。遍在蛋白途径包含了多种成分，这些成分以分级方式共同发挥作用(综述參见Ciechanover, Cell 79 :13,1994 ；Hochstrasser,Curr. Op. Cell. Biol. 7 215,1995 ；Jentsch and Schlenker,Cell 82:881.1995；Deshaies, Trends Cell Biol. 5 :428，1995)。单ー El 酶是ー个这样的成分，它进行遍在蛋白的激活。在哺乳动物细胞、植物和酵母中分析表征了ー些主要的E2酶。E2酶可能与连接酶 E3 结合(Reiss and Hersko, J. Biol. Chem. 265 :3685,1990 ；Dohmen etal.，Proc. Natl, Acad, Sci. USA 88 :7351,1991)，似乎每种 E2 酶都能与ー种或多种 E3 蛋白作用(Nuber et al.，J. Biol. Chem. 271 :2795,1996 ；Orian et al.，J. Biol. Chem. 270 21707.1995；Stancovski et al. , Mol.Cell. Biol. 15 :7106,1995 ；Gonen et al. , J.Biol.Chem. 271 302,1996)。已经被描述过的E3酶(遍在蛋白连接酶)很少。哺乳动物E3 α (酵母中的UBR1)和Ε3β通过它们的游离N端氨基酸残基来识别蛋白底物(“N末端规则”;Varshavsky,Cell 69 725,1992 ；Hershko and Ciechanover, Ann. Rev.Biochem. 61 :761,1992)。Cdc53可能是ー种參与靶向磷酰化Gl细胞周期蛋白的E3(Willems et al. ,Cell 86:453,1996)。E6-AP 參与对 p53 的识别(Scheffner et al. , Cell 75 :495，1993)，已经鉴定了一系列独特的 E6-AP 同源蛋白(Huibregtse et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:2563,1995)Nedd4 參与上皮 Na+通道的降解(Staub et al, Embo J. 15 :2371，1996)，RSP5 (NIPl)参与通透酶 Gapl 和 Furl 的不踪(Hein et al.，Mol. Microbiol. 18 :77,1995)，而 Publ 革巴向Cdc25 (Nefsky and Beach, EMBO J. 15 :1301,1996) 最近分离的ー些其他 E3 酶似乎參与肌蛋白 c-Fos 的降解，并參与 NF-κ B 前体 pl05 的加工(Orian et al. , J. Biol. Chem. 270 21707,1995；Stancovski et al. , Mol.Cell. Biol. 15 :7106,1995 ；Gonen et al. , J.Biol.Chem. 271 :302，1996)。因此看来，所述连接酶是个大的且其中大部分未阐明的酶家族，并且，除了“ N末端规则”连接酶(Ε3α和Ε3β)的识别方式之外，尚没有鉴定出遍在蛋白系统的所有其他已知底物的识别基元。因此，本领域需要提高对I κ B经遍在蛋白途径降解的理解，并需要鉴定出此降解过程的调节剂，以将其用于治疗与NF-κ B活化相关的疾病。本专利技术满足了这些需 要并进ー步提供其他有关优势。专利技术概述简要地说，本专利技术提供通过调节磷酰化I κ Ba和/或ΙκΒβ的遍在蛋白化而调节核因子kB(NF-kB)活化的组合物和方法。一方面，本专利技术提供了分离的人Ε3遍在蛋白连接酶多肽。这些多肽可包括SEQ ID NO :16所示的人Ε3遍在蛋白连接酶序列、其部分或者其变体，所述变体的区别在于一个或多个氨基酸的替换、插入、缺失和/或添加，以致多肽(a)增强了磷酰化I κ B的遍在蛋白化作用或者(b)与磷酰化I κ B结合并抑制磷酰化I κ B的遍在蛋白化作用。在某些实施方案中，这样的一个多肽可具有SEQ ID Ν0:16或所示的序列其变体，该变体的区别在于在不超过20%的SEQ ID NO 16氨基酸残基上发生ー个或多个氨基酸的缺失、插入或替换，以致多肽增强了磷酰化I κ B的遍在蛋白化作用。在进ー步的实施方案中，这样的一个多肽可包括人Ε3遍在蛋白连接酶的一部分或这一部分的变体，其中所述部分与磷酰化I κ B结合并抑制磷酰化I κ B的遍在蛋白化作用。另ー方面，本专利技术进一歩提供分离的编码上述多肽的多核苷酸。在某些实施方案中，这样的多核苷酸可编码上述人Ε3遍在蛋白连接酶的一部分或这一部分的变体。也提供了包含与所述多核苷酸互补的至少10个连续核苷酸的反义多核苷酸。进ー步提供了包含所述多核苷酸的表达载体以及用该表达载体转化或转染的宿主细胞。本专利技术更进ー步提供包含与生理上可接受的载体相结合的上述多肽或多核苷酸的药物组合物。此外，本专利技术提供分离的抗体及其抗原结合片段，它们和具有SEQ ID NO 16所示序列的人Ε3遍在蛋白连接酶相结合。这样的抗体可以是单克隆抗体。本专利技术更进ー步提供包含与生理上可接受的载体相结合的上述抗体或片段的药物组合物。本专利技术进ー步提供调节患者NF-κ B活性的方法,包括给患者施用上述药物组合物。更进一歩，本专利技术提供治疗患有与NF-κ B活化相关的病症的患者的方法，包括给患者施用治疗有效本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有SEQ？ID？NO：16所示序列的分离的多肽或其变体，该变体的区别在于在不超过20％的SEQ？ID？NO：16中的氨基酸残基上发生一个或多个氨基酸的缺失、插入或替换，以致多肽增强磷酰化的IκB的遍在蛋白化作用。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：安东尼·M·曼宁，弗兰克·默丘里奥，沙伦·阿米特，伊农·本内里艾，马蒂·戴维斯，埃达·哈楚拜，艾里斯·拉万，亚伯拉罕·亚龙，
申请(专利权)人：信号药物公司，耶路撒冷希伯来大学伊萨姆研究发展公司，
类型：发明
国别省市：