双特异性、四价抗原结合蛋白、其生成方法、含有所述抗体的药物组合物、及其用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性、四价抗原结合蛋白本专利技术涉及双特异性、四价抗原结合蛋白、其生成方法、含有所述抗体的药物组合物、及其用途。
技术介绍
经工程化改造的蛋白质，诸如能够结合两种或更多种抗原的双或多特异性抗体是本领域中已知的。可以使用细胞融合、化学缀合、或重组DNA技术来生成此类多特异性结合蛋白。最近已经开发出极其多种重组多特异性抗体形式，例如通过融合例如IgG抗体形式和单链域得到的四价双特异性抗体(参见例如Coloma, M. J.等，Nature Biotech. 15(1997) 159-163 ；W0 2001/077342 ；及 Morrison，S. L.，NatureBiotech. 25(2007) 1233-1234)。还有，已经开发出能够结合两种或更多种抗原的数种其它不再保留抗体核心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)的新形式,诸如双抗体、三抗体或四抗体、微型抗体、数种单链形式(scFv、双-scFv) (Holliger, P.等，Nature Biotech 23(2005) 1126-1136;Fischer, N.和 Leger, 0.，Pathobiology 74(2007)3-14 ；Shen, J.等，J. Tmmunol. Methods318(2007)65-74 ；ffu, C.等，Nature Biotech 25(2007) 1290-1297)。所有此类形式使用接头来融合抗体核心(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)与别的结合蛋白(例如scFv)或者融合例如两个Fab片段或scFv(Fischer,N.和L6ger,0. ,Pathobiology74(2007)3-14)。虽然接头在工程化改造双特异性抗体方面具有优点是明显的，但是它们还可以引起治疗背景中的问题。实际上，这些外来肽可以引发针对接头自身或蛋白质与接头 间的接合的免疫应答。此外，这些肽的柔性性质使它们更易于蛋白水解切割，这潜在地导致较差的抗体稳定性、聚集和升高的免疫原性。另外，可能想要保留效应器功能，诸如例如补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，其是经由Fe部分通过维持与天然存在的抗体的高度相似性来介导的。如此，理想地，应当旨在开发在一般结构上与天然存在的抗体(如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)非常相似的双特异性抗体，其与人序列具有最小的偏离。在一种方法中，已经使用四源杂交瘤(quadroma)技术(参见Milstein, C.和Cuello,A. C. ,Nature 305(1983)537-540)来生成与天然抗体非常类似的双特异性抗体，所述四源杂交瘤技术基于两种不同的表达具有期望的双特异性抗体特异性的鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞系的体细胞融合。由于所得的杂合-杂交瘤(或四源杂交瘤)细胞系内的两种不同抗体重链和轻链的随机配对，生成多达10种不同抗体种类，其中仅一种是期望的功能性双特异性抗体。由于错配副产物的存在和显著降低的生产产量，意味着需要复杂的纯化规程(参见例如 Morrison，S. L.，Nature Biotech. 25 (2007) 1233-1234)。一般地，若使用重组表达技术，则仍存在相同的错配副产物问题。一种避开错配副产物问题的方法(其称为“隆突-入-穴(knob-into-hole)”)旨在通过将突变引入CH3域中来修饰接触界面，从而迫使两种不同抗体重链配对。在一条链上，用具有较短侧链的氨基酸替换体积大的氨基酸以创建“穴”。相反地，将具有较大侧链的氨基酸引入另一种CH3域中，以创建“隆突”。通过共表达这两种重链(和两条相同的轻链，其必须适合于这两种重链)，观察到异二聚体形成(“隆突-穴”)相对于同二聚体形成(“穴-穴”或“隆突-隆突”)的高产量(Ridgway,J. B.等，Protein Eng. 9 (1996) 617-621 ；及TO 96/027011)。可以通过使用噬菌体展示法来重建两种CH3域的相互作用表面并引入二硫桥以稳定化异二聚体来进一步提高异二聚体的百分比(Merchant A.M等，NatureBiotech 16 (1998) 677-681 ;Atwell，S.等，J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35)。关于隆突-入-穴技术的新方法记载于例如EP I 870 459 Al。虽然此形式似乎非常有吸引力，但是目前不可获得描述通向临床的进展的数据。此策略的一种重要的约束是两种亲本抗体的轻链必须相同，以阻止错配和无活性分子的形成。如此，此技术不适合于容易地开发自针对第一和第二抗原的两种抗体起始的针对两种抗原的重组双特异性抗体，因为这些抗体的重链和/或相同的轻链必须是优化的。在替代二价、双特异性抗体，例如通过将额外的Fab片段(每个与结合第一或第二抗原的相应抗体的Fab片段相同)融合至异二聚体的每个重链C端来表达四价双特异性抗体时仍然有相同的错配问题(参见图2)。WO 2006/093794涉及异二聚蛋白结合组合物。WO 99/37791描述了多用途抗体衍生物。Morrison, S. L.等 the J. Immunolog, 160 (1998) 2802-2808 指出可变区域交换对 IgG功能特性的影响。专利技术概述本专利技术包含双特异性、四价抗原结合蛋白，其包含a)第一抗体的经修饰的重链，所述第一抗体特异性结合第一抗原，且另外将所述第一抗体的VH-CHl域经由其N端融合至所述重链的C端；b) a)的所述第一抗体的两条轻链；c)第二抗体的经修饰的重链，所述第二抗体特异性结合第二抗原，其中CHl域被所述第二抗体的CL域替换，且另外将所述第二抗体的VH-CL域经由其N端融合至所述重链的C端；和d)c)的所述第二抗体的两条经修饰的轻链，其中CL域被所述第二抗体的CHl域替换。本专利技术的别的实施方案是一种用于制备依照本专利技术的抗原结合蛋白的方法，包括下列步骤a)用包含编码依照本专利技术的双特异性抗原结合蛋白的核酸分子的载体转化宿主细胞，b)在容许所述抗体分子合成的条件下培养所述宿主细胞；并c)自所述培养物回收所述抗体分子。本专利技术的别的实施方案是一种宿主细胞，其含有包含编码依照本专利技术的抗原结合蛋白的核酸分子的载体。本专利技术的别的实施方案是一种药物组合物，其包含依照本专利技术的抗原结合蛋白和至少一种药学可接受赋形剂。本专利技术的别的实施方案是一种用于治疗需要治疗的患者的方法，其特征在于对所述患者施用治疗有效量的依照本专利技术的抗原结合蛋白。依照本专利技术，可以通过在c)下的经修饰的重链中用CL域替换CHl及在d)下的相应的两条经修饰的轻链来改善期望的双特异性、四价抗原结合蛋白与不期望的副产物相比的比率。因此，可以降低(b的)特异性结合两个第一抗原的抗体轻链与特异性结合两个第二抗原的抗体的(c的)经修饰的抗体重链的错误VH-CHl域的不期望的错配。并且类似地，d)的经修饰的轻链与a)的重链的错配。(参见没有这些修饰和错配的图2和具有这些CHl-CL替换(或交换)及没有错配的图3)。专利技术详述本专利技术包含双特异性、四价抗原结合蛋白，其包含a)第一抗体的经修饰的重链，所述第一抗体特异性结合第一抗原， 且另外将所述第一抗体的VH本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：S伊姆霍夫琼格，C克莱恩，JT雷古拉，W谢弗，JM尚泽，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：
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