EphA3抗体制造技术

本公开内容涉及高亲和力的EphA3抗体以及使用此类抗体的方法，当将其给予人体时可减少免疫原性以治疗疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】EphA3抗体相关申请的交叉引用本申请要求2009年10月14日提交的美国临时专利申请第61/251，668号的权益，通过引用将该临时申请并入本文。
技术介绍
Eph受体酪氨酸激酶(Ephs)属于使酪氨酸残基上的蛋白磷酸化的激酶——受体酪氨酸激酶(RTKs)的大群体。Ephs与它们的膜结合ephrin配体(ephrins)控制着细胞定位和组织结构((Poliakov, A.等，Dev Cell 7:465-80(2004))。与其他的受体酪氨酸激、酶相比，Eph受体活化不仅需要配体结合及ニ聚化而且还涉及预先形成的配体寡聚物。因此，Eph受体的酪氨酸磷酸化需要ephrin配体以它们聚合的或膜附着的形式呈递(Davis等，Science266:816-819 (1994))。功能性和生物化学的Eph反应都发生在较高的配体寡聚化状态下(Stein 等，Genes Dev 12:667-678(1998))。除了其他的模式功能以外，已证实各种Ephs和ephrins在血管发育中发挥作用。也已观察到下调ー些印hrins和它们的受体在成年人中的再出现可促进肿瘤侵袭、转移及血管新生。例如，显性抑制的、可溶的EpbA2或A3蛋白显现出在体外对ephrin诱导的内皮细胞功能的作用以及在体内对肿瘤血管生成和进展的作用(Nakamoto 等，Microsc Res Tech 59:58-67(2002);Brantley-Sieder 等，Curr PharmDes 10:3431-42(2004);Brantley 等，Oncogene 21:7011-26(2002);Cheng 等，Neoplasia5:445-56 (2003). Dobrzanski 等，Cancer Res 64:910-9 (2004))。而且已发现 Eph 家族成员在来源于各种各样的人实体肿瘤的肿瘤细胞上过表达(Brantley-Sieders等，Curr PharmDes 10:3431-42(2004) ; Marme, D. Ann Hematol 81 Suppl 2: S66 (2002) ; Booth, C 等，NatMed 8:1360-1(2002))。也已报道在慢性骨髓性白血病(CML)患者的加速期及急性转化期Epha3在CD34+细胞上被活化并过表达(Cilloni 等，American Society ofHematology, Abstract1092，2008 (2008年11月14日网上可见))。Cilloni等报道了当将原代CML细胞或EphA3转染的正常细胞与特异性单克隆抗体孵育时，该抗体诱导原代细胞和转染细胞增殖的显著減少，減少集落生长并且诱导粘附特性的改变。该抗体在正常对照细胞或来源于慢性期CML患者的细胞中没有诱导任何的显著改变。本专利技术部分地基于新的抗EphA3抗体的发现。专利技术概述本专利技术涉及有效的抗EphA3抗体以及使用此类抗体的方法，例如，用于治疗涉及EphA3的疾病。本专利技术的抗体具有如本文所述的特征。因此，在一方面，本专利技术的抗体包含Vh区(重链可变区)，所述Vh区包含⑶R3，所述⑶R3包含氨基酸序列X1GX2YEX3FDX4，其中X1为S或G，X2为Y或V，X3为E或D，以及X4为S、V或I，附加条件是当氨基酸序列为SGYYEDFDS时，⑶Rl不是SYWIN，并且当氨基酸序列为SGYYEEFDS时，⑶Rl不是TYWIS。在一些实施方案中，抗体具有包含氨基酸序列 GGYYEDFDS、SGYYEEFDS、SGVYEDFDS、SGYYEDFDV 或 SGYYEDFDI的CDR3。在一些实施方案中，抗体具有J区段，其包含与人生殖细胞系J区段氨基酸序列的至少80%、通常85%或至少90%同一性，或其与人生殖细胞系J区段在不超过两个位置不同；以及V区段，其包含与人生殖细胞系V区段氨基酸序列的至少80%、通常至少85%和优选90%或更高的同一性。在一些实施方案中，J区段包含与人JH6氨基酸序列的至少90%同一性并且V区段包含与人VHl 1-02氨基酸序列的至少90%同一性。在一些实施方案中，抗体具有包含WGQGTTVTVS的FR4或与WGQGTTVTVS不超过I个氨基酸不同的FR4。在ー些实施方案中，抗体包含如图I中列出的Vh区所示的VHCDRl、_VfDR2、_ VfDRl与VfDR2 ニ 者。例如，本专利技术的抗体可具有Vh⑶Rl和/或⑶R2，所述Vh⑶Rl包含氨基酸序列GYWMN、TYffIS 或 SYWIN，所述 CDR2 包含氨基酸序列 DIYPGSGNTNYDEKFQG、DIYPGSGNTNYAQKFQG、DIYPGSGNTNYAQEFRG、DIYPGSGNTNYAQKFLG、DIYPGSGNTNYDEKFEG 或 DIYPGSGNTNYDEKFKR。在一些实施方案中，抗体具有VfDRl GYWMN和⑶R2DIYPGSGNTNYDEKFQG。在一些实施方案中，抗体具有Vh CDRl TYWIS和 Vh CDR2DIYPGSGNTNYAQ(Κ/E)F(Q/R/L)G。在一些实施方案中，本专利技术的抗体具有来自于如图I中所示的V区的其中之一的VhCDRI XDR2和⑶R3。在ー些实施方案中，抗体具有图I中所示的V区段序列的VhV区段氨基酸序列。在一些实施方案中，Vh具有图I中所列出的Vh区的序列。本专利技术也提供了具有\区的抗体，所述\区包含具有序列X1X2YX3X4YPYT的⑶R3结合特异性决定簇，其中X1为G、V或A ;X2为Q、R或G ;X3为A、S或L ;以及X4为N或K。在一些实施方案中，CDR3 包含 GQYANYPYT、VQYAKYPYT、AQYANYPYT、VQYSNYPYT、VQYANYPYT、VGYANYPYT、VRYANYPYT 或 VQYLNYPYT。在一些实施方案中，当 CDR3 为 VQYANYPYT 时，CDRl 不是 RASQEISGYLG 或 RASQG11SYLA和/或 CDR2 不是 AASTLDS 或 AASSLQS。在一些实施方案中，Vl区包含J区段，其包含与人生殖细胞系J区段氨基酸序列的至少80%、通常85%或90%同一性，或其与人生殖细胞系区段在不超过两个氨基酸不同；以及V区段，其包含与人生殖细胞系V区段氨基酸序列的至少80%、通常至少90%或更高的同一性。在一些实施方案中，J区段相对于来源于人生殖细胞系Jk 2氨基酸序列的序列FGQGKLEIK，具有不超过两个氨基酸的改变，经常不超过I个氨基酸的改变，并且V区段包含与人生殖细胞系J K I L15氨基酸序列的至少90%同一性。在一些实施方案中，抗体的FR4具有氨基酸序列FGQGKLEIK或相对于序列FGQGKLEIK有不超过I个氨基酸残基的改变。在一些实施方案中，ん区包含图I中所示的\区序列的CDR1、或CDR2、或CDRl与CDR2 二者。例如，CDRl可具有序列RASQGIISYLA、QASQDISTYLN、RASQEISGYLG 或 RASQSISSYLA ;和/或 CDR2 可具有序列 AASSLQS、GASSLQS、AASSLQR或AASTLDS序列。在一些实施方案中，CDRl具有序列RASQGI本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：肯尼思·鲁尔森，大卫·马迪尼兹，克里斯蒂娜·伊，克里斯托弗·R·贝炳东，杰弗里·T·亚兰东，
申请(专利权)人：卡罗拜奥斯制药公司，
类型：发明
国别省市：