提供疾患特异性结合分子和靶的方法技术

提供疾患特异性结合分子和靶的方法，本发明专利技术提供了识别疾患相关蛋白新表位的新的特异性结合分子、特别是人抗体及其片段、衍生物和变体，所述疾患相关蛋白来自天然的内源蛋白，但在患者体内以变体形式和／或脱离其正常生理环境普遍存在。另外，描述了包含此类结合分子、抗体及其模拟物的药物组合物和筛选治疗诸如阿尔茨海默病的神经疾病的新的结合分子（可以是或可以不是抗体）和靶的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及识别蛋白的疾患相关表位(包括新表位)的新的特异性结合分子， 特别是人抗体及其片段、衍生物和变体，所述蛋白来自天然的内源蛋白，并且在患者体内以变体形式和/或脱离其正常生理环境普遍存在。另外，本专利技术涉及包含此类结合分子、抗体及其模拟物的药物组合物和筛选治疗各种疾病、特别是神经疾病(诸如阿尔茨海默病、淀粉样蛋白病和￠-淀粉样蛋白病变)的新的结合分子(可以是或可以不是抗体)、靶和药物的方法。
技术介绍
成功产生单克隆抗体依赖于抗原刺激的B细胞与鼠骨髓瘤细胞系的有效和选择性融合，然后选择产生杂交体的稳定的抗体，最初描述于K 0 hler和Milstein，Nature 256 (1975)，495-497。然而，鉴于其非人来源，基于鼠的抗体在人中的治疗效用受限于人抗鼠抗体(HAMA)应答。通过遗传工程可获得用于制备人或类人单克隆抗体的方法。然而，迄今可用的方法具有以下缺点它们不适合用来产生具有在生理的人类免疫应答过程中产生的抗体的特征的抗体。此外，由于在具有正常生理功能的情况下与其他蛋白和/或靶蛋白的交叉反应性，此类抗体可能不够特异。例加，在阿尔茨海默病或帕金森病中，认为还以高亲和力与淀粉样前体蛋白(APP )或a突触核蛋白的生理衍生物交叉反应的抗体表现出与生理靶结构的正常功能相关的副作用。在这方面，不希望的自身免疫病将完全被诱导一一种在采用生理上也存在变体形式的蛋白结构的主动免疫实验的方案设计中几乎不可估算的危险。与靶结构无关的副作用是例如过敏反应，其被预期为系统性施用外源蛋白的不希望的和可怕的副作用。根据近来的发现，在最初来自非人生物(通常来自小鼠)的所谓人源化抗体中也能发生这种情况。另一方面，病理相关抗原的主动免疫具有相当大的患者发展也识别此类蛋白的生理变体的抗体和T细胞应答的危险，并且因此导致危险的和不可控制的自身免疫应答。因此，需要提供特异于疾病涉及的靶并被人体耐受的物质。
技术实现思路
专利技术概述本专利技术的一个目的是一种用于鉴定、验证和产生诊断上和治疗上有用的结合分子，特别是针对内源蛋白的病理变体的抗体的方法。更具体地，本专利技术涉及分离疾患相关蛋白特异性结合分子的方法，其包括(a)使获自无症状，或临床上异常稳定，但患有疾病或处于发展疾病危险的患者的样品经受具有预定病理特征的病理改变的细胞或组织的试样；和(b)鉴定并任选地分离与所述试样结合，但不与可来自健康对象的没有此类病理特征的对应细胞或组织结合的结合分子。已知的事实是，在自身免疫病中，抗体针对自体细胞和由所述细胞表达的蛋白或诸如糖脂的其他化合物，同时避开已知的耐受机制。同样已知的事实是，在内源赘生性发展中，赘生性细胞的细胞和体液免疫可发展，并且因此可影响针对赘生性组织变性的内源免疫保护机制。本专利技术利用抗体也可针对内源蛋白的病理生理相关变体，特别是针对新表位的惊人发现，所述新表位是由于病理改变的转录、翻译、或转录后或翻译后修饰、或蛋白酶解加工、或聚集而形成的。此类抗体针对由于其偏离正常生理的新结构通过发展病理效应而变得与病理生理相关的内源蛋白。然而，由于免疫耐受，在此类病理变体中与对新表位的对应免疫应答有关的抗体未正常表现出针对生理功能性蛋白的任何交叉反应，这与自身免疫病中的情况相反。这是因为潜在交叉反应性抗体的形成被已知的耐受机制特异地抑制， 而对病理新表位的免疫应答的发展可逃避耐受。因此，本专利技术涉及通过与可识别病理结构的相互作用而从临床上预选的人类对象中鉴定诊断上、治疗上和预防上有活性的结合分子，特别是抗体和抗体片段的新方法。因此，本专利技术涉及能识别疾患相关蛋白的表位(包括新表位)的抗体或抗原结合片段和相似的抗原结合分子，所述疾患相关蛋白来自天然的内源蛋白，并且在患者体内以变体形式(例如作为病理蛋白)和/或脱离其正常生理环境普遍存在。此外，本专利技术涉及包含所述抗体的组合物，以及使用该组合物的免疫治疗和免疫诊断方法。此外，在抗体鉴定中，根据本专利技术的方法可无需事先假设其分子靶结构的身份，而只是通过其与病理相关结构的结合来执行。除了因此可能鉴定迄今未知的、特定疾患的分子靶结构外，专门针对病理结构的抗体的进一步优势基于它们的药物动力学有效性不受与非疾患组织结合以使抗体的浓度和吸收效应被缓冲因此妨碍治疗有效浓度的确定的方式负面影响的事实。此外，本专利技术的抗体和结合分子优选特征在于它们分别在体内与疾患相关蛋白的变体形式或与细胞或细胞膜反应，并且在具有病理特征的疾患组织的切片上，但不与或显著更少程度地与同族蛋白的生理变体反应；还参见，例如，实施例2。由于本专利技术允许在疾患细胞和组织中鉴定和分离分子靶结构，进一步的实施方案分别涉及由本专利技术的新表位特异抗体结合的抗原和病理蛋白(即疾患相关蛋白)。特别优选的实施方案是证明特征为下文表2和3所述的可变区Vh和/或\ 的任一抗体的免疫结合特征的人抗体或其抗原结合片段。可选地，抗体是人源化、异源、或嵌合人一鼠抗体，后者特别用于动物的诊断方法和研究。包括抗体或其活性片段、或激动剂和同族分子、或可选地(alternately)其拮抗剂的治疗性组合物、此类组合物在使用这些组合物预防、诊断或治疗疾患中的用途方法也包括在本专利技术中，其中将有效量的组合物施用于需要此类治疗的患者。抗体的抗原结合片段可以是单链Fv片段、F(ab’)片段、F(ab)片段和F(ab’)2 片段、或任何其他抗原结合片段。在下文特定的实施方案中，抗体或其片段是人IgG同种型抗体。自然地，本专利技术分别扩展至产生具有下文限定的特殊和独特特征的抗体的永生化人类B记忆淋巴细胞和B细胞。本专利技术还涉及编码本专利技术的抗体的免疫球蛋白链的至少可变区的多核苷酸。 优选地，所述可变区包括下文表2和3所述的Vh和/或\可变区的至少一个互补决定区 (OTR)。⑶R的对应组在下文表4中给出。相应地，本专利技术还包括包含所述多核苷酸的载体和用其转化的宿主细胞，以及它们用于产生特异于指示和/或引起疾病(特别是脑疾病，诸如阿尔茨海默病和帕金森病)的新表位的抗体和等效结合分子的用途。抗体、免疫球蛋白链、其结合片段和与所述抗体结合的抗原可分别用在药物组合物和诊断组合物中用于免疫治疗和诊断。然而前述组合物在制备药剂中的用途是优选的。因此，本专利技术的特定目的是提供用于治疗或预防特征为中枢神经系统中蛋白的异常积累和/或沉积并且不干扰相应蛋白的天然功能的神经疾病的方法。该方法包括将有效浓度的抗体或抗体衍生物施用于对象，其中抗体与蛋白的病理形式或蛋白沉积物的结合亲和力显著高于与蛋白的正常生理形式的结合亲和力。在优选实施方案中，本专利技术提供了用于治疗或预防或减缓对象中与淀粉样蛋白P肽的积累和沉积相关疾患的发病的方法，所述疾患诸如阿尔茨海默病、唐氏综合征、轻度认知损害、脑淀粉样蛋白血管病、血管性痴呆、多发性梗死性痴呆。该方法包括将有效浓度的抗体或抗体衍生物施用于对象，其中抗体与蛋白的病理形式或蛋白沉积物的结合亲和力高于与蛋白的正常生理形式的结合亲和力。相似的治疗性方法预计用于治疗帕金森病、亨廷顿病、克雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)、囊性纤维化、高雪病(Gaucher’s disease)和类似疾病。根据以下的说明书，本专利技术的其他实施方案将是明显的。附图简述图I:针对￠-淀粉样蛋白的抗体。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗格·尼奇，克里斯托夫·霍克，克里斯托夫·爱瑟兰格，马伦·科诺布洛赫，凯瑟琳·蒂索，简·格林，
申请(专利权)人：苏黎世大学，
类型：发明
国别省市：