在层粘连蛋白或者形成了异三聚体的层粘连蛋白片段的α链的N末端、β链的N末端和γ链的N末端中的至少一处结合有胶原结合性分子的改造层粘连蛋白、及含有该改造层粘连蛋白以及胶原和/或明胶的细胞外基质材料，作为替代Matrigel(注册商标)的细胞外基质材料，对用于构建对人安全的再生医疗用三维组织结构体有用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及附加有胶原结合性分子的改造层粘连蛋白、含有该改造层粘连蛋白的 细胞外基质材料、培养基材和支架、以及使用该改造层粘连蛋白的细胞培养方法。
技术介绍
干细胞特别是ES细胞、iPS细胞等多能干细胞在再生医疗中的应用在世界范围内 受到瞩目。但是，为了在保持多能性的状态下对干细胞进行培养、维持，通常，细胞在作为饲 养细胞的、使用放射线、抗生素进行处理而使细胞分裂停止的小鼠胚胎来源的成纤维细胞 (MEF)的共存下进行培养。但是，在对人干细胞进行临床应用的阶段，这些饲养细胞的使用 成为很大的制约。 为了将人干细胞应用于再生医疗，需要满足不使用饲养细胞的无饲养细胞条件和 从培养体系中排除异种来源成分的无异源成分（XenO-Free)条件的培养环境。本专利技术人 发现，人层粘连蛋白（特别是由a30 3Y2构成的层粘连蛋白332和由a50 1Yl构成的 层粘连蛋白511)的重组蛋白对于维持人ES细胞的多能性有效（参考非专利文献1)，作为 能够在保持多能性的状态下维持培养干细胞的细胞外基质，提出了重组人层粘连蛋白的E8 片段、或者在重组人层粘连蛋白的E8片段上附加有细胞粘附分子、增殖因子结合分子的改 造层粘连蛋白（参考专利文献1、2、非专利文献2)。 作为人干细胞的维持培养的下一阶段，为了对人干细胞进行分化诱导并应用于再 生医疗，需要构建来源于人干细胞的三维组织结构体。以往，在利用从组织中分离的细胞构 建三维组织结构体的情况下，使用从过量产生基底膜成分的小鼠EHS肿瘤中制备的粗提物 (商品名：Matrigel(Y卜yy;1/)(注册商标））作为细胞外基质。但是，由于Matrigel来 源于小鼠，因此，对人的安全性存在问题。另一方面，在三维培养体系中广泛使用的胶原凝 胶的维持干细胞的活性弱，因此，即使单独使用胶原凝胶作为细胞外基质，也难以由人干细 胞构建三维组织结构体。即，现状是，不存在替代Matrigel(注册商标）的用于构建三维组 织结构体的适当的细胞外基质材料。因此，强烈要求提前开发出用于构建对人安全的再生 医疗用三维组织结构体的细胞外基质材料。现有技术文献 专利文献 专利文献1 :日本特开2011-78370号公报 专利文献2 :国际公开第2012-137970号 非专利文献非专利文献 1:MiyazakiT,FutakiS,HasegawaK,KawasakiM,SanzenN,Hayashi M,KawaseE,SekiguchiK，NakatsujiN，SuemoriH.Recombinanthumanlamininisoforms cansupporttheundifferentiatedgrowthofhumanembryonicstemcells.Biochem. Biophys.Res.Commun. 375:27-35, 2008.非专利文献 2:MiyazakiT，FutakiS，SuemoriH，TaniguchiY，Yamada M,KawasakiM,HayashiM，KumagaiH,NakatsujiN，SekiguchiK,KawaseE.Laminin E8fragmentssupportefficientadhesionandexpansionofdissociatedhuman pluripotentstemcells.Naturecommunications.DOI:10. 1038/ncomms2231, 2012.
技术实现思路
专利技术所要解决的问题 本专利技术的课题在于提供对用于构建对人安全的再生医疗用三维组织结构体有用 的细胞外基质材料作为替代Matrigel(注册商标）的细胞外基质材料。 用于解决问题的方法 为了解决上述课题，本专利技术包含下述专利技术。 一种改造层粘连蛋白，其特征在于，在层粘连蛋白或者形成了异三聚体的层粘 连蛋白片段的a链的N末端、0链的N末端和Y链的N末端中的至少一处结合有胶原结 合性分子。 如上述所述的改造层粘连蛋白，其特征在于，在层粘连蛋白或者形成了异 三聚体的层粘连蛋白片段的a链的N末端、0链的N末端和y链的N末端中的两处以上 结合有胶原结合性分子。 如上述或所述的改造层粘连蛋白，其特征在于，层粘连蛋白片段具有 整合素结合活性。 如上述所述的改造层粘连蛋白，其中，层粘连蛋白片段为层粘连蛋白E8片 段。 如上述~中任一项所述的改造层粘连蛋白，其特征在于，层粘连蛋白 或者形成了异三聚体的层粘连蛋白片段由选自a1~a5中的一种a链或其片段、选自 0 1~0 3中的一种0链或其片段和选自Y1~Y3中的一种Y链或其片段构成。 如上述所述的改造层粘连蛋白，其中，层粘连蛋白或者形成了异三聚体的 层粘连蛋白片段为层粘连蛋白或其片段、层粘连蛋白a3f33Y2或其片段、层 粘连蛋白alMyl或其片段、层粘连蛋白alf32Yl或其片段、层粘连蛋白a2MYl 或其片段、层粘连蛋白a2f3 2yl或其片段、层粘连蛋白a3Myl或其片段、层粘连蛋白 (13 02丫1或其片段、层粘连蛋白（1401丫1或其片段、层粘连蛋白（1402丫1或其片段或 者层粘连蛋白a5f32yl或其片段。 如上述~中任一项所述的改造层粘连蛋白，其特征在于，胶原结合性 分子为选自下述（a)~（r)中的至少一种以上， (a)纤连蛋白或者其包含胶原结合活性位点的片段 (b)胶原酶或者其包含胶原结合活性位点的片段(c)整合素a1链或者其包含胶原结合结构域的片段 (d)整合素a2链或者其包含胶原结合结构域的片段 (e)整合素a10链或者其包含胶原结合结构域的片段 (f)整合素a11链或者其包含胶原结合结构域的片段 (g)血小板糖蛋白VI或者其包含胶原结合位点的片段 (h)盘状结构域受体1或者其包含胶原结合位点的片段 (i)盘状结构域受体2或者其包含胶原结合位点的片段 (j)甘露糖受体或者其包含胶原结合位点的片段 (k)磷脂酶A2受体或者其包含胶原结合位点的片段 (1)DEC205或者其包含胶原结合位点的片段 (m)Endol80或者其包含胶原结合位点的片段 (n)血管性血友病因子或者其包含胶原结合位点的片段 (o)MMP_2或者其包含胶原结合位点的片段 (p)MMP_9或者其包含胶原结合位点的片段 (q)白细胞相关免疫球蛋白样受体1或者其包含胶原结合位点的片段 (r)白细胞相关免疫球蛋白样受体2或者其包含胶原结合位点的片段。 如上述~中任一项所述的改造层粘连蛋白，其来源于人。 一种细胞外基质材料，其特征在于，含有上述~中任一项所述的改造 层粘连蛋白、以及胶原和/或明胶。 -种培养基材，其特征在于，包被有上述~中任一项所述的改造层粘 连蛋白、以及胶原和/或明胶。 一种支架，其特征在于，含有上述~中任一项所述的改造层粘连蛋 白、以及胶原和/或明胶。-种培养方法，其为哺乳动物细胞的培养方法，其特征在于，在上述~ 中任一项所述的改造层粘连蛋白、以及胶原和/或明胶的存在下进行培养。 如上述所述的培养方法，其中，哺乳动物细胞为ES细胞、iPS细胞或者 成体干细胞。 专利技术效果 根据本专利技术，能够提供对用于构建对人安全的再生医疗用三维组织结构体有用的 含有改造层粘连蛋白以及胶原和/或明胶的细胞外本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种改造层粘连蛋白，其特征在于，在层粘连蛋白或者形成了异三聚体的层粘连蛋白片段的α链的N末端、β链的N末端和γ链的N末端中的至少一处结合有胶原结合性分子。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：关口清俊，李绍良，佐藤凉子，
申请(专利权)人：国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP
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