IL-18结合分子制造技术

IL-18参与先天性和获得性免疫两者。IL-18的生物活性被IL-18结合蛋白(IL18BP)，这种天然存在且高度特异的抑制剂负调控。此可溶性蛋白与游离的IL-18形成复合物防止其与IL-18受体相互作用，从而中和并抑制其生物活性。本发明专利技术公开了结合分子，特别地抗体或其片段，其与IL-18结合并且不结合于IL-18BP(IL-18/IL-18BP复合物)的IL-8。除了它的生理作用，IL-18已显示出介导多种自身免疫和炎性疾病。本发明专利技术的结合分子可用作用于治疗IL-18相关的自身免疫和炎性疾病的治疗分子或用作用于表征、检测和/或测量未结合IL-18BP的IL-18作为总IL-18池的组分的诊断工具。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL-18结合分子专利
本专利技术涉及结合分子，更具体地涉及免疫球蛋白，如抗体或其片段，其与细胞因子白细胞介素-18(IL-18)结合，但不结合与白细胞介素18结合蛋白(IL-18BP)内源性抑制剂复合的IL-18。本专利技术还涉及编码所述结合分子的多核苷酸、包含所述结合分子的药物组合物、使用所述结合分子治疗和/或预防疾病的方法以及用于检测和/或测量未结合IL-18BP的IL-18的存在和/或量的方法。本专利技术的其它方面、目的和优点将从下面的描述中显而易见。专利技术背景白细胞介素18(IL-18)最初于1989年被描述为干扰素γ诱导因子(IGIF)。IL-18与IL-1家族相关并且结构上与IL-1β相关(OkamuraH等人(1995)Nature；378:88-91)。IL-18主要是由巨噬细胞和T细胞产生为前体蛋白质(pro-IL-18)并在胱天蛋白酶-1裂解后作为活性蛋白质分泌(DinarelloCA等人(1999)JAllergyClinImmunol；103:11-24)。在正常生理学下，IL-18与IL-12协同，与诸如脂多糖(LPS)的微生物产物感染后的细胞介导的免疫的诱导相关联(SarenevaT等人(2000)JImmunol；165(4):1933-8)。IL-18刺激后，自然杀伤(NK)细胞和T细胞释放细胞因子干扰素-γ(INF-γ)，它在活化巨噬细胞和其它细胞中起重要作用。除了诱导干扰素γ的能力外，IL-18还具有多种功能。这些生物学性质包括活化NF-κB、Fas配体表达、CC和CXC趋化因子两者的诱导和增加的有能力的人免疫缺陷病毒的生产。由于IL-18在T细胞和巨噬细胞中诱导INF-γ产生的能力，它在Th1型免疫应答中起重要作用，并参与先天性和获得性免疫两者。IL-18以高亲和性结合IL-18受体(IL-18R)，这种分别由基因IL18R1和IL18RAP编码的α和β链的异聚复合物，并通过其传递信号(TorigoeK等人(1997)JBiolChem；272(41):25737-42)。IL-18的生物活性被IL-18结合蛋白(IL18BP)，这种天然存在且高度特异的抑制剂负调控。此可溶性蛋白与游离的IL-18形成复合物防止其与IL-18受体相互作用，从而中和并抑制其生物活性(DinarelloCA(2000)AnnRheumDis；59Suppl1:i17-20)。IL-18BP是以高亲和性结合IL-18的组成型分泌蛋白质。IL-18BP的可变mRNA剪接变体得到四个同种型。重要的'a'同种型相比IL-18以超过20倍摩尔存在于健康人的血清中(Dinarello和Kaplanski(2005)ExpertRevClinImmunol,1(4),619-632)。除了它的生理作用，IL-18已显示出介导多种自身免疫和炎性疾病。已证明了在若干自身免疫疾病如克罗恩病、牛皮癣、类风湿性关节炎、多发性硬化和心血管疾病中，IL-18表达被上调(Braddock等人(2004)ExpertOpinBiolTher；4(6):847-860)。在某些炎症性疾病，如慢性阻塞性肺疾病(COPD)(Imaoka等人(2008)EurRespir；J31:287-297)，特发性肺纤维化(IPF)(Kitasato等人(2004)AmJRespCellMolBiol；31:619-625)，巨噬细胞活化综合征(MAS)(Dinarello和Kaplanski(2005)ExpertRevClinImmunol；1(4):619-632)，成人发作斯蒂尔病(Still’sdisease)(AOSD)(ArletJB等人(2006)AnnRheumDis65(12):1596-601)和系统性幼年特发性关节炎(SJIA)(Akashi等人(1994)BrJHaematol；87(2):243-50)中，IL-18也上调。最近的研究表明了在遗传和获得性形式的噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)两者中的高量IL-18和IFN-γ。HLH的特征在于活化的分泌大量炎性细胞因子的淋巴细胞和组织细胞(JankaGE等人(2007)EurJPaediatr；166:95-109)和在于受损的NK细胞和细胞毒性T细胞功能。最重要的是，已经表明，这两种形式的特征在于IL-18的失调(Mazodier等人(2005)Immunobiology106(10):3483-89)。开发用于被天然抑制剂调控的靶标(如IL-18)的治疗分子会是非常具有挑战性的。增加量的全身或局部的总IL-18的存在并不总是反映生物活性蛋白(没有IL-18BP的IL-18)的水平。虽然结合游离的IL-18和与IL-18BP复合的IL-18两者的治疗化合物潜在地能够中和IL-18的活性，但相比于能选择性地只结合具有生物活性的游离IL-18，会需要更大剂量。需要以高剂量施用的治疗性化合物会导致更明显的副作用，或成为免疫原性的。高剂量也转化为高的生产成本。当结合IL18BP时会竞争IL-18的治疗化合物可能扰乱存在于患有表征为IL-18失调的疾病/病症的患者中的游离/活性IL-18和IL-18BP结合/失活IL-18的微妙的平衡。最后，在没有能够检测和/或测量无IL-18BP的IL-18作为总IL-18的组分的诊断工具时，调查表征为游离IL-18失调的疾病将是非常困难的。专利技术概述在一个方面，本专利技术因此提供了特异性结合IL-18的结合分子，其中所述结合分子不结合IL-18/IL-18结合蛋白(IL-18BP)复合物，并且其中所述结合分子不是IL-18BP。在此方面的一个实施方式中，结合分子结合于IL-18上的IL-18表位(如参照SEQIDNO：1所限定)，其中所述表位包括氨基酸Arg140和Glu152。在此方面的另一实施方式中，所述表位还可以包括氨基酸Gln92、Pro93、Gly95、Pro143、Glu157或Glu177中的任何一种或多种。在此方面的又另一实施方式中，表位可还包括氨基酸Lys89、Arg94、Met96、Phe138、Ser141、Gly144、His145、Asp146、Gln150或Leu180中的任何一种或多种。在此方面的另一实施方式中，当IL-18BP结合到IL-18时，结合分子不与IL-18BP竞争结合IL-18。在此方面的另一实施方式中，结合分子选自：分离的抗体、分离的抗体的片段、单可变结构域抗体、双特异性或多特异性抗体、多价抗体、双重可变结构域抗体、免疫缀合物、纤连蛋白分子、adnectin、DARPin、avimer、affibody、抗运载蛋白(anticalin)、affilin、蛋白质表位模拟物或其组合。在此方面的另一实施方式中，结合分子结合IL-18，其中IL-18包括SEQIDNO：1或SEQIDNO：2的氨基酸37至氨基酸193。在此方面的另一实施方式中，结合分子抑制IL-18依赖性干扰素γ(IFN-γ)的生产。在此方面的另一实施方式中，结合分子以100pM或更小的KD结合IL-18。在此方面的另一实施方式中，根据本专利技术的结合分子是分离的全长人、人源化或嵌合抗体或其片段，优选分离的全长人类抗体。在本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合IL‑18的结合分子，其中结合分子不结合IL‑18/IL‑18结合蛋白(IL‑18BP)复合物，并且其中结合分子不是IL‑18BP。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.09.07 US 61/697,9811.特异性结合IL-18，但不结合IL-18/IL-18结合蛋白(IL-18BP)复合物的分离的全长人类、人源化或嵌合抗体或其包含Fab、Fab'、F(ab')2或scFv的抗原结合片段，其中分离的抗体或其抗原结合片段包括：i.包括SEQIDNO：3的重链可变区H-CDR1和ii.包括SEQIDNO：9的重链可变区H-CDR2和iii.包括SEQIDNO：5的重链可变区H-CDR3和iv.包括SEQIDNO：6的轻链可变区L-CDR1和v.包括SEQIDNO：7的轻链可变区L-CDR2和vi.包括SEQIDNO：8的轻链可变区L-CDR3。2.根据权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中抗体是全长人类抗体。3.根据权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中抗原结合片段是Fab、Fab'、F(ab')2或scFv。4.根据权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中分离的抗体或其抗原结合片段包括：包括SEQIDNO：14的重链可变结构域和包括SEQIDNO：16的轻链可变结构域。5.根据权利要求1的分离的抗体或其抗原结合片段，其中分离的抗体或其抗原结合片段包括：包括SEQIDNO：45的轻链和包括SEQIDNO：43的重链。6.编码权利要求1-5中任一项的分离的抗体或其抗原结合片段的多核苷酸。7.克隆或表达载体，其包括一种或多种根据权利要求6的多核苷酸。8.宿主细胞，其包括一种或多种根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·O·巴尔多夫，B·布拉尼迪，E·M·坎贝尔，B·迪芬巴赫施特赖贝尔，A·埃博斯，C·C·S·昆茨，S·马歇尔，JM·R·隆多，JM·A·沙拉皮，G·A·范黑克，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH