含有番茄LeEXP2基因的重组载体及重组菌及LeEXP2基因在重组菌中的表达制造技术

本发明专利技术公开了含有番茄LeEXP2基因的重组载体及重组菌及LeEXP2基因在重组菌中的表达，本发明专利技术首先从番茄中克隆了LeEXP2基因；进一步将LeEXP2基因构建至巴斯德毕赤酵母表达载体；通过电转化获得一种含有番茄LeEXP2基因的重组巴斯德毕赤酵母菌；诱导番茄LeEXP2基因在重组巴斯德毕赤酵母菌中的表达；本发明专利技术的重组菌能有效地表达目的蛋白LeEXP2。克服了现有技术从植物中纯化出膨胀素的量有限，无法大量应用到纤维素降解中，自然界中有诸多的废弃的木质纤维素，本发明专利技术获得的LeEXP2蛋白能提高纤维素酶降解纤维素的效率，对清洁有效的利用废弃的纤维素生产能源，解决当前能源危机具有极其重要意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，具体地涉及一种含有番茄LeEXP2基因的重组载体、含番茄LeEXP2基因的重组巴斯德毕赤酵母菌及番茄LeEXP2基因在重组巴斯德毕赤酵母菌中的诱导表达。
技术介绍
纤维素是植物细胞壁的主要成份，是地球上最大量的可再生碳源物质。利用其进行生物转化生产燃料乙醇等化学品，对于当前人类解决能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有极其重要的意义。纤维素特殊的晶体结构使纤维素酶分子很难靠近纤维素分子内部的糖苷键，酶解消耗大量的纤维素酶和时间已成为生物质转化的瓶颈。目前运用化学试剂或高温高压等方式改变纤维结构不仅成本高和费时，而且也会带来环境污染。因此，寻找温和、高效、环保的改变纤维结构的方法尤为迫切。膨胀素(Expansins)是高等植物的细胞壁中普遍存在的一类蛋白质，能增强细胞壁的延展能力，松弛植物细胞壁从而使细胞扩增，在植物的生长发育及应答胁迫中扮演重要角色。目前发现Expansins主要有四个基因家族，S卩α-expansin(EXPA)， β-expansin(EXPB)，expansin-like A (EXLA)禾口 expansin- like B (E本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种含有番茄ＬｅＥＸＰ２基因的重组载体，其特征是用下述方法构建：（１）提取番茄的总ＲＮＡ，反转录成ｃＤＮＡ，以该ｃＤＮＡ为模板，用序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１和ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．２所示核苷酸序列为上、下游引物进行ＰＣＲ，扩增出序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．３所示的７４４ｂｐ的ＬｅＥＸＰ２基因，连接至ＴＡ载体ｐＧＥＭ－Ｔ，获得含有番茄ＬｅＥＸＰ２基因的质粒ｐＧＥＭ－ＬｅＥＸＰ２；（２）ＬｅＥＸＰ２基因构建至巴斯德毕赤酵母表达载体：以所述质粒ｐＧＥＭ－ＬｅＥＸＰ２为模板，以序列表中ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．４和ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．５所示核苷酸序列为上、下游引物进行ＰＣＲ扩增，获得序列表中ＳＥＱ　Ｉ...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：马媛媛，邹少兰，张鲲，洪解放，井欣，张敏华，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：12