含有抗体-细胞因子融合蛋白和血管生成抑制剂的免疫治疗用组合物制造技术

公开了在哺乳动物中增强针对预定细胞类型的杀细胞免疫应答的组合物和方法。所述方法和组合物依赖于抗体－细胞因子免疫缀合物和血管生成抑制剂的组合。一旦给予所述哺乳动物后；由于所述免疫缀合物与所述血管生成抑制剂有协同作用，所述免疫缀合物诱导的针对所述预定细胞类型（例如癌细胞）的免疫应答大于仅用所述免疫缀合物诱导的免疫应答。所述方法和组合物在杀伤哺乳动物中的实体瘤或病毒感染细胞方面特别有用。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般而言涉及免疫缀合物，特别是可用于定向免疫治疗和普遍性免疫刺激的抗体-细胞因子融合蛋白。更具体地讲，本专利技术涉及应用血管生成抑制剂增强抗体-细胞因子融合蛋白介导的针对预定细胞类型(例如实体瘤中的细胞)的免疫应答。
技术介绍
多年来已经用抗体治疗人类疾病，主要是提供针对病毒或细菌感染的被动免疫。然而最近，已经用抗体和抗体缀合物作为抗肿瘤剂。在大多数肿瘤类型中难以证明抗肿瘤活性，除非临床状态是一种最小残余的疾病(Reithmuller等，Lancet 94:1177-1183)，或当所述肿瘤为循环中的抗体可及时，例如在B-淋巴瘤的情况下(Maloney等(1994)Blood84:2457-2466)。对于抗体介导的治疗干涉而言，实体瘤比最小残余疾病状态中发现的微转移病灶顽固得多。早期研究表明，可以通过将免疫刺激性细胞因子融合至抗体分子，增强用抗体对肿瘤的体内治疗。然而，抗体-细胞因子融合蛋白在破坏较大的实体瘤方面远不如对弥散性转移病灶有效(Xiang等(1997)Cancer Reseach 57:4948-4955和Lode等(1998)Blood 91:1706-1715)。因此，本领域仍需要增强针对预定细胞类型(例如实体瘤中存在的细胞类型)的抗体-细胞因子融合蛋白介导的免疫应答的组合物和使用这类组合物的方法。专利技术概述本专利技术部分基于这样的发现如果将免疫缀合物与血管生成抑制剂一起给予，当将所述疫缀合物给予哺乳动物时，可能产生更有效的针对预定细胞类型的免疫应答。特别是，已经发现，这类组合物在预定细胞类型(诸如实体瘤中发现的细胞类型)和病毒感染的细胞中介导免疫破坏方面特别有用。一方面，本专利技术提供在哺乳动物中诱导针对预定细胞类型的杀细胞免疫应答。该方法包括给予所述哺乳动物(ⅰ)免疫缀合物，包含一个能够结合预定细胞类型的抗体结合位点和一个能够诱导这种针对预定细胞类型的免疫应答的细胞因子，和(ⅱ)血管生成抑制剂，其量足以相对于仅用免疫缀合物而言增强所述免疫应答。在一个优选实施方案中，所述预定细胞类型可以是例如在实体瘤中、更优选在较大的实体瘤(即大于约100mm3)中存在的癌细胞。或者，所述预定细胞类型可以是病毒感染的细胞，例如人免疫缺陷病毒(HIV)感染的细胞。在另一个优选实施方案中，可以将血管生成抑制剂与所述免疫缀合物同时给予。或者，所述血管生成抑制剂可以在给予免疫缀合物之前给予。此外，设想免疫缀合物可以与多种不同的血管生成抑制剂一起给予。或者，设想所述血管生成抑制剂可以与多种不同的免疫缀合物一起给予。另一方面，本专利技术提供用于在哺乳动物中诱导针对预定细胞类型的杀细胞免疫应答的组合物。所述组合物结合包含(ⅰ)免疫缀合物，包含一个能够结合预定细胞类型的抗体结合位点和一个能够诱导这种针对所述预定细胞类型的免疫应答的细胞因子，和(ⅱ)血管生成抑制剂，其量足以相对于仅用免疫缀合物而言增强所述免疫应答。在另一优选实施方案中，所述免疫缀合物的抗体结合位点最好包含免疫球蛋白重链或其抗原结合片段。所述免疫球蛋白重链最好以氨基末端至羧基末端的方向包含能够结合预定抗原的一个免疫球蛋白可变区(VH)结构域、一个免疫球蛋白重链恒定区1(CH1)结构域、一个免疫球蛋白重链恒定区2(CH2)结构域，可选地可以还包含一个免疫球蛋白重链恒定区3(CH3)结构域。在一个更优选的实施方案中，所述免疫缀合物是包含通过一个多肽键融合至需细胞因子的免疫球蛋白重链或其抗原结合片段的融合蛋白。因此，有效的抗体-细胞因子融合蛋白以氨基末端至羧基末端的方法包含(ⅰ)抗体结合位点，包含一个能够结合预定细胞类型上的细胞表面抗原的免疫球蛋白可变区、一个免疫球蛋白CH1结构域、一个免疫球蛋白CH2结构域(可选的CH3结构域)，和(ⅱ)所述细胞因子。在Gillies等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:1428-1432；Gillies等(1998)J.Immunol.160:6195-6203和美国专利第5,650,150号中，详细描述了制备和使用这类融合蛋白的方法。免疫球蛋白恒定区结构域(即CH1、CH2和/或CH3结构域)可以是天然产生的抗体中的与可变区正常相连的恒定区结构域。或者，一个或多个所述免疫球蛋白恒定区结构域可以衍生自与用作可变区结构域来源的抗体不同的抗体。换句话说，所述免疫球蛋白可变区结构域和恒定区结构域可以衍生自不同的抗体，例如，衍生自不同物种的抗体。参见例如美国专利第4,816,567号。此外，所述免疫球蛋白可变区可以包含衍生自一个物种(例如人类)的构架区(FR)序列和插入所述FR之间、衍生自第二个不同物种(例如小鼠)的互补决定区(CDR)序列。例如在美国专利第5,225,539号和第5,585,089号中公开了用于制备和使用这类嵌合免疫球蛋白可变区的方法。基于抗体的免疫缀合物最好还包含免疫球蛋白轻链,所述轻链最好通过例如二硫键共价连接至所述免疫球蛋白重链。所连接的免疫球蛋白重链和轻链的可变区一起确定结合预定抗原的单一完整的结合位点。在其它实施方案中，所述免疫球蛋白包含两个嵌合链，每个链包含融合至细胞因子的至少一部分免疫球蛋白重链。所述两个嵌合链最好通过例如一个或多个链间二硫键共价连接。本专利技术因此提供其中将抗体的所述抗原结合特异性和活性与细胞因子的有效生物活性结合的融合蛋白。本专利技术的融合蛋白可以用来将所述细胞因子选择性地体内传递至靶细胞，使得所述细胞因子可以在所述靶细胞附近发挥局部的生物学效应。在一个优选实施方案中，所述融合蛋白的抗体组分特异性地结合癌细胞上的抗原，结果所述融合蛋白发挥局部抗肿瘤活性。在一个替代的优选实施方案中，所述融合蛋白的抗体组分特异性地结合病毒感染的细胞，诸如HIV感染的细胞，结果所述融合蛋白发挥局部抗病毒活性。可以加入本专利技术免疫缀合物中的优选的细胞因子包括例如肿瘤坏死因子、白介素、集落刺激因子和淋巴因子。优选的肿瘤坏死因子包括例如组织坏死因子α(THFα)。优选的白介素包括例如白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)、白介素-7(IL-7)、白介素-12(IL-12)、白介素-15(IL-15)和白介素-18(IL-18)。优选的集落刺激因子包括例如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)。优选的淋巴因子包括例如淋巴毒素(LT)。其它有用的细胞因子包括干扰素，包括IFN-α、IFN-β和IFN-γ，所有这些均具有免疫效应以及不依赖于抗病毒活性的抗血管生成效应。可用于实施本专利技术的优选的血管生成抑制剂包括例如endostatin、制管张素、对αvβ3整联蛋白具有结合亲和性的肽、对αvβ3整联蛋白具有结合亲和性的抗体或其片段、对表皮生长因子(EGF)受体具有结合亲和性的肽、对EGF受体具有结合亲和性的抗体或其片段、COX-2抑制剂、夫马洁林、沙利度胺、抗血管生成细胞因子(例如IFN-α、IFN-β和IFN-γ)和包含这种抗血管生成细胞因子的细胞因子融合蛋白。也提供用于联合所述血管生成抑制剂给予免疫缀合物的剂量和给药方法。附图简述当结合附图一起阅读时，根据以下优选实施方案的描述，可以更全面地理解本专利技术前述的和其它本文档来自技高网...

【技术保护点】
在哺乳动物中诱导针对预定细胞类型的杀细胞免疫应答的方法，所述方法包括：给予所述哺乳动物（ｉ）免疫缀合物，包含一个能够结合预定细胞类型的抗体结合位点和一个能够诱导针对所述预定细胞类型的所述免疫应答的细胞因子，和（ｉｉ）血管生成抑制剂，其量 足以相对于仅用免疫缀合物而言而增强所述免疫应答。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：SD吉利斯，
申请(专利权)人：利思进药品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]