P物质用于间充质干细胞的动员或增殖以及用于伤口愈合或促进伤口愈合的用途制造技术

本发明专利技术涉及利用Ｐ物质制造用于从骨髓动员或增殖间充质干细胞（ＭＳＣ），或促进上述动员或增殖的药物的用途，以及利用Ｐ物质制造用于伤口愈合或促进伤口愈合的药物的用途。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及利用P物质(Substance-P)制造从骨髓动员或增殖间充质干细胞(MSC)，或促进所述动员或增殖的药物的用途，以及利用P物质制造用于伤口愈合或促进伤口愈合的药物的用途。
技术介绍
P物质是由11个氨基酸组成的神经肽，这个速激肽家族在感觉神经元、巨噬细胞、嗜曙红细胞、内皮细胞、和角膜的细胞，例如上皮细胞和角膜细胞，以及肉芽组织中表达。一些报道已经提出在造血调节中的神经免疫通讯中涉及有P物质。骨髓基质受P物质神经纤维的支配，并且P物质刺激了骨髓基质细胞通过其表面受体NK-1来产生干细胞因子和白介素-1，这些可能是作为滋养有利于造血刺激。但是，在全身MSC动员和骨髓中的MSC再增殖中P物质的作用还没有报道。伤口本身创造了一个独特和特异的微环境，这个环境由生长因子、细胞因子、神经激素、和细胞外基质组成，所有这些都是由邻近细胞，血生细胞和感觉神经元分泌的。在伤口微环境中有些因子可能持续足够长的时间而扩散到外周血中，并且依次影响骨髓中的干细胞，来诱导骨髓细胞动员进入外周血，促使向伤口位置提供骨髓细胞，以及促进骨髓细胞参与伤口愈合。最近使用骨髓干细胞和培养的MSC进行的细胞移植试验显示其与肺、胃肠道、和梗塞的心肌的组织修复有关。但是，在正常的没有创伤的生理学状态下，除了骨髓，在诸如脂肪组织和翼状胬肉的组织中检测到MSC，但是其很少出现在外周血中。由此，认为在组织修复和病理进展过程中，可能有某个系统将MSC从骨髓动员到其他外周组织中去。角膜是由透明的，无血管的且受密集神经支配的组织组成，其完整性可能在角膜损伤和角膜疾病的情况下被破坏。角膜伤口刺激角膜上皮细胞的横向运动，这很可能是由角膜缘干细胞提供的，其还刺激了炎症细胞的浸润，和伤口基质内新血管的形成，所有这些可能是受独特的角膜伤口微环境的刺激。以前的报告提出，角膜的去神经支配是在伤口愈合过程中实际延迟的一个原因，并且在糖尿病病人中P物质的水平低于非糖尿病病人，这也是引起延迟表皮再殖和延迟愈合的一个原因。由于角膜表面广泛受到三叉神经节神经元的支配，并且内源性的P物质在角膜上皮细胞和角膜细胞中表达，人们预期P物质与伤口微环境有关并且参与角膜修复。专利技术概述本专利技术人发现P物质是在角膜碱灼伤的小鼠的眼睛和外周血中增多的第一个神经肽。并且，他们发现，即使将P物质静脉注射进角膜无伤口的小鼠中，很多CD29+MSC还是被动员进入外周血。而且，在体外的3-D胶原凝胶中显示P物质通过诱导基质降解酶和抑制该酶的抑制剂来刺激人MSC的迁移。而且，他们发现P物质刺激MSC的细胞增殖，β-连环蛋白的细胞核转位作用，及其目标基因VEGF和纤连蛋白的表达，并且因此P物质可能在MSC动员之后在MSC的骨髓再增殖中起作用。而且，本专利技术人确定了输入碱灼伤的兔子耳静脉的Di 1标记的MSC在伤口床处被成功动员起来，并且促进了角膜伤口的愈合，改善角膜的透明度和视力恢复。进一步的，他们显示了静脉注射的P物质能够促进碱灼伤的兔眼的伤口愈合。因此，本专利技术的首要目的是提供P物质用于制造从骨髓动员或增殖间充质干细胞(MSC)，或促进所述动员或增殖的药物的用途。本专利技术的第二个目的是提供P物质用于制造伤口愈合或促进伤口愈合的药物的用途。本专利技术的第三个目的是提供用于从骨髓中动员或增殖MSC，或促进所述动员或增殖的制剂，其含有P物质作为有效成分。本专利技术的第四个目的是提供一种伤口愈合或促进伤口愈合的制剂，其含有P物质作为有效成分。本专利技术的第五个目的是提供一种伤口愈合或促进伤口愈合的制剂，其含有MSC作为有效成分，其中，通过P物质的处理来从骨髓中动员或增殖MSC。本专利技术的第六个目的是提供一种分离MSC的方法，包含通过P物质处理从骨髓动员MSC的步骤。本专利技术的第七个目的是提供一种增殖MSC的方法，包含在有P物质存在下增殖MSC的步骤。本专利技术的第八个目的是提供一种愈合伤口或促进伤口愈合的方法，包括施用治疗有效量的P物质。本专利技术的第九个目的是提供一种愈合伤口或促进伤口愈合的方法，包括施用治疗有效量的MSC，其中通过P物质的处理从骨髓动员或增殖MSC。附图简述附图说明图1显示了在角膜碱灼伤后，在兔子的外周血和伤口床中c-kit+干细胞的增加(用箭头指示伤口床处的c-kit阳性细胞)。图2a显示了在角膜碱灼伤之后，小鼠眼睛的RT-PCR分析结果。图2b显示了小鼠角膜碱灼伤之后的第0、1、3、5、7、10、14天收集的外周血的ELISA分析结果。图2c显示了小鼠眼睛碱灼伤之后伤口床的苏木精&曙红染色结果，以及P物质抗体免疫组化染色的结果。图2d显示了小鼠眼晴碱灼伤之后的伤口处用c-kit、CD-29、和α-SM肌动蛋白的抗体进行免疫组化染色的结果。图3a显示了在静脉注射P物质之后从小鼠血液中分离出的粘附细胞中用CD-29抗体免疫细胞化学染色的结果。图3b是显示在静脉注射P物质之前或之后的血液中CD-29+细胞平均数量的图表。图4a显示了应答P物质处理在3-D胶原凝胶上人MSC的迁移和胶原蛋白降解的结果。图4b显示了在用P物质(0-100nM)处理后，从培养在3-D胶原凝胶上的人MSC收集的培养物上清液的明胶酶谱分析结果。图4c显示了在用P物质(0-100nM)处理后从人MSC收集的培养物上清液中针对MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的抗体的免疫沉淀结果。图5a是显示在用P物质处理后，存活的人MSC的数量(n＝4，平均数±S.D)的图表。图5b显示了在P物质(0-100nM)存在下培养的人MSC用β-连环蛋白抗体的免疫荧光染色结果。图5c是从P物质处理过的人MSC的培养物上清液中收集的VEGF的ELISA分析结果的图表。图5d显示了从P物质处理的人MSC的培养物上清液中使用针对人类纤连蛋白的单克隆抗体的Western印迹分析结果。图6a显示了角膜碱灼伤后的第14、30天，有或没有Di 1标记的兔MSC输注的兔眼裂隙灯检查结果照片。图6b显示了通过荧光立体显微镜的FLAT mount检查观察到的角膜中Di 1标记的MSC存在的照片。图7a显示了静脉注射或没有注射P物质的兔子角膜碱灼伤之后，角膜伤口恢复的照片。图7b显示了在角膜碱灼伤之后，静脉注射或没有注射P物质的组织切片的H&E染色结果的照片。图7c显示了在角膜碱灼伤之后静脉注射或没有注射P物质的组织切片中，用CD-29抗体免疫组化染色的照片。专利技术详述首先，本专利技术涉及P物质用于制造从骨髓动员或增殖间充质干细胞(MSC)，或促进所述动员或增殖的药物的用途。在一个实施方案中，所述药物可以包括MSC。在另一个实施方案中，所述药物可以是细胞性治疗剂。第二，本专利技术涉及P物质用于制造伤口愈合，例如角膜和皮肤伤口愈合或促进伤口愈合的药物的用途。在一个实施方案中，所述药物可以包括MSC。在另一个实施方案中，所述药物可以是细胞性治疗剂。第三，本专利技术涉及一种用于从骨髓中动员或增殖MSC，或促进所述的动员或增殖的制剂，其包含P物质作为有效成分。第四，本专利技术涉及一种伤口愈合，或促进伤口愈合的制剂，包含P物质作为有效成分，例如，用于角膜和皮肤伤口。第五，本专利技术涉及一种伤口愈合，或促进伤口愈合的试剂，其含有MSC作为有效成分，其中通过P本文档来自技高网...

【技术保护点】
Ｐ物质制造用于从骨髓动员或增殖间充质干细胞（ＭＳＣ），或促进所述动员或增殖的药物的用途。

【技术特征摘要】
KR 2004-10-27 10-2004-00863591.P物质制造用于从骨髓动员或增殖间充质干细胞(MSC)，或促进所述动员或增殖的药物的用途。2.P物质制造用于伤口愈合或促进伤口愈合的药物的用途。3.权利要求1或2的用途，其中所述药物包括MSC。4.权利要求3的用途，其中所述药物是细胞性治疗剂。5.一种用于从骨髓动员或增殖MSC，或促进所述动员或增殖的制剂，其含有P物质作为有效成分。6.一种伤口愈合或...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙英淑，洪贤淑，金在灿，
申请(专利权)人：韩国原子力研究所，中央大学校算学协力团，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]