本发明专利技术公开了Ⅱ型副流感病毒（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ，ＰＩＶ）检测试剂盒及其应用，该试剂盒包括ＲＮＡ提取液、逆转录酶、ＲＮＡ酶抑制剂、标准阳性模板、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶、荧光定量ＰＣＲ反应液和标准阴性质控品。利用该试剂盒，首先提取待测样品病原体ＲＮＡ，然后与标准阳性质控品、内对照模板以及阴性质控品一起作荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ，根据荧光定量ＰＣＲ仪器所带有的软件计算出待测样本中Ⅱ型副流感病毒的起始浓度。本发明专利技术检测速度快、操作方便安全，省时效率高，可有效的对Ⅱ型副流感病毒感染患者进行病毒ＲＮＡ检测，从而达到了早期诊断和有效预防Ⅱ型副流感病毒感染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属病原体核酸检测领域，特别涉及一种II型副流感病毒荧光定量PCR检测 试剂盒，同时，本专利技术还涉及一种荧光定量PCR试剂盒检测II型副流感病毒的方法，荧光定 量PCR是通过实时监控收集PCR体系中的荧光信号，对样品中的初始模板进行定量，可广泛 应用于医学、生物学等相应领域。
技术介绍
副流感病毒(parainfluenza virus，PIV)，与流感病毒同属粘病毒。1992年 第四次国际病毒命名委员会将其划归副粘病毒科(paramyxiviridae)，副粘病毒亚科 (paranyxivirinae) 0其成员多数是引起人畜共患病的重要病原体。近年来又发现一些新 现病毒如 megamyxoviruses (Hendra and Nipah viruses)以及 metapneumovirus。副流感病毒是幼儿、儿童和成人的显着上呼吸道感染最常见的病原体， 据统计，大约30 % 40 %的婴幼儿急性呼吸道感染都是由人副流感病毒(human parainfluenzavirus, HPIV)引起的。和呼吸道合孢病毒一样，副流感病毒可以重复感染。 副流感病毒分为一至四型，每种亚型都有不同的临床和流行病学特点。一型和二型副流感 病毒是儿童哮吼症的主要原因，在2-4岁儿童中症状最严重。一型和二型副流感病毒也可 导致其他上/下呼吸道病症。二型副流感病毒较少发现。三型副流感病毒虽然也导致哮吼 症，但是它作为仅次于呼吸道合孢病毒的幼儿支气管炎、肺炎的病原体更为人熟知。三型副 流感病毒在1岁以下儿童中症状最严重。四型副流感病毒一般引起轻微上呼吸道疾病。副流感病毒根据遗传性与抗原性，HPIV可分为4种血清型HPIV 1 4。其中HPIV4 又可分为A、B两个亚型。病毒有包膜，包膜上有两种刺突，一种是HN蛋白，具有HA和NA的 作用；另一种是F蛋白，具有使细胞融合及溶解红细胞的作用，它由Fl和F2亚基通过2个 二硫键连接而成。病毒包膜内为核衣壳，也称RNP核心，由病毒RNA(vRNA)，N蛋白，P蛋白 和L蛋白组成。副流感病毒基因组由不分节段的ssRNA组成，包括约15，500个核苷酸，编 码至少6种常见的结构蛋白(3’ -N-P-C-M-F-HN-L-5’)。研究发现，HN糖蛋白很可能以四 聚体形式存在于HPIV包膜和被感染细胞的胞膜上，通过唾液酸受体使病毒吸附于宿主细 胞表面，发挥神经氨酸酶活性。Moscona和I^aluso的实验表明，HN与细胞受体的相互作用 是特异而复杂的，它涉及HN和F这两种表面糖蛋白，且因HPIV型别的不同而多有变化，因 此，人副流感病毒血清型可根据HN基因进行分型。目前副流感病毒的临床检测常用分离培养、免疫荧光试验、酶联免疫反应和PCR 等方法；病原体分离培养法虽然有“金标准”之称，但其技术复杂、费时长，而且其灵敏度容 易受病原体不稳定的影响，不适合用于早期诊断。而免疫荧光试验、酶联免疫反应等方法由 于特异性差、敏感性低等问题在临床应用价值受限。普通PCR只能定性或半定量检测，无法 评价治疗方案的效果，且操作步骤繁琐，技术要求高，易造成产物污染，出现假阳性，无法标 准化，不利于推广。近年来发展起来的荧光定量PCR(Fluoroenetic Quantitative PCR, FQ-PCR)技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点，已在病原体的定性检测(McgolddrikA， Lowing J P, Ibata G,et al.A Novel Approach to the Detection of Classical Swine Fever Virus by RT-PCR with aFluorogenic Probe (TaqMan) .J Virol Methods, 1998,72 :125-135 ；Bhudevi B, Weinstock D.Fluorogenic RT-PCR assay (TaqMan) for Detection and Classification of Bovine Viral Diarrhea Virus. Vet. Microbiol., 2001,83 :1-10)、定量检测(Desire N, Dehee A, Schneider V, etal. Quantification if Human Immndeficiency Virus Type I Proviral Load by a TaqMan Real-Time PCR Assay,J. Clin. Microbiol, 2001, 39 :1301-1310 ；Martell Μ, Gomez J, Esteban H, etal. High-Throughput Real-Time Reverse Transcription-PCR Quantitation of Hepatitis C Virus RNA, J. Clin. Microbiol, 1999,37 :327-332 ；Kearns AM, Turner AJL, Eltringham GJA, et al. Rapid Detection and Quantification of CMV DNA in Uring Using Lightcycler-based Real-Time PCR, J. Clin, Virol,2002, 24 :131-134 ； Florence KP,Glaucia PB,Mireille S,et al. Quantitation of HCV RNA using real-time PCR and fluorimetry · J. Virol. Methods，2001，95 :111-119)、肿瘤基因检测(Gelmini S et al. Clin Chem. 1997,43(5) :752-758 ；Bieche I et al. Int J Cancer. 1998,78(5) 661-666)、免疫分析(Lang R et al. J Immunol Methods. 1997，203 (2) : 181-192)、基因表 达水平分析(Hirayama Y et al. Blood, 1998,92(1) :46-52 ；Shimokama T et al. Biochem Biophys Res Commun,1998,246(1) :287-292 ；Nellemann C, Vinggaard AM, Dalgaard Μ, et al.Quantification of Antiandrogen Effect Determined by LightCycler ^Technology · ^Toxicology，2001，163 :29-38)及其多态性(Ibrhim MS et al. Mol Cell Probes, 1997,11 (2) :143-147)的研究等多个领域得到应用。对感染者体内病原体性性的 直接检测和定量研究，不仅对于了解患病程度，预测、评价治疗效果有十分重要意义，同时 也使对病原体感染发病机制的研究进入量化本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Ⅱ型副流感病毒检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括ＲＮＡ提取液；ＲＴ－ＰＣＲ反应液；混合酶；阳性标准模板；阳性对照和阴性对照。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：沈维祥，何剑军，吴大治，夏懿，
申请(专利权)人：上海复星医学科技发展有限公司，上海复星医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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