华法林药物基因VKORC1和CYP2C9突变检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种特异性多重PCR技术和多重LDR技术检测华法林两种药物基因VKORC1和CYP2C9检测突变的试剂盒，特别涉及心血管患者组织以及患者血液中VKORC1和CYP2C9基因突变的诊断。本试剂盒针对分子靶向药物疗效相关的特定突变位点，设计特定的引物序列和探针序列，在进行多重PCR后，通过野生型探针和突变型探针与目的片段连接后在测序仪上进行片段分析，根据结果的峰图判读结果。本发明专利技术可对VKORC1和CYP2C9基因3个特定突变位点进行检测，可以用于华法林药物剂量的预测和心血管患者临床个体化用药方案的指导。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及PCR技术和高温连接酶(LDR)技术检测试剂盒，特别涉及到特异性引物的多种PCR和多重LDR技术检测华法林药物基因VKORCl和CYP2C9常规突变的试剂盒。
技术介绍
华法林是一种香豆素类口服抗凝药，广泛用于预防和治疗静脉血栓、肺栓塞、慢性心房纤维颤动、心肌梗塞、缺血性休克等多种血栓性疾病和人工心脏瓣膜植入手术，它的抗凝效果超过了目前批准的其它口服类抗凝药。但是华法林的剂量很难掌握，因为不同病人的所需用量可以相差十倍，而且使用不恰当的剂量会导致出血等严重不良反应。在过去二十年中，由于华法林治疗指数窄，剂量个体差异大以及有出血危险，使得它位居严重药物不良反应药物的前十名。美国每年新增华法林使用者二百万。在中国，每年使用华法林的患者超过四百万。患者口服华法林通常逐渐增加剂量，同时监测凝血酶原时间国际标准化比率(INR)，使之保持在2-3之间。但要达到稳定剂量通常需要几个月的时间。因此华法林剂量过高，患者就会有出血的危险，剂量过低则达不到治疗效果。华法林剂量、抗凝稳定性和出血危险性受年龄、性别、体重、疾病、饮食中维生素K摄入等环境因素、以及遗传变异等因素的影响，其中遗传变本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种采用特异性引物探针高温连接酶技术(LDR技术)的华法林药物基因VKORC1和CYP2C9检测试剂盒，该试剂盒包括：PCR缓冲液，酶1，酶2，LDR反应液，阴性质控品，野生型质控品，VKORC1?1173G/T阳性对照，VKORC1?1639C/T阳性对照，CYP2C9?3阳性对照和分隔并集中包装这些管的试剂盒子。其中VKORC1基因和CYP2C9基因检测位点的引物序列分别是：VKORC1?1173G/T上游引物：CCGAGAAAGGTGATTTCCAAVKORC1?1173G/T下游引物：AGGGGAGGATAGGGTCAGTGVKORC1?1639C/T上游引物：CCTGACACCTAG...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：江培学，杨志军，陈伟华，范雯琦，吴大治，夏懿，
申请(专利权)人：上海复星医学科技发展有限公司，上海复星医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：