EGFR基因突变筛查评估分子靶向药物疗效的检测方法技术

本发明专利技术涉及ＥＧＦＲ基因突变筛查评估分子靶向药物疗效的检测方法，其特征在于，具体步骤为：采集被测者血清或肿瘤组织样本，进行基因组ＤＮＡ的抽提，对ＥＧＦＲ基因第１８－２１号外显子进行检测，相应位点特异性引物的设计以及用于序列测定的实验方案、试剂以及报告生成系统，通过同时检测分析个体的ＥＧＦＲ基因第１８－２１号外显子是否存在突变，来评估用于治疗癌症个体的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂类药物的有效性。本发明专利技术的优点是可用于癌症个体表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂类药物的应用。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种ＥＧＦＲ基因突变筛查评估分子靶向药物疗效的检测方法，其特征在于，具体步骤为：　步骤１．采集被测者血清或肿瘤组织样本；　步骤２．基因组ＤＮＡ的抽提方法：　采用硅胶吸附法抽提步骤１中被测者ＤＮＡ，抽提时间为２－３小时，采用 电泳凝胶成像法对ＤＮＡ浓度和纯度作检测，肉眼可见清晰白色条带即可判断获得的ＤＮＡ能进入下一步检测；　步骤３．基因分型：　将每一个被测者样本分别放入４个反应孔，４个反应孔分别检测ＥＧＦＲ基因１８－２１号外显子突变情况，采用ＰＣＲ技 术进行扩增、凝胶电泳技术检测纯度、测序技术对这些位点进行基因型进行确定：　步骤３－１，反应体系配置：　在每一个反应孔中加入ＰＣＲ标准反应体系，标准反应体系的引物浓度为１０ｕＭ，反应体系总体积为２０ｕｌ，其中，ＰＣＲ试剂５ｕｌ，正 向引物和反向引物各０．４ｕｌ，２０ｎｇ／μｌ的步骤２得到的ＥＧＦＲ　ＤＮＡ模板３μｌ，去离子水１１．２ｕｌ；　ＥＧＦＲ基因第１８外显子正向和反向引物：　正相引物：ｔｔｃｃａａａｔｇａｇｃｔｇｇｃａａｇｔ　反向引物：ｇｔｃａ ａｔｇｇｃｃｃｃｔｔｔｃａｔａａ　ＥＧＦＲ基因第１９外显子正向和反向引物：　正相引物：ｃｃｃｃａｇｃａａｔａｔｃａｇｃｃｔｔａ　反向引物：ａｇｔｇｃｔｇｇｇｔａｇａｔｇｃｃａｇｔ　ＥＧＦＲ基因第２０外显子正向和反向引 物：　正相引物：ｇｃａｃａｇｃｔｔｔｔｃｃｔｃｃａｔｇａ　反向引物：ｇａｔｇｇｇａｃａｇｇｃａｃｔｇａｔｔｔ　ＥＧＦＲ基因第２１外显子正向和反向引物：　正相引物：ａｃｔａａｃｇｔｔｃｇｃｃａｇｃｃａｔａ　反向引 物：ｔｃａｔｔｃａｃｔｇｔｃｃｃａｇｃａａｇ　步骤３－２，ＰＣＲ反应条件：　将反应孔在ＡＢＩ９７００型ＰＣＲ扩增仪上进行反应，反应条件为９５℃预热１５分钟；再进行３５个循环的９５℃、４５秒；６０℃、４５秒；７２℃、６０秒；７２℃ 、７分钟后降温至４℃；　步骤３－３，将反应孔在ＰＣＲ扩增仪反应后的产物进行电泳检测，有肉眼可见清晰白色条带即可进入下一步：　ａ．１ｗｔ％琼脂糖凝胶插小号孔梳子；　ｂ．２０００ｂｐＤＮＡ标记物６ｕｌ　ｃ．步骤３－２的Ｐ ＣＲ产物４ｕｌ加入电泳缓冲液１ｕｌ　ｄ．电泳电压：１２０ｖ　ｅ．电泳时间：２０ｍｉｎ拍摄一张电泳图；３０ｍｉｎ拍摄一张电泳图；...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛丹丹，傅咏南，
申请(专利权)人：上海中优医药高科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[]