一种悬浮芯片技术检测ＨＰＶ方法技术

本发明专利技术公开了一种悬浮芯片技术检测ＨＰＶ方法，它包括以下步骤：一，用ＰＣＲ－悬浮芯片技术，设计ＨＰＶ的通用引物和型特异性探针，步骤二，利用生物信息学设计和合成用于ＰＣＲ扩增ＨＰＶ的通用引物、不同基因型ＨＰＶ的探针以及不同基因型ＨＰＶ的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的标本纯化核酸、ＭＹ－ＰＣＲ扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型；步骤三，基于流式细胞术的高通量检测方法－悬浮芯片技术，利用一系列不同种类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒－待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种悬浮芯片技术检测HPV方法
技术介绍
人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses, HPV)感染与人类多种肿瘤特别是宫 颈癌的发生、发展密切有关。而宫颈癌为女性最常见的癌症之一，其发病率仅次于乳腺癌。 全球每年新发病例约40万且有超过20万妇女死于该病。在发展中国家，由于宫颈癌筛查 工作的不完善，其发生率是发达国家的6倍。近年，年轻宫颈癌患者有明显上升趋势，发病 以每年2% 3%速度增长，对妇女的身心健康造成极大的危害。因此，对宫颈癌进行早期 筛查的一项重要内容就是对HPV的检测。
技术实现思路
本专利技术提供了一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它不但通量高，检测所需标本量 少，而且快速，可靠性高，重复性好。 本专利技术采用了以下技术方案1一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它包括以下步 骤一，用PCR-悬浮芯片(PCR-SAT)技术，设计HPV的通用引物和型特异性探针；步骤二，利 用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通用引物、不同基因型HPV的探针以及不同 基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的 标本纯化核酸、MY-PCR扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型；步骤三， 基于流式细胞术的高通量检测方法-悬浮芯片技术，利用一系列不同种类的微小、分散的 微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似三明治的颗粒_待测物复合体所散发 的荧光，从而测定待测物的数量，各种微球的荧光强度能标记上不同的探针可以捕获到不 同的待测物，以此达到高通量检测的目的。 本专利技术具有以下有益效果(1)通量高目前有100种微球可供研究使用。(2)检 测所需标本量少本技术用O. lml的血清就可进行10种以上病毒的检测。(3)快速传统的 核酸杂交需要多次洗涤的步骤，而该技术是对单个微球进行检测，不存在本底影响的问题， 基本上不需洗涤，因此所需的实验时间短；并且，配上自动加样器和蠕动泵，微球通过荧光 检测仪的速度可以达到1000个/秒以上。100个相同探针微球的检测就具有统计学意义， 因此，100种地址微球通过荧光检测仪的检测只需10秒，可以连续高效地进行多样本分析。 (4)可靠性高本技术是对多个微球荧光信号进行单独检测后，用配套的软件进行统计分 析，使检测结果更加精确、可靠，传统的核酸杂交技术是对分子集合的光学信号进行检测得 到结果，不进行统计。(5)重复性好不同种类的微球分别标记后混合，再分装成小份，用于 分别检测各标本，各小份的性质完全一致。该技术经试给检测灵敏度和特异性达均到98% 以上，检测变异系数小于5%。具体实施例方式本专利技术利用PCR-悬浮芯片(PCR-SAT)技术，设计HPV的通用引物和型特异性探 针对HPV基因型进行高通量检测，再利用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通 用引物、不同基因型HPV的探针以及不同基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针 交联相应荧光微球，临床官颈糜烂患者的标本纯化核酸、MY-PCR扩增后与荧光微球进行杂 交，检测荧光信号进行基因分型，最后基于流式细胞术的高通量检测方法_悬浮芯片技术 (suspension arraytechnology， SAT)。基本原理近似于ELISA的检领lj，即利用一系列不同种 类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似三明治的颗粒_待 测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。不同种类的微球有特定的荧光强度，大 小一致，标记上不同的探针可以捕获到不同的待测物，以此达到高通量检测的目的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种悬浮芯片技术检测ＨＰＶ方法，它包括以下步骤：一，用ＰＣＲ－悬浮芯片（ＰＣＲ－ＳＡＴ）技术，设计ＨＰＶ的通用引物和型特异性探针，步骤二，利用生物信息学设计和合成用于ＰＣＲ扩增ＨＰＶ的通用引物、不同基因型ＨＰＶ的探针以及不同基因型ＨＰＶ的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的标本纯化核酸、ＭＹ－ＰＣＲ扩增后与荧光微球进行杂交，检测荧光信号进行基因分型；步骤三，基于流式细胞术的高通量检测方法－悬浮芯片技术，利用一系列不同种类的微小、分散的微球捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒－待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量，各种微球的荧光强度能标记上不同的探针可以捕获到不同的待测物，以此达到高通量检测的目的。

【技术特征摘要】
一种悬浮芯片技术检测HPV方法，它包括以下步骤一，用PCR-悬浮芯片(PCR-SAT)技术，设计HPV的通用引物和型特异性探针，步骤二，利用生物信息学设计和合成用于PCR扩增HPV的通用引物、不同基因型HPV的探针以及不同基因型HPV的标准品，化学交联法将不同的探针交联相应荧光微球，临床宫颈糜烂患者的标本纯化核酸、MY-PCR扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶军，
申请(专利权)人：叶军，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]