本发明专利技术公开了一种阿尔茨海默病早期诊断液相芯片，主要包括有：包被微球：含有分别包被了ｔ－ｔａｕ捕获抗体的微球，包被了ｐ－ｔａｕ２３１捕获抗体的微球，包被了ｐ－ｔａｕ１８１捕获抗体的微球，包被了ｐ－ｔａｕ１９９捕获抗体的微球，和包被了Ａβ↓［１－４２］捕获抗体的微球，上述微球具有不同颜色编码；分别用生物素标记的检测抗体；链亲和素藻红蛋白。本发明专利技术所提供的阿尔茨海默病早期诊断液相芯片具有检测效率高，所需样本量少，特异性强，灵敏度高等优点。同时，各项神经生化损伤标志物可自由组合，使用方便。同时，由于所有反应均处在液相环境，更有利于保持蛋白质的天然构象，使探针和被检测物的反应更快更完全，因此检测灵敏度和线性范围均得到极大的提高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学体外诊断技术，具体的是涉及。
技术介绍
老年性痴呆(又称阿尔茨海默病，Alzheimer disease, AD)是一种以认知功能减退、生活 功能下降及精神行为异常为临床表现的神经系统退行性疾病。AD的典型病理特征是神经元内 出现神经原纤维缠结(NFT)，细胞外有老年斑(SP)沉积及神经元数量减少。随着老龄人口 的增加，AD的患病率逐年增加。目前，全世界约有1800万人罹患阿尔茨海默病，其中50%发 生在发展中国家。另据WHO估计，到2050年，全世界患该病的人数将增加一倍，达到3400万人。 统计资料显示，我国老年性痴呆患病率在65岁以上老人中所占的比例为6.6%， 85岁以上老人 为30%。老年性痴呆的患病率会随着年龄的增长而上升，从而严重威胁着老年人的生命健康并 给社会带来了巨大的负担。2001年有研究者预测，在美国对AD进行早期临床确诊，每年可节 省约一千亿美元的医疗费用。AD早期患者的生理和心理与正常衰老之间没有明显的界限，很难及时为患者确诊，因此 目前仍缺乏特异的诊断及有效的治疗。而理想的诊疗应在大量突触和神经元丧失以前，所以 目前对于该病的研究重点转移到了对于AD早期或极早期的诊断和治疗上。然而，除了在患者死后通过大脑中衰老斑和神经纤维混乱的出现这些指标进行疾病确认外还没有公认的诊断标 准。临床诊断主要根据病人的病史，大脑影像学以及心理学，认知和神经学测试。实验室辅 助诊断方法主要是检测体液中含有的可溶性标志物。近年，众多AD研究专家及机构投入大量精力研究生物学检测指标，并从AD患者的脑脊 液或血液中发现一些具鉴别诊断意义的生化指标，如tau蛋白、e淀粉样蛋白(Ae)、载脂蛋 白E(ApoE)、 Ae前体蛋白(APP)、早老素(PS-1， PS-2)和天冬氨酸转氨酶(AST)等。t-tau(总 tau蛋白)，p-tau(磷酸化tau蛋白)和A3 W2是用于AD辅助诊断的3种重要生物学标记物。 在脑脊液中对这3种标记物及它们的亚型(p-tau231、 p-taul81、 p-tau404、 p-tau396等)已经有很多研究(彭丹涛，2005)。脑脊液中e淀粉样蛋白的浓度可以部分反映脑组织中e淀粉样蛋白的沉积与清除情况；而脑脊液中tau蛋白和磷酸化tau蛋白(p-tau蛋白)浓度能够反 映大脑神经原纤维缠结形成的情况，作为神经元和神经轴变性的指标。(l)t-tau总tau蛋白存在于正常脑组织神经元轴突中，参与微管交联，又称微管相关 tau蛋白。脑脊液中tau蛋白可能来自死亡的或退化变性的神经细胞。约85%的AD患者脑脊 液中tau蛋白水平显著升高，约为健康对照组及其它神经系统疾病对照组的3倍(李华芳， 1999;薛海波，2007)。因此，监测高危人群脑脊液tau蛋白浓度的变化，对早期明确阿尔茨 海默病诊断大有裨益。升高的脑脊液t-tau可预示轻度认知功能障碍(MCI， 一种介于老年 痴呆和正常老年人认知功能减退的状态，也是认知障碍进行预防性干预的最佳阶段)患者中 潜在的神经轴索损伤和神经变性。这一指标主要预示在许多不同疾病中全面神经损伤。但tau 蛋白过度磷酸化则导致神经纤维缠结，是AD的主要病理特点之一。在几个研究中， 一个重要 发现是这一改变也出现在早期痴呆中。因此脑脊液中t-tau可以鉴别AD和正常老化，平均敏 感度75%，特异性85%。随着年龄增加，没有精神神经疾病的人群也有t-tau增加。因此和 年龄相关的脑脊液t-tau浓度水平应被诊断采用。21-50岁，t-tau浓度小于300 pg/ml; 51-70 岁，t-tau浓度小于450 pg/ml; 70-93岁，t-tau浓度小于500pg/ml (Sjogren M， 2001)。脑脊液中t-tau在鉴别AD和其他疾病造成的痴呆有一定的局限性。该实验的敏感性为 81%，但特异性仅为57% (Parnetti， 2001)。 t-tau增加也出现在血管性痴呆(VD)、额颞叶 痴呆(fron-totemporal dementia, FTD)、路易体痴呆(lewy body disease, LBD)的一些病患 中，某些语言性痴呆也出现t-tau增加(Fabre F， 2001;姚洁，2007)。因此，t-tau在鉴 别AD的其他类型痴呆的特异性不高，不能被当作AD鉴别诊断的标志物。(2)异常磷酸化的tau蛋白(p-tau)正常tau蛋白是一种含磷蛋白质，每摩尔tau蛋 白中含磷酸2 3mo1。在AD患者中，tau蛋白被异常过度磷酸化。这种异常磷酸化的tau蛋 白是AD患者脑神经元中双股螺旋丝的主要成分。采用免疫印迹定量测定，发现AD患者脑中 正常tau蛋白含量明显降低，而tau蛋白总量则显著高于同龄正常人，且增加的tau蛋白中 以异常过度磷酸化的形式为主。2001年多个国家学者联合对570例AD患者脑脊液磷酸化tau 监测分析后，认为其是诊断AD的一个可靠生物标识。磷酸化的tau诊断阿尔茨海默病的灵敏 度达85.2%，特异度达85% (Leclerc S， 2001)。因此，AD特异性磷酸化tau的含量是检测 AD的特异性生化指标。在人体中有6种tau蛋白异构体和多于21种磷酸化位置的tau蛋白。用单克隆抗体可以 检出t-tau的磷酸化物及异构体。p-tau蛋白的多个国际临床研究中心的研究主要集中在tau 蛋白不同的磷酸化位点tau蛋白在丝氨酸199磷酸化(p-taul99);在苏氨酸231磷酸化 (p-tau231);在苏氨酸181磷酸化(p-taul81);在丝氨酸396和切4磷酸化(p-tau396/404)。 不同的磷酸化位点检测可以极大提高诊断的准确性。Augustinack等通过组织化学研究显示，脑脊液tau蛋白的第231位的苏氨酸磷酸化(p-tau231)在疾病早期甚至在成对螺旋丝形成之前就已出现，且敏感度可达85%(Augustinack J， 2002)。免疫学研究指出tau蛋白在苏氨酸231磷酸化对于AD是特异的，并在疾病发展早期即可 出现，甚至早于微管的形成。因此，p-tau231在当前被普遍认为是AD诊断的一个特异性生 物学标志物。脑脊液P-tau231检测在AD鉴别诊断中的作用在一个早期研究中，检测脑脊液 p-tau231对鉴别AD和0ND敏感性为85X，特异性为97% (总正确率为91 %) (Buerger K， 2006)。在一个192例病例的独立研究中，发现脑脊液p-tau231在AD鉴别诊断中优于总的 tau蛋白。检测脑脊液p-tau231水平，鉴别AD和其他非AD病例具有85%敏感性和75%特 异性。特别是AD和FTD的鉴别，p-tau231特异性和t-tau均为90. 2%，但敏感性从t-tau 的57. 7%增加到90. 2%。最近发表的研究中，AD病人的脑脊液p-tau231水平相对于老年抑 郁症和健康对照有明显增加。鉴别可能的AD与MD，脑脊液p-tau231检测准确率达87%,轻 度AD与MD鉴别，脑脊液p-tau231检测准确率达78% 。 p-tau231浓度变化和AD严重程度相 关。AD病程中p-tau231下降，可能随着疾病进展，p-ta本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种阿尔茨海默病早期诊断液相芯片，其特征是，主要包括有： １）包被微球：含有分别包被了ｔ－ｔａｕ捕获抗体的微球，包被了ｐ－ｔａｕ２３１捕获抗体的微球，包被了ｐ－ｔａｕ１８１捕获抗体的微球，包被了ｐ－ｔａｕ１９９捕获抗体的微球，和包被了Ａβ↓［１－４２］捕获抗体的微球，上述微球分别具有不同颜色编码； ２）生物素标记检测抗体：含有分别用生物素标记的ｔ－ｔａｕ、ｐ－ｔａｕ２３１、ｐ－ｔａｕ１８１、ｐ－ｔａｕ１９９及Ａβ１－４２的检测抗体；和 ３）链亲和素藻红蛋白。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，林一群，
申请(专利权)人：广州益善生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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