本发明专利技术提供一种用于转基因玉米检测的探针组合、液相芯片、试剂盒及其应用，涉及转基因检测技术领域。探针组合包括由根据转基因玉米中常见的外源基因Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS‑P0、EPSPS‑P2、P35S、T35S以及Nos‑3’设计出10种检测探针和根据玉米内源基因Ivr1设计的阳性探针，该探针组合分别与荧光编码微球偶联后，可用于检测出转基因玉米是否含有上述转基因成分，其具有操作简单、特异性强、灵敏度高、通量大的特点，且其对种子站、农科院所和边境口岸对转基因玉米检测具有重要作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及转基因检测
，具体而言，涉及一种用于转基因玉米检测的探针组合、液相芯片、试剂盒及其应用。
技术介绍
目前，转基因玉米是目前全球最主要的转基因粮食作物之一。根据国际农业生物技术应用服务组织(ISAAA)资料显示，从1996年到2015年的20年期间全球转基因作物累计种植面积达到空前的20亿公顷，相当于中国大陆总面积(9.56亿公顷)或美国总面积(9.37亿公顷)的2倍，其中转基因玉米占了30％。转基因农作物在全球市场的大量出现，在其环境和食品安全问题尚未完全确定的情况下，中国、欧盟等国家和组织要求对其进行标识。因此，快速、准确、灵敏和高通量的转基因产品检测技术是非常主要的。目前，在基因水平上检测转基因农作物的方法已经有很多，主要包括PCR(聚合酶链式反应)技术和基因芯片技术。但由于转基因农作物种类多、数量大，很多作为加工原料引进，经过处理后，转基因成分可能会降解，所以使检测难度变大，且现有的检测试剂盒单次检测能够检测出的转基因成分类别少。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种用于转基因玉米检测的探针组合，此探针组合可用于快速准确的检测出转基因玉米中的多种转基因成分，其具有特异性好，灵敏度高，通量大、结果可靠等特点。本专利技术的第二目的在于提供一种用于转基因玉米检测的液相芯片，其由上述探针组合分别与荧光编码微球偶联制成，此液相芯片可用于快速准确的检测出转基因玉米中的多种转基因成分，其具有特异性好，灵敏度高，通量大、结果可靠等特点。本专利技术的第三目的在于提供一种用于转基因玉米检测的试剂盒，此试剂盒包括上述液相芯片，此试剂盒快速准确的检测出转基因玉米中的多种转基因成分，具有特异性好，灵敏度高，通量大、结果可靠等特点。本专利技术的第四目的在于提供另一种用于转基因玉米检测的试剂盒，此试剂盒快速准确的检测出转基因玉米中的多种转基因成分，具有特异性好，灵敏度高，通量大、结果可靠等特点。本专利技术的第五目的在于提供上述用于转基因玉米检测的试剂盒在玉米转基因成分检测中的应用。本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。一种用于转基因玉米检测的探针组合，其包括5’端标记C12分子臂和氨基修饰的阳性探针和检测探针，阳性探针的碱基序列为SEQIDNO.33所示，且检测探针的碱基序列为选自SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示序列的中的任一种；或阳性探针的碱基序列为SEQIDNO.33所示序列的反向互补序列，检测探针的碱基序列为选自SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示序列的中的任一种的反向互补序列。一种用于转基因玉米检测的液相芯片，其由上述的用于转基因玉米检测的探针组合分别与羟基化的荧光编码微球偶联混合制成。一种用于转基因玉米检测的试剂盒，其包括上述的用于转基因玉米检测的液相芯片。一种用于转基因玉米检测的试剂盒，其包括对照组和检测组，检测组包括第1-10检测组中的至少一个，对照组包括正向引物、反向引物以及5’端带有C12分子臂和氨基修饰标记的阳性探针，每个检测组合均包括正向引物、反向引物以及5’端带有C12分子臂和氨基修饰标记的检测探针，对照组的正向引物和反向引物其中之一和每个检测组的正向引物和反向引物其中之一的5’端带有生物素标记；其中，第1-10检测组的正向引物和对照组的正向引物的碱基序列分别如SEQIDNO.1-11所示，第1-10检测组的反向引物和对照组的反向引物的碱基序列分别如SEQIDNO.12-22所示；当第1-10检测组的反向引物和对照组的反向引物的5’端带有生物素标记时，第1-10检测组和对照组的检测探针的碱基序列分别如SEQIDNO.23-33所示；当第1-10检测组的正向引物和对照组的正向引物的5’端带有生物素标记时，第1-10检测组和对照组的检测探针的碱基序列分别为SEQIDNO.23-33所示序列的反向互补序列。上述所述的用于转基因玉米检测的试剂盒在玉米转基因成分检测中的应用。本专利技术提供的用于转基因玉米检测的探针组合、液相芯片、试剂盒及其应用有益效果是：本专利技术提供的用于转基因玉米检测的探针组合包括5’端标记C12分子臂和氨基修饰的阳性探针和检测探针，阳性探针的碱基序列为SEQIDNO.33所示，且检测探针的碱基序列为选自SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示序列的中的任一种。或者阳性探针的碱基序列为SEQIDNO.33所示序列的反向互补序列，检测探针的碱基序列为选自SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示序列的中的任一种的反向互补序列。由于SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示的检测探针的序列针对转基因玉米常见的转基因成分Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’进行特异性设计，上述5’端标记C12分子臂和氨基修饰的各探针能够与荧光编码微球偶联混合后，得到液相芯片，其与多重PCR扩增产物特异性结合，通过液相芯片的检测方法，可检测出样品中是否含有上述转基因成分。其中，阳性探针针对性检测的玉米内源基因Ivr1，作为阳性对照，以使检测结果更可靠，避免假阳性结果出现。总之，本专利技术的用于转基因玉米检测的探针组合具有灵敏度高、特异性强、单次可检指标多的特点，其对种子站、农科院所和边境口岸对转基因玉米检测具有重要作用。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例5的检测结果；图2为本专利技术实施例6的检测结果；图3为本专利技术实施例7的检测结果；图4为本专利技术实施例8的检测结果。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的用于转基因玉米检测的探针组合、液相芯片、试剂盒及其应用进行具体说明。液相芯片是继基因芯片、蛋白芯片之后的新一代高通量分子检测技术平台。迄今为止十年时间，全球已有数百套基于xMAP技术的检测平台用于免疫学、蛋白质、核酸检测、基因研究等领域，该技术已成为一种新的蛋白质组学和基因组学研究工具，也是最早通过美国食品与药物管理局(FDA)认证的可用于临床诊断的生物芯片技术。该技术主要通过红、绿两束激光分别检测微球编码和报告荧光来达到定性和定量的目的，一个反应孔内可以完成多达100种不同的生物学反应。这使它具有生物芯片的高通量、高集成、微型化、连续化和自动化等优点，还具有液相反应的高敏感性、高重复性、检测线性范围宽、反应快速等优点，并且该方法操作简便、快捷、样品用量少。基于此技术，专利技术人针对转基因玉米常见的转基因成分如Pat、Bar、Cry1Ab、Cry1Ac、Cry105、EPSPS-P0、EPSPS-P2、P35S、T35S以及Nos-3’等的保守序列以及玉米内源基因Ivr1的保守序列设进行计，得到了检测上述基因成分的1本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于转基因玉米检测的探针组合，其特征在于，其包括5’端标记C12分子臂和氨基修饰的阳性探针和检测探针，所述阳性探针的碱基序列为SEQ ID NO.33所示，且所述检测探针的碱基序列为选自SEQ ID NO.23‑SEQ ID NO.32所示序列的中的任一种；或所述阳性探针的碱基序列为SEQ ID NO.33所示序列的反向互补序列，所述检测探针的碱基序列为选自SEQ ID NO.23‑SEQ ID NO.32所示序列的中的任一种的反向互补序列。
【技术特征摘要】
1.一种用于转基因玉米检测的探针组合，其特征在于，其包括5’端标记C12分子臂和氨基修饰的阳性探针和检测探针，所述阳性探针的碱基序列为SEQIDNO.33所示，且所述检测探针的碱基序列为选自SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示序列的中的任一种；或所述阳性探针的碱基序列为SEQIDNO.33所示序列的反向互补序列，所述检测探针的碱基序列为选自SEQIDNO.23-SEQIDNO.32所示序列的中的任一种的反向互补序列。2.根据权利要求1所述的用于转基因玉米检测的探针组合，其特征在于，所述探针组合还包括5’端标记C12分子臂和氨基修饰的阴性探针，所述阴性探针的碱基序列如SEQIDNO.34所示。3.一种用于转基因玉米检测的液相芯片，其特征在于，其由权利要求1或2所述的用于转基因玉米检测的探针组合分别与羟基化的荧光编码微球偶联混合制成。4.根据权利要求3所述的用于转基因玉米检测的液相芯片，其特征在于，所述探针组合中的每个探针按0.1～0.2nmol的量对应1×105个所述羟基化的荧光编码微球进行偶联。5.一种用于转基因玉米检测的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求3或4所述的用于转基因玉米检测的液相芯片。6.一种用于转基因玉米检测的试剂盒，其特征在于，其包括对照组和检测组，所述检测组包括第1-10检测组中的至少一个，所述对照组包括正向引物、反向引物以及5’端带有C12分子臂和氨基修饰标记的阳性探针，每个所述检测组合均包括正向引物、反向引物以及5’端带有C12分子臂和氨基修饰标记的检测探针，所述对照组的所述正向引物和所述反向引物其中之一和每个所述检测组的所述正向引物和所述反向引物其中之一的5...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭尚，秦子苏，王岳华，周均，
申请(专利权)人：上海泽衡生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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