本发明专利技术公开了一种TORCH检测并联探针，包括弓形虫TOX探针1、2、3，序列分别为SEQ ID NO.1～3；风疹病毒RV探针1、2、3，序列分别为SEQ ID NO.4～6；巨细胞病毒CMV探针1、2、3，序列分别为SEQ ID NO.7～9；单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3，序列分别为SEQ ID NO.10～12；和单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3，序列分别为SEQ ID NO.13～15；还公开了含有上述探针的基因芯片以及该基因芯片的试剂盒，以及利用该试剂盒进行TORCH检测的方法。本发明专利技术操作简单、结果易读，满足医院、产前检测等的现场检测需求，结果准确可靠。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学领域，涉及一种TORCH检测并联探针、基因芯片、试剂盒与检测方法。
技术介绍
TORCH是指可导致先天性宫内感染及围产期感染而引起围产儿畸形的病原体，它是一组病原微生物的英文名称缩写，其中T(Toxoplasma)是弓形虫，O(Others)是其他病原微生物，如梅毒螺旋体、带状疱疹病毒、细小病毒B19、柯萨奇病毒等，R(Rubella.Virus)是风疹病毒，C(Cytomegalo.Virus)是巨细胞病毒，H(Herpes.Virus)即是单纯疱疹I/II型。其中弓形虫寄生于细胞内，随血液流动，到达全身各部位，破坏大脑、心脏、眼底，致使人的免疫力下降；风疹病毒主要通过呼吸道传播，孕妇感染后能使胎儿致畸，病毒通过胎盘感染胎儿形成先天性感染，称为先天性风疹综合症(CRS)，主要是先天性白内障、先天性心脏病和神经性耳聋，风疹感染发生在孕期越早，胎儿的致畸也越严重；巨细胞病毒感染能引起宫内胎儿生长迟缓、小头形、脑炎、视网膜脉膜炎、黄疸、肝脾肿大、溶血性贫血等，新生儿死亡率较高；怀孕早期感染单纯疱疹病毒(HSV I、II型)能破坏胚芽面导致流产，孕中晚期虽少发畸胎，但可引起胎儿和新生儿发病。TORCH的感染影响着人口素质，与优生优育有重要关系。目前，临床上最常用的TORCH检测是ELISA法，常规的ELISA检测的是抗体，常检测IgM和IgG抗体，即可判断近期感染(IgM指标)，又可检测人群抗体(免疫力)水平(IgG指标)，但是如果要对5种病原体进行检测，就需要十几种试剂盒才能将所有的IgM和IgG检测完毕，每次反应只能检测一个指标，速度慢，效率低，费用昂贵，需要样本量大，并存在一定的窗口期，可能导致假阴性。生物芯片技术是九十年代发展起来的一项新兴生物技术。按照检测对象来分类，可以分为基因芯片和蛋白质芯片等两大类。相较于蛋白质芯片，基因芯片利用的是核苷酸链之间的互补作用，特异性强，重现性好。基因芯片指的是将大量(通常每平方厘米点阵密度高于400)探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。采用基因芯片进行检测，其检测通量大，在一张芯片上一次性完成几种病原体检测，直接针对病原体基因进行，结果更准确，具有检测灵敏度高、特异性好，所需样本量少等优点。目前，已有利用基因芯片技术检测TORCH的报道，如1)用于TORCH检测的探针、基因芯片和试剂盒CN 104846074A；2)一种ToRCH检测的荧光标记基因芯片试剂制备方法及其应用CN 103805715A，但是以上的研究存在假阳性率较高的可能。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异性好、结果准确、假阳性率低、检测效率高的TORCH检测并联探针、基因芯片、试剂盒与检测方法。本专利技术实现其目的的技术方案为：一种TORCH检测并联探针，包括弓形虫TOX探针1、2、3，风疹病毒RV探针1、2、3，巨细胞病毒CMV探针1、2、3，单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3和单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3；所述探针序列为：弓形虫TOX探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.1～3；风疹病毒RV探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.4～6；巨细胞病毒CMV探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.7～9；单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.10～12；单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.13～15。一种TORCH检测基因芯片，包括固体相和上述的探针组SEQ ID NO.1～15。作为优选地，所述固相载体为氨基修饰的玻璃基片、尼龙膜或者硝酸纤维素膜。一种TORCH检测试剂盒，包括前述的基因芯片。在上述TORCH检测试剂盒中，还包括以下引物对：弓形虫靶序列扩增引物对、风疹病毒靶序列扩增引物对、巨细胞病毒靶序列扩增引物对、单纯疱疹病毒I型靶序列扩增引物对、单纯疱疹病毒II型靶序列扩增引物对，所述引物对的序列分别为：弓形虫靶序列扩增引物对序列如SEQ ID NO.16、17所示；风疹病毒靶序列扩增引物对序列如SEQ ID NO.18、19所示；巨细胞病毒靶序列扩增引物对序列如SEQ ID NO.20、21所示；单纯疱疹病毒I型靶序列扩增引物对序列如SEQ ID NO.22、23所示；单纯疱疹病毒II型靶序列扩增引物对序列如SEQ ID NO.24、25所示。作为优选地，所述引物对的下游引物的5’端含有生物素标记。作为优选地，TORCH检测试剂盒还包括PCR反应体系、杂交缓冲液、亲和素、洗涤液、TMB显色液。作为优选地，10μL的PCR反应体系包括：50～150ng/μL的扩增模板0.4μL，Premix Taq 5μL，浓度为8～12μM的上、下游引物各0.2μL。。一种TORCH检测方法，使用前述的TORCH检测试剂盒进行检测，当检测对象的三个探针显示的检测结果一致时可以判断样品是否感染病原体；当检测对象的三个探针显示的检测结果不一致时，不能判断该待测样品为阳性或阴性，使用该检测试剂盒重新检测或者使用现有其它检测方法(比如Elisa方法)进行进一步验证。在上述的TORCH检测方法中，扩增5个病原体靶序列的PCR扩增反应程序均为95℃5min；95℃10s、55℃30s、72℃30s、30个循环；72℃10min。本专利技术的有益效果是：①能同时完成TORCH五种病原体的检测，减少反应复杂程度，简化实验操作；②针对TORCH五种病原体每种病原体均设计三条高特异性的探针，当3条探针均检测出阳性时才判断该项指标为阳性，能极大的提高产品的准确性和精确性，减少其它方法容易出现的假阳性问题；③本专利技术通过PCR技术对病原体DNA进行扩增，扩增产物与生物芯片上的寡核苷酸探针进行杂交，通过生物素标记，显色液进行显色后，可以用普通数码相机拍照或肉眼直接判读，直观的表现检测结果，操作简单、结果易读，满足医院、产前检测等的现场检测需求，为优生优育及诊断TORCH感染提供可靠的实验依据。附图说明图1为检测TORCH五种病原体的基因芯片示意图。图2为5种病原体基因扩增后PCR产物电泳条带图；Y-T：弓形虫；Y-R：风疹病毒；Y-C：巨细胞病毒；Y-H1：单纯疱疹病毒Ⅰ型；Y-H2：单纯疱疹病毒Ⅱ型；M：10000bp marker。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。主要试剂及生产者：氨基修饰的玻璃基片(武汉阳达生物科技有限公司)，病毒基因组DNA/RNA共提试剂盒(货号DP438，天根生化科技(北京)有限公司)，亲和素(辣根过氧化物酶标记)(碧云天生物技术研究所)，TMB显色液(上海生工生物工程有限公司)，Premix Taq(TAKARA公司，日本)：成分为PrimeSTARHS DNA Polymerase,dNTP Mixture,PrimeSTAR Buffer。引物合成公司为英潍捷基(上海)贸易有限公司。实施例1目的片段引物与探针设计查找NCBI数据库中弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的基因序列，选择高特异性的基因序列作为靶序列(5个检测对象选择的基因本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种TORCH检测并联探针，其特征在于：包括弓形虫TOX探针1、2、3，风疹病毒RV探针1、2、3，巨细胞病毒CMV探针1、2、3，单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3和单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3；所述探针序列为：弓形虫TOX探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.1～3；风疹病毒RV探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.4～6；巨细胞病毒CMV探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.7～9；单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.10～12；单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.13～15。
【技术特征摘要】
1.一种TORCH检测并联探针，其特征在于：包括弓形虫TOX探针1、2、3，风疹病毒RV探针1、2、3，巨细胞病毒CMV探针1、2、3，单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3和单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3；所述探针序列为：弓形虫TOX探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.1～3；风疹病毒RV探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.4～6；巨细胞病毒CMV探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.7～9；单纯疱疹病毒I型HSV I探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.10～12；单纯疱疹病毒II型HSV II探针1、2、3序列分别为SEQ ID NO.13～15。2.一种TORCH检测基因芯片，其特征在于：包括固体相和权利要求1所述的探针组。3.如权利要求2所述的TORCH检测基因芯片，其特征在于：所述固相载体为氨基修饰的玻璃基片、尼龙膜或者硝酸纤维素膜。4.一种TORCH检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求2或3所述的基因芯片。5.如权利要求4所述的TORCH检测试剂盒，其特征在于：还包括以下引物对：弓形虫靶序列扩增引物对、风疹病毒靶序列扩增引物对、巨细胞病毒靶序列扩增引物对、单纯疱疹病毒I型靶序列扩增引物对、单纯疱疹病毒II型靶序列扩增引物对，所述引物对的序列分别为：弓形虫靶序列扩增引物对序列如SEQ ID NO.16、17所示；风疹病毒靶序列<...
【专利技术属性】
技术研发人员：周勇，徐建，
申请(专利权)人：重庆威斯腾生物医药科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆;50
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