一种豇豆重花叶病毒的分子检测方法技术

本发明专利技术涉及豇豆重花叶病毒的分子检测方法，属于生物技术领域。该方法包括如下步骤：获得病毒粗提液；制备免疫捕获ＰＣＲ管；释放免疫捕获ＰＣＲ管中的豇豆重花叶病毒ＲＮＡ并以其为模板，以序列为：５’－ＧＧＣＴＴＣＴＧＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＡＡ－３’的ＣＰＳＭＶＲ为引物进行反转录反应，得到反转录产物；以反转录产物为模板，正向引物５’－ＧＧＴＣＡＡＴＣＣＣＧＧＣＡＴＴＡＴＴＧ－３’，反向引物ＣＰＳＭＶＲ，Ｔａｑ?Ｍａｎ探针ＣＰＳＭＶＰｒｏ?５’ＦＡＭ－ＴＧＴＡＧＣＡＣＡＡＴＣＡＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＡＧＣＡ－ＴＡＭＲＡ?３’，进行实时荧光ＰＣＲ反应；初始循环数≤３５，表示样品感染了豇豆重花叶病毒。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种豇豆重花叶病毒的分子检测方法，具体步骤如下：　　（１）样品病毒粗提液的制备：向待检样品中加入抽提缓冲液，经研磨及离心，取上清液，即为病毒粗提液；　　（２）免疫捕获ＰＣＲ管的制备：取稀释后的豇豆重花叶病毒包被抗体加入ＰＣＲ管中孵育，用洗涤缓冲液洗涤后，加入步骤１所述的病毒粗提液，４℃冰箱孵育过夜，洗涤后风干，即获得免疫捕获ＰＣＲ管；　　（３）免疫捕获ＰＣＲ管中豇豆重花叶病毒ＲＮＡ释放及反转录：释放步骤（２）所述免疫捕获ＰＣＲ管中的豇豆重花叶病毒ＲＮＡ并以其为模板，以序列为：５’－ＧＧＣＴＴＣＴＧＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＡＡ－３’的ＣＰＳＭＶＲ为引物进行反转录反应，得到反转录产物；　　（４）实时荧光ＰＣＲ反应：以步骤（３）所得反转录产物为模板，正向引物ＣＰＳＭＶＦ序列：５’－ＧＧＴＣＡＡＴＣＣＣＧＧＣＡＴＴＡＴＴＧ－３’，反向引物ＣＰＳＭＶＲ的序列：５’－ＧＧＣＴＴＣＴＧＣＡＧＧＴＧＴＴＣＣＡＡ－３’，Ｔａｑ　Ｍａｎ探针ＣＰＳＭＶＰｒｏ的序列：５’ＦＡＭ－ＴＧＴＡＧＣＡＣＡＡＴＣＡＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＡＧＣＡ－ＴＡＭＲＡ　３’，进行实时荧光ＰＣＲ反应；　　（５）结果分析：步骤４所述的实时荧光ＰＣＲ反应结束后，利用实时荧光ＰＣＲ仪分析软件，对扩增的图谱进行分析，当初始循环数（Ｃ↓［Ｔ］）≤３５时，判定实时荧光ＰＣＲ反应为阳性，表示所检测的病毒样品为豇豆重花叶病毒。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李彬，吴翠萍，粟寒，李艳华，吴晶，陈贯源，陈青，安榆林，
申请(专利权)人：江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]