活性药剂控制释放的多泡脂质体的制备制造技术

公开了含有生物学活性物质的多泡脂质体（ＭＶＬ），该多泡脂质体具有限定的大小分布，可调整的平均大小、可调整的内腔大小和数目，以及受控制的和可变的生物学活性物质的释放速率。制备方法包括将至少一种生物学活性物质封装入囊泡内，并且可以任选地将第一水性组分中的渗透间隔团包入脂质体内。活性物质向引入了脂质体的周围环境中释放的速率可随着第一水性组分之克分子渗压浓度的增加而降低，或随其克分子渗压浓度的降低而增加。（*该技术在2015年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
活性药剂控制释放的多泡脂质体的制备专利技术的背景1.专利技术的所属领域本专利技术涉及包裹生物活性物质之脂质体的多泡脂质体组合物。更具体地说，本专利技术涉及生产和使用被包裹物质具有可控制之释放速率的多泡脂质体的方法。2.相关现有技术用许多药物进引最佳治疗时常常要求长时间地保持药物水平。例如，用细胞周期特异性抗代谢物进行最佳抗肿瘤治疗时需要长时间地维持细胞毒性药物的水平。阿糖胞苷是一种高疗程依赖性抗肿瘤药物。因为这种药物只在细胞合成DNA时才杀伤之，所以为获得最佳细胞杀伤效果，需要使细胞长时间暴露于治疗浓度的药物中。又鉴于这类药剂在静脉内或皮下给药后的半寿期可能短至几个小时，所以它们的治疗效果也就很成问题。为了使象阿糖胞苷这样的细胞周期特异性药物达到最佳肿瘤细胞杀伤效果。有两个主要要求：首先，必须使肿瘤细胞接触到对宿主没有明显不可逆损害的高浓度药物；其次，必须使肿瘤长时间接触到药物，以保证有最大数目的肿瘤细胞处于细胞增殖的敏感性DNA合成期。另一类疗程依赖性药物的实例是氨基糖苷类抗生素。例如，丁胺卡那霉素是一种对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌菌株有显著临床抑制活性的氨基糖苷类抗生素。按照现有治疗程序，该药物的给药方法是每天静脉内或肌肉内给药一次或两次。最常用的临床使用剂量是15mg/kg/天，此相当于每天1克的最大推荐剂量。然而，这种给药方法将导致病人对药物的依赖，增加全身用药的毒付作用。因此，用于治疗感染的局部贮存慢释放制剂，例如局限于软组织或骨骼局部区域的药物制剂，与全身治疗用药相比，在增加局部组织药物水平，同时降低或避免游离药物的全身毒性方面应是有其优点的。特别有用的是受控制的释放制剂，它可用于在几小时，几天、甚至几周时间内释放治疗量的药物。-->已被用于提供控制药物释放之组合物的一个手段是脂质体包裹。在几种主要类型的脂质体中，多泡脂质体(Kim，等，Biochim，Biophys.Acta；728：339-348，1983)完全不同于单层脂质体(Huang，Biochemistry，8：334-352，1969；Kim，等，Biochim，Biophys.Acta；646：1-10，1981)、多层脂质体(Bangham，等J.Mol.Biol.，13：238-252，1965)和稳定的多层脂质体(美国专利No.4,522,803)。与单层脂质体相反，多泡脂质体含有多个水性内腔。与多层脂质体不同，多泡脂质体的多个水性腔是不同心的。现有技术中描述了许多生产各种类型单层和多层脂质体的技术；例如，美国专利No.4,522,803(Lenk)；4,310,506(Baldeschwieler)；4,235,871(Papahadjopoulos)；4,224,179(Schneider)；4,078,052(Papahadjopoulos)；4,394,372(Taylor)；4,308,166(Marchetti)；4,485,054(Mezei)和4,508,703(Redziniak)；Szoka，等，1980，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.，2：465-508；Liposomes，Marc J.Ostro，Ed.，Marcel-Dekker，Inc.，New York.1983，第一章；Poznansky和Juliano.Pharmacol.Rev.，36：277-236，1984。现有技术也描述了生产多泡脂质体的方法(Kim等，Biochim，Biophys.Acta；728：339-348，1983)。在Kim等人(Biochim，Biophys.Acta；728：339-348，1983)的方法中，某些小分子例如阿糖胞苷(也简写为Ara-C)的包裹率相对较低，并且被包入囊泡内的分子在生物体液中的释放速率较高。因此，发展了一种使用盐酸化物来减慢被包裹分子在生物体液中之释放速率的组合物(Kim的于1993年2月21日提交的申请序号为No.08/020,483的美国专利部分后读申请)。进一步的研究显示，可以在制成多泡脂质体之前，借助改变溶解有被封装物质之酸性溶液的性质来控制这些物质在人血浆中从多泡脂质体内释放的速率(Sankavam和Kim的1993年11月1 6日提交的美国专利申请序号No.08/153,657)。在这些研究工作中，发现某些无机酸例如盐酸、硝酸和高氯酸产生了最慢的释放速率，而其他一些酸例如乙酸、三氟乙酸和三氯乙酸则产生中等程度的释放速率。使用二元和三元酸例如硫酸和磷酸可获得最快的释放速率。以这种方法产生的脂质体组合物具有必须使用酸来产生有预期之药物释放动力性质的多泡脂质体的缺点。此外，某些可能提供多泡脂质体中的预期药物释放速率的酸也存在有药物加工方面的问题，例如腐蚀金属容器和生产中所使用的部件。另外，-->如果不使用酸即可产生在体内环境下实际应用的多泡脂质体，将可能避免潜在的对酸不稳定物质之稳定性方面的问题。研究已经表明，可以在脂质体中引入质子载体或离子载体以产生膜电位，以调节被包裹之生物学物质从脂质体中向水性环境中释放的速率(美国专利No.5,077,056)。另外，欧洲专利申请EP 0126580中公开了控制药物从囊泡组合物中释放的速率的方法。在后一种方法中，所提供的组合物包括封装在囊泡中的治疗剂的溶液，囊泡则悬浮于含有足够溶质以提供一定克分子渗压浓度的溶液内。这一克分子渗压浓度至少是基本上与囊泡内溶液的克分子渗压浓度呈等渗的，其中溶液的克分子渗压浓度大于生理盐水。囊泡内溶液的克分子渗压浓度保持恒定，而用来悬浮囊泡的溶液的克分子渗压浓度则是可变的。在这些条件下，释放速率随着悬浮介质接近等渗，或者就囊泡内溶液来说仍处于高渗时即逐渐降低。但这种方法的缺点是为了控制释放的速率必须改变向其中释放治疗剂之介质的克分子渗压浓度。这样，就使得这些组合物在实际应用中(例如在医药应用中)受到很大限制，因为在投用药物释放体系的部位，生物体液的克分子渗压浓度实质上是固定的，并且是不能改变的。例如，生物体液如血浆的克分子渗压浓度几乎是与生理盐水(0.9 wt％NaCl水溶液)等渗的，后者克分子渗压浓度为310mOsm。因此，悬浮介质的克分子渗压浓度在理论上应接近于310mOsm。鉴于已有脂质体组合物及生产方法学的上述限制，有必要发展不依赖于使用酸即可生产稳定的多泡脂质体的技术。本专利技术旨在实现这一目的。专利技术概要本专利技术提供生物活性物质控制释放的多泡脂质体(MVL)。通过改变包裹在脂质体内之第一水性组分的克分子渗压浓度来控制生物活性物质向生理环境例如人体内组织中释放的速率。在这种情况下，本专利技术的MVL因当其被导入体内部位时能提供延迟的治疗药物释放，从而可达到更好的治疗效果。出乎意料的是，随着包裹在脂质体内之第一水性组分的克分子渗压浓度增加，其释放速率则降低。可通过增加生物学活性物质的浓度，或加入渗透间隔团(osmoticspacer)来增加第一水性组分的克分子渗压浓度。本专利技术还提供制造有控制释放特征之多泡脂质体的非酸性方法，从-->而延长了体内治疗方面的应用。本专利技术的多泡脂质体具有很高的包裹效率，被包裹物质的受控制的释放速率、明确限定的可再现的大小分布、球形形状、易于调整的平均大小和本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产多泡脂质体的方法，该方法包括以下步骤：（ａ）从两种不相混溶的组分，即包含至少一种有机溶剂，至少一种两亲性脂质和中性脂质的脂质组分，和包含至少一种生物学活性物质的第一水性组分，形成油包水型乳液；（ｂ）使此油包水型乳液分散到第二水性组分中以形成溶剂小球；（ｃ）从溶剂小球中除去有机溶剂，以形成多泡脂质体；其中选择第一水性组分的克分子渗压浓度以调节从多泡脂质体向生理相关水性环境中释放的速率。

【技术特征摘要】
US 1994-9-13 08/305,1581.生产多泡脂质体的方法，该方法包括以下步骤：(a)从两种不相混溶的组分，即包含至少一种有机溶剂，至少一种两亲性脂质和中性脂质的脂质组分，和包含至少一种生物学活性物质的第一水性组分，形成油包水型乳液；(b)使此油包水型乳液分散到第二水性组分中以形成溶剂小球；(c)从溶剂小球中除去有机溶剂，以形成多泡脂质体；其中选择第一水性组分的克分子渗压浓度以调节从多泡脂质体向生理相关水性环境中释放的速率。2.权利要求1的方法，其中两亲性脂质是带有净的负电荷的两亲性脂质。3.权利要求2的方法，其中两亲性脂质选自心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇和磷脂酸。4.权利要求2的方法，其中脂质组分还包含固醇。5.权利要求4的方法，其中脂质组分还包含两性离子脂质。6.权利要求1的方法，其中两亲性脂质是两性离子脂质。7.权利要求5的方法，其中两性离子脂质选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂及溶血磷脂酰胆碱。8.权利要求1的方法，其中两亲性脂质带有净正电荷。9.权利要求8的方法，其中两亲性脂质选自二酰基三甲铵丙烷、二酰基二甲铵丙烷和硬脂酰胺。10.权利要求1、2、4、6或8的方法，其中第一水性组分还包含渗透间隔团，借以提高第一水性组分的克分子渗压浓度。11.权利要求1、2、4、6或8的方法，其中脂质组分选自磷脂和磷脂的混合物。12.权利要求1或6的方法，其中生理上相关的水性环境是贮存介质。13.权利要求1或6的方法，其中生理上相关的水性环境选自包括但不只限于生理盐水、缓冲盐水、人血浆、血清、脑脊液、皮下液、滑液、眼内液、腹腔内液、肌肉内液，或其组合的物组。14.权利要求1的方法，其中至少一种两亲性脂质带有净负电荷。15.权利要求1的方法，其中两亲性脂质是以与胆固醇的混合物的形式提供的。16.权利要求1的方法，其中亲脂性生物学活性材料是以与脂质组分的混合物的形式提供的。17.权利要求11的方法，其中中性脂质选自三油精、三辛精、大豆油、猪脂、牛油、生育酚、角鲨烯，及其组合。18.权利要求1的方法，其中有机溶剂选自醚、烃、卤代烃、卤代醚、酯、CO2、NH3、氟利昂及其组合。19.权利要求1的方法，其中生物学活性材料是亲水的。20.权利要求1的方法，其中使用选自机械搅拌，超声供能和喷嘴雾化的方法进行两种所述组分的乳化。21.权利要求20的方法，其中在选用的乳化方法的不同时间和期间测定囊泡内水性腔的平均大小和数目。22.权利要求1的方法，其中第一水性组分基本上是由水和生物学活性物质组成的。23.权利要求1的方法，其中第...

【专利技术属性】
技术研发人员：M沙卡兰姆，S金，
申请(专利权)人：斯卡法玛公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]