一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法技术

本发明专利技术公开了一种固相法和液相法结合合成亮丙瑞林的新工艺，包括步骤：１）由Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ和ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂为起始原料，得到Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂；２）逐一偶联合成侧链全保护亮丙瑞林前体肽－ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂；３）对其进行切割，得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽；４）对侧链全保护亮丙瑞林前体肽乙胺化，得到侧链全保护亮丙瑞林；５）对侧链全保护亮丙瑞林经脱侧链保护基团反应，获得亮丙瑞林的粗品；６）亮丙瑞林的粗品经过分离纯化、冻干得到亮丙瑞林精肽。本发明专利技术具备大规模化生产能力，操作简易、工艺稳定、生产成本低，总收率超过５０％，具有极为可观的经济实用价值和广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于制药
，尤其是涉及一种固相法和液相法结合制备亮丙 瑞林的新工艺。
技术介绍
亮丙瑞林，制剂中文名称为醋酸亮丙瑞林、抑那通或者简称亮丙瑞林，英文名称为Leuprorelin acetate、 Enanton， Lucrin等，其结构为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NtiEt分子式<:5必84>116012分子量1209.41CAS登录号53714-56-0亮丙瑞林属于GnRH类似物，作用同布舍瑞林。重复给予大剂量的促黄体 生成释放激素(LH-RH)或其高活性衍生物醋酸亮丙瑞林，在首次给药后能立 即产生一过性的垂体-性腺系统兴奋作用(急性作用)，然后抑制垂体生成和释放 促性腺激素。它还进一步抑制卵巢和睾丸对促性腺激素的反应，从而降低雌二 醇和睾丸酮的生成(慢性作用)。醋酸亮丙瑞林的促黄体生成激素(LH)释放活 性约为LH-RH的100倍，它的抑制垂体-性腺系统功能的作用也强于LH-RH。o、醋酸亮丙瑞林是高活性的LH-RH衍生物，由于它对蛋白分解酶的抵抗力和对 LH-RH受体的亲和力都比LH-RH强，所以能有效地抑制垂体-性腺系统的功能。 此外，醋酸亮丙瑞林又是一种缓释制剂，它恒定地向血液中释放醋酸亮丙瑞林， 故能有效地降低卵巢和睾丸的反应，产生高度有利的垂体-性腺系统的抑制作用。 对子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌患者，每4周1次皮下注射醋酸 亮丙瑞林，使血清中雌二醇下降到接近绝经期的水平。因此本品有卵巢功能抑 制作用，可抑制正常排卵和使月经停止。对前列腺癌患者皮下注射醋酸亮丙瑞 林，每4周1次，使血清睾丸酮浓度降至去势水平之下，表明本品有药理学的 去势作用。对患有中枢性性早熟的男孩和女孩每4周1次，皮下注射醋酸亮丙 瑞林后，血清中促性腺激素的水平降至青春期前的水平，表明对第二性征有进 行性抑制作用。亮丙瑞林的适应症为子宫内膜异位症;伴有月经过多、下腹痛、腰痛及贫血 等的子宫肌瘤；绝经前乳腺癌，且雌激素受体阳性患者；前列腺癌；中枢性性 早熟症。临床主要用于前列腺癌及子宫内膜异位症。亮丙瑞林是1974年由日本武田化工的Fujino Masahiko等人首先发现促黄体 激素释放激素的九肽酰胺类似物具有很好的活性，并且专利技术合成工艺。其先后 在日本、德国、美国等国家申请专利，专利号分别为JP19740027442、DE2446005、 US4008209等。随后，又有一些研究机构和个人发表了一些合成工艺，专利号 为EP1088555、 EP1777232、 US5480868、 CN1865280等。目前已经公布的亮丙瑞林制备工艺都有着一定的缺陷，不能在操作复杂性、 危险性、生产周期、产品总收率、产品成本和污染环境等方面达到一种较好的 结合；应用价值不高。
技术实现思路
6本专利技术的目的是提供了一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、 有利于实现产业化的亮丙瑞林的固-液结合的合成工艺，解决现有技术存在的缺 陷。为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案 ，其特征是，包括如下步骤1) 由Fmoc-Pro-OH和替代度为0.2mmol/g 1.2mmol/g的HMPB-AM树 脂为起始原料，得到Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂；2) 将Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂采用Fmoc/tBu固相法逐一偶联的方式 依次连接具有保护基团的氨基酸，合成得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽 -HMPB-AM树脂；3) 对侧链全保护亮丙瑞林前体肽-HMPB-AM树脂进行切割，得到侧链 全保护亮丙瑞林前体肽；4) 对侧链全保护亮丙瑞林前体肽经过乙胺化，得到侧链全保护亮丙瑞林；5) 对侧链全保护亮丙瑞林经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗肽；6) 对亮丙瑞林粗肽经过高压液相柱分离纯化、冻干机冻干得到亮丙瑞林 精肽。优选的方案是所述HMPB-AM树脂替代度为0.6mmol/g。 更为优选的方案是所述保护的Fmoc-Pro-HMPB-AM树脂，是 Fmoc-Pro-OH与HMPB-AM树脂以有机溶剂作反应溶剂，在有机碱的作用下生 成「所述有机溶剂是N， N-二甲基甲酰胺(DMF)，或者是二氯甲烷(DCM)，或者 是N-甲基吡咯烷酮(NMP)，或者是二甲基亚砜(DMSO);所述有机碱是N,N-二 异丙基乙胺(DIPEA)，或者是三乙胺(TEA)，或者是N-甲基吗啡啉(NMM),或者是2， 4， 6-三甲基吡啶(TMP)。更为优选的方案是所述有机溶剂是N， N-二甲基甲酰胺(DMF);所述有机 碱是N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)。更为优选的方案是所述的具有保护基团的氨基酸釆用Fmoc基团保护，各 种氨基酸分别以Fmoc-Pro-OH 、 Fmoc-Arg(pbf)-OH 、 Fmoc-Leu-OH 、 Fmoc誦D-Leu-OH 、 Fmoc誦Tyr-OH 、 Fmoc-Ser(Trt)-OH 、 Fmoc-Trp(Boc)-OH 、 Fmoc-His(Trt)-OH和pGlu的形式应用。更为优选的方案是所述的Fmoc保护基通过20%六氢哌啶的DMF溶液处 理来除去。更为优选的方案是所述逐一偶联时氨基酸相对于合成规模的投料比为1-6 倍；所述逐一偶联剂体系是DCC/HOBt，或者是EDC/HOBt，或者是DIC/HOBt， 或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt，或者是PyAOP/HOAt，或者是 TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt; 偶联反应溶剂是四氢呋喃(THF)，或者是二氧六环、N， N-二甲基甲酰胺(DMF)， 或者是二氯甲烷(DCM)，或者是N-甲基吡咯烷酮(NMP)，或者是二甲基亚砜 (DMSO);偶联反应的有机碱是N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)，或者是三乙胺 (TEA)，或者是N-甲基吗啡啉(NMM)，或者是2， 4， 6-三甲基吡啶(TMP);偶联 反应时间为1-3小时。更为优选的方案是所述逐一偶联时氨基酸相对于合成规模的投料比为2 倍，偶联剂体系是DCC/HOBt，偶联反应溶剂是二氯甲垸(DCM)，偶联反应的有 机碱是N,N-二异丙基乙胺(DIPEA),偶联反应时间为2小时。更为优选的方案是所述的逐一偶联时偶联反应结束和脱去Fmoc保护后经 过Kaiser Test检测。更为优选的方案是所述的裂解体系是三氟乙酸的二氯甲烷溶液，或者是三氟乙醇的二氯甲垸溶液。更为优选的方案是所述的裂解体系是1%三氟乙酸的二氯甲烷溶液。 更为优选的方案是所述的对侧链全保护亮丙瑞林前体肽进行乙胺化反应，乙胺化试剂是乙胺/乙酸乙酯溶液，或者是乙胺/乙醇溶液，或者是乙胺/二氯甲烷溶液，或者是乙胺/四氢呋喃溶液和乙胺盐酸盐；偶联试剂或者是DCC/HOBt， 或者是DIC/HOBt，或者是DIC/HOAt，或者是PyBOP/HOBt ，或者是 PyAOP/HOAt，或者是TBTU/HOBt，或者是HBTU/HOBt，或者是EDC.HCl/HOBt， 或者是HCTU/HOCt，或者是HATU/HOAt;乙胺的用量是相对于亮丙瑞林的全 保护肽摩尔数的l-10倍；乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固相法和液相法结合制备亮丙瑞林的方法，其特征是，包括如下步骤：　１）由Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＯＨ和替代度为０．２ｍｍｏｌ／ｇ～１．２ｍｍｏｌ／ｇ的ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂为起始原料，得到Ｆｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂；　２）将Ｆ ｍｏｃ－Ｐｒｏ－ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂采用Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相法逐一偶联的方式依次连接具有保护基团的氨基酸，合成得到侧链全保护亮丙瑞林前体肽－ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂；　３）对侧链全保护亮丙瑞林前体肽－ＨＭＰＢ－ＡＭ树脂进行切割，得到侧链全保护 亮丙瑞林前体肽；　４）对侧链全保护亮丙瑞林前体肽经过乙胺化，得到侧链全保护亮丙瑞林；　５）对侧链全保护亮丙瑞林经过脱侧链保护基团的反应，获得亮丙瑞林粗肽；　６）对亮丙瑞林粗肽经过高压液相柱分离纯化、冻干机冻干得到亮丙瑞林精 肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建，李红玲，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳市翰宇药业有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]