一种固相法制备Eptifibatide的方法技术

本发明专利技术公开了一种固相法制备Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ的方法，包括步骤：１）选择Ｓｉｅｂｅｒ树脂进行去Ｆｍｏｃ反应，得到Ｈ↓［２］Ｎ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂；２）采用Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相法逐一偶联合成侧链全保护线性肽Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂；３）进行树脂固相氧化，得到侧链全保护氧化肽Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂；４）进行树脂的切割和侧链保护的脱除，得到Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ粗品；５）分离纯化、冻干机冻干得到Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ精肽。本发明专利技术的工艺操作简单、后处理容易、原料投入少、成本低、收率高等特点，具有可观的经济实用价值，同时在多肽药物设计合成领域具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术本专利技术属于制药
，尤其是涉及一种固相法合成爱啡肽 (Eptifibatide)的新方法。
技术介绍
爱啡肽，又名依非巴特、埃替非巴肽，英文名Eptifibatide,分子式 C3sH49Nn09S2， CAS登录号148031-34-9，其结构为I IMpr-Harg-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH2Eptifibatide为抗血小板聚集剂，由美国COR Therapeutics公司与美国 Schering-Plough公司共同研制开发。1998年7月由Schering-Plough公司以商品 名Intrifiban在美国首次上市，1999年以商品名Intrifiban在欧洲上市。异名 IntrifibanTM， Sch-60936， C68-22, SB-1 。埃替非巴肽为环形肽，是血小板糖蛋白GPlIb/nia受体拮抗剂，可阻断由 各种激活剂引起的血小板聚集反应，是已知最强的特异性血小板聚集抑制剂， 主要用于防止心肌供氧动脉闭塞，心脏病发作，不稳定性心绞痛、无Q波心肌 梗塞、冠脉介入治疗引起的猝死。临床研究结果显示，病人推注埃替非巴肽进 行治疗，在术后48小时，死亡或严重问题的联合终点发生率(主要终点指标包 括心脏病发作、病死率及需要再次急诊介入或溶栓治疗率)埃替非巴肽比其 他剂组减少了 37%。死亡或心肌梗死发生率，埃替非巴肽组比其他剂组低40%。Eptifibatide在急性冠脉综合征病人中呈剂量依赖性地抑制体外血小板的聚 集，在健康志愿者和做PCI术的病人中能抑制纤维原与二磷酸腺苷活化的血小 板结合。对急性冠脉综合征病人，二磷酸腺苷诱导的血小板聚集早在本品注射 后5分钟即受到抑制，其在给药期持续的4 8小时内恢复正常。本品180pg/kg 剂量静注和以每分钟2[ig/kg速率静脉输注均能达到抑制血小板聚焦80%以上。4利用枸橼酸盐抗凝剂评价，本品抑制血小板聚焦作用较其它非螯合型抗凝剂强2-4倍。本品可使急性冠脉综合征病人及进行PCI术病人的出血时间延长 2-4倍(与其基线值相比)，在停止输注本品后1小时内恢复正常。本品经大鼠、 兔和猴的安全性评价试验，未见毒性反应的迹象，给猴连续静脉输注28天，每 天剂量高达7.2mg/kg也未见毒性表现。血小板糖蛋白GPlIb/IIIa受体拮抗剂代表了目前介入性心脏病学最大进展 之一。大规模、随机、对照临床试验已无可争议地确认了其在心脏病介入治疗 中的地位，它可大约减少患者围手术期缺血并发症50% 60%，而且，当肝素 使用剂量合适时可不明显增加出血事件发生率。Eptifibatide适用于治疗急性冠脉综合征，包括不稳定型心绞痛或无Q波心 肌梗塞(既24小时内胸痛持续发作、心电图改变和/或心血管系统酶升高)；也 可用于经皮冠脉介入疗法，包括血管成形术或动脉粥样斑块切除术。 一般不用 于无急性冠脉综合征的血管成形术。在专人监管下，本品可与阿司匹林或肝素 辅用。Eptifibatide的优点①对血小板糖蛋白IIb/IIIa受体的阻滞是可逆的，一 旦出现不良反应可立即停药，不良反应轻。②选择性高，作用强。③本身几乎 无抗原性，不会引起过敏反应。Eptifibatide的制备与其它小的二硫化物连接的肽类相似，可由常规的固相 肽合成法或在溶液中进行的碎片合成法制备。现在己经有了一些研究机构和个 人发表了一些合成专利CN1500805、 EP1735345、 US482263 、 US542488、 US5968902和US20060036071等。目前已经公布的Eptifibatide制备工艺都有着 一定的缺陷，不能在操作复杂性、危险性、生产周期、产品总收率、产品成本 和污染环境等方面达到一种较好的结合；应用价值不高。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了一种高收率、低成本、反应条件温和、环境污染小、 有利于实现产业化的Eptifibatide固相法合成工艺，解决现有技术存在的缺陷。 为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案5，包括以下步骤1) 选择替代度为0.2mmol/g 1.0mmol/g的Sieber树脂进行去Fmoc反应， 得到H2N-Sieber树脂；2) 以H2N-Sieber树脂为起始原料，采用Fmoc/tBu固相法逐一偶联依次连 接具有保护基团的氨基酸，合成得到侧链全保护线性肽Eptifibatide-Sieber树脂，-3) 对侧链全保护线性肽Eptifibatide-Sieber树脂进行固相氧化，得到侧链全 保护氧化肽Eptifibatide -Sieber树脂；4) 对侧链全保护氧化肽Eptifibatide-Sieber树脂进行树脂的切割和侧链保护 的脱除，得到Eptifibatide粗品；5) Eptifibatide粗品经过高压液相柱分离纯化、冻干机冻干得到Eptifibatide 精肽。优选的方案是所述Sieber树脂替代度为0.4mmol/g 0.6mmol/g。更为优选的方案是所述具有保护基团的氨基酸氨基均采用Fmoc基团保 护，而侧链采用特定保护，各种氨基酸分别以Fmoc-Cys(Acm)-OH 、 Fmoc-Pro-OH 、 Fmoc國Trp-OH 、 Fmoc-Asp(OtBu)-OH 、 Fmoc-Gly-OH 、 Fmoc-HomoArg(pbf)-OH和Acm-Mpr-OH的形式应用。更为优选的方案是所述的逐一偶联采用的偶联剂体系DIC+A或B+A， 其中A为HOBt或者HOAt; B为HBTU或者HATU或者TBTU或者PyBOP。更为优选的方案是所述的逐一偶联采用的偶联剂体系是DIC/HOAt。更为优选的方案是所述侧链全保护线性肽Eptifibatide-Sieber树脂进行固 相氧化采用的氧化剂是碘，该氧化剂碘的用量是相对于合成规模摩尔数的5-20 倍；反应溶剂是N， N-二甲基甲酰胺(DMF)、 二氯甲烷(DCM)、 N-甲基吡咯烷酮 (NMP)和二甲基亚砜(DMSO)中的一种或者几种混合物；反应时间采用4小时； 反应温度20 30摄氏度。更为优选的方案是:所述氧化剂碘的用量是相对于合成规模摩尔数的10倍， 反应溶剂采用N， N-二甲基甲酰胺(DMF)。更为优选的方案是所述对线性肽Eptifibatide-Sieber树脂进行氧化，得到氧化肽Eptifibatide-Sieber树脂，反应结束反应物碘的清除采用N， N-二甲基甲 酰胺(DMF)和二氯甲烷(DCM)轮换清洗，然后使用六氢吡啶/ DMF溶液进行清 洗。更为优选的方案是所述侧链全保护Eptifibatide-Sieber经过脱侧链保护基 团的反应，获得Eptifibatide粗品的过程中，使用的裂解液体系是三氟乙酸:水 =95:5(v/v)，或者是三氟乙酸:水:三乙基硅垸二90:5:5(v/v),或者是三氟乙酸:苯甲 硫醚:水:苯酚:1,2-乙二硫醇=82.5:5:5:5:2.5 (v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫醚:水: 苯酚:1，2-乙二硫醇:三异丙基硅烷=82.5:5:5:5:2.5:1 (v/v)，或者是三氟乙酸:苯甲硫 醚:苯甲醚:1,2-乙二硫醇=90:5:3:2 (v/v)。更为优选的方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固相法制备Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ的方法，包括以下步骤：　１）选择替代度为０．２ｍｍｏｌ／ｇ～１．０ｍｍｏｌ／ｇ的Ｓｉｅｂｅｒ树脂进行去Ｆｍｏｃ反应，得到Ｈ↓［２］Ｎ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂；　２）以Ｈ↓［２］Ｎ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂 为起始原料，采用Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相法逐一偶联依次连接具有保护基团的氨基酸，合成得到侧链全保护线性肽Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂；　３）对侧链全保护线性肽Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂进行固相氧化，得到侧链全 保护氧化肽Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂；　４）对侧链全保护氧化肽Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ－Ｓｉｅｂｅｒ树脂进行树脂的切割和侧链保护的脱除，得到Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ粗品；　５）Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ粗品经过高压 液相柱分离纯化、冻干机冻干得到Ｅｐｔｉｆｉｂａｔｉｄｅ精肽。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：覃亮政，李红玲，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳市翰宇药业有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]