一种制备伐普肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备伐普肽的方法，包括以下步骤：１）由Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ和Ｒｉｎｋ？Ａｍｉｄｅ树脂出发，得到Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＲｉｎｋＡｍｉｄｅ树脂；２）将Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｒｉｎｋ？Ａｍｉｄｅ树脂采用固相合成法按肽序偶联得到线性伐普肽－Ｒｉｎｋ？Ａｍｉｄｅ树脂；３）采用固相氧化伐普肽－Ｒｉｎｋ？Ａｍｉｄｅ树脂；４）裂解伐普肽－Ｒｉｎｋ？Ａｍｉｄｅ树脂，纯化、冻干得到伐普肽。本发明专利技术采用了在固相中碘氧化线性伐普肽树脂，避免了传统的液相氧化带来操作上的麻烦，并提高１０％－２０％的氧化收率。本发明专利技术工艺具有反应操作简单、原料投入少、成本低、收率较高等特点，反应的总产出率可达６８％，粗肽纯度８５％。具有可观的经济实用价值。

A method for preparing vapreotide

The invention discloses a method for preparing vapreotide, which comprises the following steps: 1) by Fmoc Trp (Boc) OH and Rink? Amide resin, by FmocTrp (Boc) RinkAmide resin; 2) will FmocTrp (Boc) Rink? Amide resin by solid phase synthesis method according to the peptide sequence obtained by coupling linear vapreotide Rink? Amide resin; 3) using solid phase oxidation vapreotide Rink? Amide resin; 4) cracking vapreotide - Rink? Amide resin, purified and freeze-dried to obtain vapreotide. The invention is used in solid phase oxidation of iodine in linear vapreotide resin, avoid the traditional liquid phase oxidation bring trouble on the operation, and improve the oxidation yield of 10% - 20%. The process of the invention has the advantages of simple operation, little material input, low cost and high yield, and the total yield of reaction can reach 68%, and the purity of crude peptide is 85%. It has considerable economic and practical value.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种制备伐普肽(V即reotide)的合成工艺。
技术介绍
本品所含伐普肽，其分子结构式为D-苯丙酰-L-半胱酰-L-酪氨酰-D-色氨 酰-L-赖氨酰-L-缬氨酰-L-半胱酰-L-色氨酰胺(2-7 二硫键)，是一个高效的生长激素 释放抑制因子14肽的8肽同系物。体外实验表明，本品能明显抑制胰腺的分泌，其作用强 度比天然的生长激素释放抑制因子更强，持续时间也更长。用实验犬进行的研究表明，本品 对胰腺的作用与人工制备的生长激素释放抑制因子14肽(SS14)和阿托品相似，但抑制碳 酸氢根(HC03_)分泌的作用是SS14的2 4倍，在较低剂量下即可抑制蛋白酶的分泌，作 用持续的时间也比SS14长。伐普肽是第一种表现出治疗急性静脉曲张破裂出血作用的生 长抑素类似物，能产生特异性的器官血管收縮作用，这种作用能有效地用于急性胃肠道出 血的止血，目前还在进行包括治疗前列腺癌、肢端肥大症等疾病的三期临床实验。 目前国内还没有关于伐普肽合成工艺方法的报道；国外虽然有关于伐普肽合成工 艺的报道，也多是液相合成工艺，操作复杂，不利于工业生产、应用价值不高。
技术实现思路
本专利技术提出了一条较适当的路线，使用固相法合成线性伐普肽，且通过固相氧化 得到伐普肽，且操作方便、收率较高。 为实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案，包括以下步 骤 1)由Fmoc—Trp (Boc)—0H禾口 Rink Amide Resin出发，f寻至lj Fmoc—Trp (Boc)—Rink Amide Resin ; 2)将Fmoc-Trp (Boc) -Rink Amide Resin采用固相合成法按肽序偶联得到线性伐 普肽-Rink Amide Resin ; 3)采用固相氧化伐普肽-Rink Amide Resin ;4)裂解伐普肽-Rink Amide Resin，纯化、冻干得到伐普肽。 其中，Rink Amide Resin即为Rink Amide树脂，其替代度优选为0. 3mmo1/ g-0. 8mmol/g。所述固相合成法采用的偶联剂包括DIC/H0Bt、PyB0P/H0Bt或TBTU/H0Bt，优 选DIC/H0Bt，其中/表示和的含义。 实验发现，本专利技术的偶联剂能够明显提高反应速率，同时DIC/H0Bt偶联体系极大 的降低生产成本。 所述氧化伐普肽-Rink Amide Resin是由线性伐普肽-Rink AmideResin经过碘 固相氧化得到。碘的用量是伐普肽摩尔量的10-80倍，优选20倍。 传统的线性肽氧化采用液相氧化，本专利技术采用了碘的固相氧化。本专利技术直接简化 了生产工艺，提高了工艺的可操作性。碘的用量尤其重要，用量过少使氧化反应不能完全彻底，用量过多造成多聚物的产生，直接影响反应收率并给纯化带来困难，本专利技术碘的用量是 伐普肽摩尔量的10-80倍克服了以上困难，尤其采用20倍投料量可大幅度的提高了氧化收率。 固相氧化采用碘为氧化剂，反应溶剂为N， N- 二甲基甲酰胺或二氯甲烷，优选N， N-二甲基甲酰胺。 固相氧化采用碘为氧化剂，反应时间在8-12小时，优选10小时。 实验发现，在氧化时间小于8小时，线性肽还有大量未氧化成环肽，而氧化时间大于12小时，则发现部分线性肽之间成环，形成聚合物。本专利技术的氧化时间选择10小时，粗肽纯度大于85%。 固相氧化采用碘为氧化剂，反应温度在10°C _40°C 。优选35°C 。 实验发现反应温度低于1(TC时，氧化反应收率不及50^，而反应温度大于4(TC时，发现氨基酸极易发生消旋，产生难以分离的杂质肽。本专利技术的氧化反应温度为35t:时，在减少了氨基酸消旋的情况下，提高了氧化收率及反应速率。 裂解伐普肽-Rink Amide Resin，裂解液为TFA/H20的体积比为95/5， TFA/H20/ TIS的体积比为95/2. 5/. 25，TFA/thioanisole/anisole/EDT的体积比为90/5/3/2，或TFA/ thioanisole/H20/phenol/EDT的体积比为82. 5/5/5/5/2. 5，优选TFA/thioanisole/H20/ phenol/EDT的体积比为82. 5/5/5/5/2. 5。其中TFA为三氟乙酸，TIS为三异丙基硅烷， thioanisole为甲基苯基硫醚，anisole为苯甲醚，EDT为1，2_乙二硫醇，phenol为苯酚。 其中'7表示和的含义。 对伐普肽-Rink Amide Resin进行裂解，沉淀得到的粗肽，其沉淀液包括乙醚、环己烷、石油醚、乙醚/石油醚、乙醚/环己烷，优选乙醚/石油醚的体积比为i : 1，其中'7表示和的含义。 所述伐普肽是通过对伐普肽-Rink Amide Resin进行裂解，得到的粗肽经过高压液相纯化、冻干得到。 DICFmoc-Trp(R6)-OH+ RinkAmideResin-Fmoc-Trp(R6)-RinkAmide树脂$^1:*Fm0C，HOBt步骤2:偶联Fmoc-Cys(R5)-OH 重复步骤lH-Trp(R6)-RinkAmideResin - Fmoc-Cys(R5)-Trp(R6)-RinkAmideResin- D認OBtFmoc-D-Phe-Cys(Rl)-Tyr(R2)-D-Trp(3)-Lys(R4)-Val-Cys(R5)-Trp(R6)-RinkAmideResin-H-D-Phe-Cys(Rl)-Tyr(R2)-D-Trp(3)-Lys(R4)-Val-Cys(R5)-Trp(R6)-RinkAmideResin鹏 裂解 H-D-Phe-Cys(Rl )-Tyr(R2)-D-Trp(3)-Lys(R4)-Val-Cys(R5)-Trp(R6)-RinkAmideResin- I_I纯化H-D-Phe-Cys(Rl)-Tyr(R2)-D-Trp(3)-Lys(R4)-Val-Cys(R5)-T卬(R6)-NH2 ~:~~ Vapreotide I_ 1 其中Fmoc-Trp (R6) _0H代表与Rink Amide Resin相连的氨基酸 Fmoc-Cys (R5) _0H代表C端第二位氨基酸 DIC代表二异丙基碳二亚胺 H0Bt代表1-羟基苯并三唑 Rl为Trt R2为tBu R3为Boc R4为Boc R5为Trt R6为Boc 如反应方程式所描述的工艺将C端第一个氨基酸联上Rink AmideResin，采用低 用量的投料比逐步耦联合成线性伐普肽树脂，再将线性伐普肽树脂利用碘进行氧化得到伐 普肽环肽树脂，最后裂解得到了纯度高的粗肽，最后纯化得到伐普肽。 本专利技术采用了在固相中碘氧化线性伐普肽树脂，避免了传统的液相氧化带来操作 上的麻烦，并提高10% -20%的氧化收率。本专利技术工艺具有反应操作简单、原料投入少、成 本低、收率较高等特点，反应的总产出率可达68%，粗肽纯度85%。具有可观的经济实用价 值，同时在多肽药物设计合成领域具有广泛的应用前景。具体实施例方式实施例1 、 Fmoc-Trp (Boc) -RinkAmide树脂制备 1、将50g Rink Amide Resin (Sub = 0. 8翻l/g)于反应瓶中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备伐普肽的方法，包括以下步骤：　　１）由Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－ＯＨ和Ｒｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ树脂出发，得到Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｒｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ树脂；　　２）将Ｆｍｏｃ－Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）－Ｒｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ树脂采用固相合成法按肽序偶联得到线性伐普肽－Ｒｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ树脂；　　３）采用固相氧化伐普肽－Ｒｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ树脂；　　４）裂解伐普肽－Ｒｉｎｋ　Ａｍｉｄｅ树脂，纯化、冻干得到伐普肽。

【技术特征摘要】
一种制备伐普肽的方法，包括以下步骤1)由Fmoc-Trp(Boc)-OH和Rink Amide树脂出发，得到Fmoc-Trp(Boc)-Rink Amide树脂；2)将Fmoc-Trp(Boc)-Rink Amide树脂采用固相合成法按肽序偶联得到线性伐普肽-Rink Amide树脂；3)采用固相氧化伐普肽-Rink Amide树脂；4)裂解伐普肽-Rink Amide树脂，纯化、冻干得到伐普肽。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于Rink Amide树脂替代度为0. 3mmo1/ g_0. 8mmol/g。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述固相合成法采用的偶联剂包括DIC/ H0Bt、 PyB0P/H0Bt或TBTU/H0Bt。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述固相合成法采用的偶联剂包括DIC/ H0Bt、 PyB0P/H0Bt或TBTU/H0Bt。5. 根据权利要求1至4任意一项所述的方法，其特征在于固...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖庆，李红玲，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳市翰宇药业有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]