从龙脷叶中同时分离槲皮素-3-O-龙胆二糖苷和山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的方法技术

本发明专利技术涉及从龙脷叶中同时分离槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷和山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷的方法，属于化合物单体的分离纯化技术领域。本发明专利技术是以龙脷叶药材为原料，通过乙醇提取、浓缩、大孔树脂富集与洗脱、聚酰胺树脂富集与洗脱、高效制备液相色谱仪分离及产品回收步骤，得到槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷、山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷单体。本发明专利技术通过成熟的工艺步骤及参数条件，使产品中槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷、山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷纯度分别达到99%以上；同时，本方法操作简便、分离效率高，原料可回收，可大量、高纯度且同时分离制备槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷与山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷单体。

From the sole in the leaves of 3 O simultaneous separation of quercetin and kaempferol glycosides in Gentiana two 3 O two gentian glycoside

The invention relates to a method for the simultaneous separation of quercetin in leaves of sole 3 0 two gentian glycosides and kaempferol 3 0 two gentian glycoside, belonging to the technical field of separation and purification of compound monomer. The present invention is the sole leaf medicinal materials as raw materials, through ethanol extraction, concentration, macroporous resin and polyamide resin, elution enrichment and elution, preparative high performance liquid chromatography separation and product recovery step, obtained 3 0 quercetin and kaempferol glycosides in Gentiana two 3 0 two single gentian glycoside body. The process and parameters of mature conditions, the quercetin products in 3 0 two gentian glycoside, kaempferol 3 0 gentian two glycoside reached more than 99% purity respectively; at the same time, this method has the advantages of simple operation, high separation efficiency, raw material Recyclable, large, high purity and separation system preparation of quercetin 3 0 two gentian glycoside and kaempferol 3 0 gentian two glycoside monomer.

【技术实现步骤摘要】
从龙脷叶中同时分离槲皮素-3-O-龙胆二糖苷和山柰酚-3-O-龙胆二糖苷的方法
本专利技术涉及一种植物化合物分离提纯方法，具体涉及从龙脷叶中同时分离槲皮素-3-0-龙胆二糖苷和山柰酚-3-0-龙胆二糖苷的方法，属于中药

技术介绍
龙脷叶Sauropusrostratus系大戟科守宫木属植物，又名龙舌叶、龙味叶、龙利叶、牛耳叶，主要分布在广东、广西、福建等地，原产于越南北部，马来半岛有栽培。具有清热润肺、化痰止咳之功效，民间用于治疗肺热咳喘痰多、口干、便秘等疾病。目前对龙利叶的报道仅限于一些初步探讨，对其化学成分及其药理活性的研究较少。而龙脷叶中槲皮素-3-O-龙胆二糖苷与山柰酚-3-O-龙胆二糖苷在中药
中有至关重要作用。槲皮素-3-O-龙胆二糖苷（Quercetin3-O-gentiobioside），分子式为C27H30O17，分子量为626.52，结构式如下：山柰酚-3-O-龙胆二糖苷（Kaempferol3-O-diglucoside），分子式为C27H30O16，分子量为610.52，结构式如下：目前主要采用硅胶柱层析和结晶相结合的方法进行槲皮素-3-O-龙胆二糖苷、山柰酚-3-O-龙胆二糖苷单体的精制，生产周期长，试剂浪费严重，产品收率低。国家知识产权局于2006年10月11日公开了一种公开号为CN1844116，专利名称为“乌饭树黑色素中黄酮类单体的提取、分离、纯化及鉴定”的专利技术专利，该专利以乌饭树树叶为原料，经乙醇提取得到乌饭树树叶黑色素溶液，再经大孔吸附树脂对黑色素中的黄酮类化合物进行粗分离，再通过聚酰胺柱和HW-40柱对黄酮类化合物单体进行纯化，再用高效液相色谱-质谱、核磁共振技术对纯化组分进行结构鉴定；从中分离出7种黄酮类化合物单体，分别为A、B、C、D、E、F和G，并对B、C、D、E和F进行了精确的结构鉴定，确定分别为槲皮素、白杨黄素、芹黄素、山奈酚和木犀草素，其相对含量分别为：37.51%，2.26%，9.57%，1.72%和15.16%。该专利以乌饭树树叶为原料，经乙醇提取得到乌饭树树叶黑色素溶液，再经大孔吸附树脂对黑色素中的黄酮类化合物进行粗分离，再通过聚酰胺柱和HW-40柱对黄酮类化合物单体进行纯化。但该技术方案过程复杂，成本较高，所涉及溶剂种类过多，所提取到黄酮类化合物中槲皮素及山柰酚含量低，纯度不高；且所涉及的槲皮素、白杨黄素、芹黄素、山奈酚和木犀草素为黄酮苷元，而没有提及到黄酮苷类化合物，由于黄酮苷元与黄酮苷类化合物两者极性相差极大，故该技术方案不适用于槲皮素-3-0-龙胆二糖苷和山柰酚-3-0-龙胆二糖苷的提取分离。
技术实现思路
本专利技术旨在解决现有技术问题，而提出了从龙脷叶中同时分离槲皮素-3-0-龙胆二糖苷和山柰酚-3-0-龙胆二糖苷的方法。本专利技术通过成熟的工艺步骤及参数条件，使产品中槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷纯度分别达到99%以上；该方法能快速、高纯度、简便的分离、提纯龙脷叶中槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷。为了实现上述技术目的，提出如下技术方案：从龙脷叶中同时分离槲皮素-3-0-龙胆二糖苷和山柰酚-3-0-龙胆二糖苷的方法，包括如下步骤：（1）提取以龙脷叶药材为原料，粉碎成1～4mm的粗粉，然后按照每千克原料加入乙醇溶液6升，加入70％乙醇溶液，回流提取3-4次，每次2-3小时，提取液过滤，收集、合并，得提取液Ⅰ；（2）浓缩将步骤（1）所得的提取液Ⅰ回收乙醇后，浓缩至原提取液Ⅰ体积的15-25%，为提取液Ⅱ；（3）大孔树脂柱富集与洗脱将步骤（2）所得的提取液Ⅱ过大孔吸附树脂柱进行吸附，用纯化水清洗至无色后，再用60-70％乙醇溶液洗脱产品段，至流出液无色，收集、合并洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得提取液Ⅲ；（4）聚酰胺树脂柱富集与洗脱将步骤（3）所得的提取液Ⅲ过聚酰胺树脂柱进行吸附，先用10%乙醇溶液清洗聚酰胺树脂柱至无色后，再用90％乙醇溶液洗脱产品段，至流出液无色，收集、合并洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，回收乙醇后，得含有两种目标产物的浓缩液，为提取液Ⅳ；（5）高效制备液相色谱仪分离取步骤（4）所得的提取液Ⅳ用0.45μm有机膜过滤，收集滤液，然后滤液进样，进行槲皮素-3-0-龙胆二糖苷单体与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体的制备分离，并针对性收集槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷两种单体的制备馏分溶液；在此过程中，紫外检测器以波长350nm，进行在线检测；（6）产品回收将步骤（5）中进行高效制备液相色谱分离得到的槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷两种单体的制备馏分溶液，加热回收甲醇，槲皮素-3-0-龙胆二糖苷、山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体在水溶液中大量析出，放置室温后，用漏斗过滤析出晶体，过滤固体于65℃条件下干燥12小时，即得到槲皮素-3-0-龙胆二糖苷单体及山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体目标产物。在步骤（5）中，色谱条件为：色谱柱填料为C18填料，柱温为30℃，流速为1.0mL/min，流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液，且两者的体积比为46比54。在进行高效制备液相色谱仪分离前，可通过液-质联用或其它本
常用的方法确定高效液相色谱中槲皮素-3-0-龙胆二糖苷及山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体的峰形。以液-质联用方法为例，可与上述制备分离色谱条件相同，采用填料相同的色谱柱、组成相同的流动相、相同的检测波长等，柱温为室温。取步骤（4）所得的提取液Ⅳ过滤，然后进样，进行槲皮素-3-0-龙胆二糖苷、山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体的高效液相分离纯化，根据质谱检测结果，可确定槲皮素-3-0-龙胆二糖苷、山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体在液相色谱中所对应的峰形。所述槲皮素-3-0-龙胆二糖苷、山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体产品的纯度复检采用反相分析型液相色谱，色谱条件为：以C18为填充剂；以甲醇－0.1%磷酸水溶液为流动相，两者体积比为46比54；流速1.0mL/min；检测波长为350nm。槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷纯度分别达到99%以上。采用上述技术方案，带来的有益技术效果为：1.本专利技术通过成熟的工艺步骤及参数条件，使产品中槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷纯度分别达到99%以上；同时，本方法操作简便、分离效率高，原料可回收，可大量、高纯度且同时分离制备槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体；2.在本专利技术中，针对龙脷叶药材中存在的各种成分的理化性质，本技术方案通过步骤的适当顺序搭配，以及适当的参数组合，有效提取出了槲皮素-3-O-龙胆二糖苷及山柰酚-3-O-龙胆二糖苷成分，并除去了大量杂质，由此获得可以进入制备型高效液相色谱系统的样品溶液，不至对高效液相色谱系统造成很大的影响，尽量延长其使用周期，节约了生产成本；3.在本专利技术（1）步骤中，每千克原料加入乙醇溶液6升，在该比例下，既能有效浸泡原料，又能减少乙醇使用量，从而降低溶剂的使用成本；而采用70%乙醇回流提取，既可将槲皮素-3-0-龙胆二糖苷和山柰酚-3-0-龙胆二糖苷这两种黄酮类成分有效的提取出来，又使其他杂本文档来自技高网...

【技术保护点】
从龙脷叶中同时分离槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷和山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取以龙脷叶药材为原料，粉碎成1～4mm的粗粉，然后按照每千克原料加入乙醇溶液6升，加入70％乙醇溶液，回流提取3‑4次，每次2‑3小时，提取液过滤，收集、合并，得提取液Ⅰ；（2）浓缩将步骤（1）所得的提取液Ⅰ回收乙醇后，浓缩至原提取液Ⅰ体积的15‑25%，为提取液Ⅱ；（3）大孔树脂柱富集与洗脱将步骤（2）所得的提取液Ⅱ过大孔树脂柱进行吸附，用纯化水清洗至无色后，再用60‑70％乙醇溶液洗脱产品段，至流出液无色，收集、合并洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得提取液Ⅲ；（4）聚酰胺树脂柱富集与洗脱将步骤（3）所得的提取液Ⅲ过聚酰胺树脂柱进行吸附，先用10%乙醇溶液清洗聚酰胺树脂柱至无色后，再用90％乙醇溶液洗脱产品段，至流出液无色，收集、合并洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，回收乙醇后，得含有两种目标产物的浓缩液，为提取液Ⅳ；（5）高效制备液相色谱仪分离取步骤（4）所得的提取液Ⅳ用0.45μm有机膜过滤，收集滤液，然后滤液进样，进行槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷单体与山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷单体的制备分离，并针对性收集槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷与山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷两种单体的制备馏分溶液；在此过程中，紫外检测器以波长350nm，进行在线检测；（6）产品回收将步骤（5）中进行高效制备液相色谱分离得到的槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷与山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷两种单体的制备馏分溶液，加热回收甲醇，槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷、山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷单体在水溶液中大量析出，放置室温后，用漏斗过滤析出晶体，过滤固体于65℃条件下干燥12小时，即得到槲皮素‑3‑0‑龙胆二糖苷单体及山柰酚‑3‑0‑龙胆二糖苷单体目标产物。...

【技术特征摘要】
1.从龙脷叶中同时分离槲皮素-3-0-龙胆二糖苷和山柰酚-3-0-龙胆二糖苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）提取以龙脷叶药材为原料，粉碎成1～4mm的粗粉，然后按照每千克原料加入乙醇溶液6升，加入70％乙醇溶液，回流提取3-4次，每次2-3小时，提取液过滤，收集、合并，得提取液Ⅰ；（2）浓缩将步骤（1）所得的提取液Ⅰ回收乙醇后，浓缩至原提取液Ⅰ体积的15-25%，为提取液Ⅱ；（3）大孔树脂柱富集与洗脱将步骤（2）所得的提取液Ⅱ过大孔树脂柱进行吸附，用纯化水清洗至无色后，再用60-70％乙醇溶液洗脱产品段，至流出液无色，收集、合并洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，回收乙醇，得提取液Ⅲ；（4）聚酰胺树脂柱富集与洗脱将步骤（3）所得的提取液Ⅲ过聚酰胺树脂柱进行吸附，先用10%乙醇溶液清洗聚酰胺树脂柱至无色后，再用90％乙醇溶液洗脱产品段，至流出液无色，收集、合并洗脱液，然后将洗脱液减压浓缩，回收乙醇后，得含有两种目标产物的浓缩液，为提取液Ⅳ；（5）高效制备液相色谱仪分离取步骤（4）所得的提取液Ⅳ用0.45μm有机膜过滤，收集滤液，然后滤液进样，进行槲皮素-3-0-龙胆二糖苷单体与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷单体的制备分离，并针对性收集槲皮素-3-0-龙胆二糖苷与山柰酚-3-0-龙胆二糖苷两种单体的制备馏分溶液；在此过程中，紫外检测器以波长350nm，进行在线检测；（6...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冲，李波，徐仕银，夏柯，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51