引物臂ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针ＰＣＲ乙型肝炎病毒检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开引物臂ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针ＰＣＲ乙型肝炎病毒检测方法和试剂盒，采用在下游引物上加一臂序列，将ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针结合在这个臂序列上，结合ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针的下游引物和模板结合，在Ｔａｑ酶的作用下延伸，上游引物结合在第一次循环产物上在Ｔａｑ酶的作用下延伸，当延伸到第一次循环产物的５′端ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针杂交位置时，Ｔａｑ　ＤＮＡ聚合酶利用其５′－３′外切酶特性沿５′－３′方向切除方向上的障碍物－－ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针而进一步延长，使ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针５′端发光基团［Ｒ］游离出来，能量转移现象终止，检测［Ｒ］发出的荧光，其荧光强度与ＰＣＲ产物量成正比。本发明专利技术的引物臂ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针使两个引物之间的距离尽量缩短，提高检测的敏感性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及PCR乙型肝炎病毒定量检测方法和试剂盒，具体涉 及引物臂TaqMan-MGB探针PCR乙型肝炎病毒HBV DNA定量检测 方法和试剂盒。技术背景慢性乙型肝炎是我国第一大传染病，是中国目前主要致死病因之 一。中国约有1.2亿人携带乙型肝炎病毒(HBV)，其中慢性乙肝患 者约3000万人。核苷类似物药物是在基因层面、分子生物学水平上， 针对HBV复制进行抑制。核苷类似物药物抗病毒治疗问世是慢性乙 型肝炎治疗的突破。从1999年，核苷类似物第一个药物——拉米夫 定(贺普丁)在中国广泛应用于临床以来，乙肝病毒变异(YMDD变 异)而致耐药是临床新问题，并且YMDD变异的发生率随着治疗时间 的延长而增加。因而，乙型肝炎病毒基因组(HBV-DNA)的定量检测 以及发现基因变异是临床选择该类药物治疗及病毒变异后尽早采取 对策的关键。目前对乙型肝炎的诊断主要有酶联免疫吸附实验(ELISA)、反向间接血凝实验(RPHA)、放射免疫实验(RIA)、时间分辨荧光(TRFIA) 等方法检测血清标志物。但上述方法对低滴度DNA的标本容易漏检， 不利于乙型肝炎病毒感染的早期诊断及病毒变异等病本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物臂ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针ＰＣＲ乙型肝炎病毒检测方法，其特征在于该检测方法为：采用在下游引物上加一臂序列，将ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针结合在这个臂序列上，结合ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针的下游引物和模板结合，在Ｔａｑ酶的作用下延伸，上游引物结合在第一次循环产物上在Ｔａｑ酶的作用下延伸，当延伸到第一次循环产物的５′端ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针杂交位置时，ＴａｑＤＮＡ聚合酶利用其５’－３’外切酶特性沿５’－３’方向切除方向上的障碍物－ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针而进一步延长，使ＴａｑＭａｎ－ＭＧＢ探针５’端发光基团［Ｒ］游离出来，能量转移现象终止，检测［Ｒ］发出的荧光，其荧光强度与ＰＣＲ产物量成正比。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈勇，
申请(专利权)人：淮安市第四人民医院，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]