一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量ＰＣＲ快速诊断试剂盒及其应用方法技术

本发明专利技术所涉及的一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量ＰＣＲ快速诊断试剂盒及其应用方法，属于病毒核酸检测领域，适用于临床及科研中对ＣＳＦＶ野毒的快速定量检测，可排除ＣＳＦＶ兔化弱毒（ＨＣＬＶ）疫苗免疫带来的假阳性。本发明专利技术与现有技术相比具有以下优点：能够对猪瘟病毒野毒感染和疫苗免疫进行鉴别诊断，解决了临床样本检测中不能排除免疫疫苗带了的假阳性问题；特异性好，通过引物高特异扩增和荧光探针的高特异杂交双重控制，具有很高的准确性，假阳性低；灵敏度高；检测速度快，仅１个小时，加上核酸的提取和ｃＤＮＡ的制备，共需２－３个小时；没有后处理，不用杂交、电泳、拍照等过程，不产生污染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术所涉及的一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量PCR快速诊断试剂盒及其应 用方法，属于病毒核酸检测领域，适用于临床及科研中对CSFV野毒的快速定量检测，可排除 CSFV兔化弱毒(HCLV)疫苗免疫带来的假阳性。技术背景猪瘟(Classical Swine Fever, CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus, CSFV) 引起的猪的急性、接触性传染病，死亡率高达90%以上。猪瘟在全世界范围内发生和流行， 给养猪业造成严重的危害和巨大经济损失，被国际动物卫生组织(OIE)列为必须申报的法定 传染病之一。我国也是猪瘟的高发国之一，近年来我国猪瘟的流行特点以散发流行、慢性猪 瘟、持续感染和亚临床感染为主，使猪瘟的防治更加困难，危害日趋严重。我国政府一直都 对猪瘟的防制高度重视，并相继提出了一系列的防制措施，要求对猪进行猪瘟兔化弱毒疫苗(Hog Cholera Lapinized Virus, HCLV)免疫，但随着猪瘟HCLV疫苗的广泛使用，更增加 了猪瘟的监测难度，容易产生假阳性。现有的诊断方法如病毒分离培养(Virus Isoloa本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特异检测猪瘟病毒野毒感染的荧光定量ＰＣＲ快速诊断试剂盒，其特征在于该试剂盒包括：ａ）ＲＮＡ裂解液、ｂ）反转录反应液、ｃ）荧光定量反应液、ｄ）猪瘟病毒野毒强阳性和临界阳性质控品、ｅ）阴性质控品和ｆ）定量标准品，反转录反应液含有引物ＲＣＳＦＶ，其序列为５′－ＴＧＣＣＣＡＣＡＧＴＡＧＧＡＣＴＡＧＣＡＡＡＣ－３′２３ｎｔ；荧光定量反应液含有上游引物ＦＣＳＦＶ和下游引物ＲＣＳＦＶ以及荧光探针ＰＣＳＦＶ，上游引物ＦＣＳＦＶ序列为：５′－ＴＧＣＣＣＡＣＡＧＴＡＧＧＡＣＴＡＧＣＡＡＡＣ－３′２３ｎｔ；下游引物ＲＣＳＦＶ序列为：５′－ＣＡＧＧＡＣＴＴＡＧＡＣＣＡＣＣＣＡＧＧＧ－３′２１ｎｔ；荧光探针ＰＣＳＦ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：温国元，邵华斌，杨峻，罗青平，张蓉蓉，艾地云，王红琳，罗玲，李坤，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]