本发明专利技术公开了乙型脑炎病毒Ｅ蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位多肽，还公开了该抗原表位多肽在防治和诊断乙型脑炎病毒中的用途，属于分子免疫学领域。本发明专利技术所述的抗原表位多肽的氨基酸序列为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示。本发明专利技术ＪＥＶＥ蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位多肽作为免疫原或疫苗免疫动物机体后能够产生针对乙型脑炎病毒的中和性抗体，并能够在体内或体外中和乙型脑炎病毒，阻止病毒感染动物机体。将本发明专利技术抗原表位多肽与载体连接或自身连接或相互连接，能够免疫动物，在免疫动物后产生的抗多肽抗体或抗乙型脑炎病毒抗体能够在体内外中和乙型脑炎病毒并产生免疫保护。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗原表位多肽,尤其涉及乙型脑炎病毒JEV E蛋白中和性B细胞抗 原表位多肽，本专利技术还涉及该抗原表位多肽在防治和诊断乙型脑炎病毒中的应用， 属于分子免疫学领域。
技术介绍
流行性乙型脑炎是由.乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis virus, JEV)引起的一种 重要蚊媒性人兽共患传染病。该病毒首先于1953年在日本从患者脑组织中分离获 得，因此称日本脑炎病毒，所致疾病在日本称日本乙型脑炎。在我国最早于1940 年分离此病毒，为了与甲型脑炎相区别，定名为流行性乙型脑炎，简称乙脑。在世 界范围内每年有30，000-50,000例乙脑病例，约25%-30%死亡，50%导致永久性中枢 神经系统后遗症。我国近年每年的乙脑病例大于5000例，死亡200例以上。对于 流行性乙型脑炎病毒多种动物易感，但除人、马和猪外通常不呈现临床症状。对人 主要引起中枢神经系统的急性感染，人感染临床上以高热、意识障碍、抽搐、呼吸 衰竭及脑膜刺激征为特征。母猪感染可引起流产、产死胎或木乃伊胎，公猪感染导 致睾丸肿大影响繁殖性能为特征，少数猪只感染可能呈现发热和神经症状，而其他 猪则大多数不呈显症状。给养猪业造成巨大的经济损失。马属动物易感染，少数引 起脑炎与神经症状，马是终末宿主。蚊是JEV的主要传播媒介，猪是该病毒在自然 界中最重要的贮存与增殖宿主。乙型脑炎病毒主要在亚洲流行，而最近发现在南半 球也有报道，这说明流行性乙型脑炎可能在世界范围内威胁着人类健康。乙型脑炎病毒JEV属黄病毒科，黄病毒属，为单链正链RNA病毒。基因组约 llkb，包含一个大的开放阅读框架(ORF),两端是5，端和3，端非编码区(UTR)。 基因组5，端有帽子结构，但在3'端没有poly (A )尾。ORF编码含3 432个氨基酸 的前体蛋白，在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为IO个成熟蛋白，包含3个 结构蛋白(C， prM， E), 7个非结构蛋白(NS1, NS2A， NS2B, NS3， NS4A, NS4B， NS5)。病毒粒子呈球形，直径约30nm，有嚢膜。JEV只有一个血清型，在抗原性 上与西罗病毒、墨罗河谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒等属同一血清群，存在抗原交叉反应。病毒嚢膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鹅、鴒、雏鸡等动物红细胞。病毒对热抵抗力弱，56。C30分钟或IOO'C 2分钟即可灭活，但对低温和干燥的抵抗力很 强。乙醚、1: 1000的去氧胆酸钠以及常用消毒剂均可灭活病毒，在酸性条件下不 稳定，适宜pH8.5-9.0。采用疫苗进行预防接种是控制该病流行的有效措施。对乙型脑炎病毒抗原表 位的研究是开发有效基因工程疫苗以及研究基于抗原表位的诊断检测试剂的理论 基础。E蛋白是乙脑病毒粒子表面的一种重要的结构蛋白，是重要的免疫保护性抗 原。在保护性抗原中具有中和作用的B细胞抗原表位在刺激机体产生中和性抗体中 起重要作用。正确而详细地鉴定抗原表位对疾病的诊断、设计无毒副作用的人工疫 苗以及免疫治疗剂等有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一提供乙型脑炎病毒JEV E蛋白中和性B细胞抗原表位多肽。 本专利技术的目的之二是将所述的乙型脑炎病毒正VE蛋白中和性B细胞抗原表位多肽应用于治疗或预防乙型脑炎病毒，或者将其用于制备成i貪断或检测乙型脑炎病毒的试剂。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的一种乙型脑炎病毒JEV E蛋白中和性B细胞抗原表位多肽，其氨基酸序列为 SEQ ID NO: 1所示(77H - Thr - Gly - Glu - Ala - His - Asn - Glu - Lys - OH84 )。通过试验进一步发现，将SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列中第一位氨基酸残 基Thr替换为Met后，所得到的氨基酸序列(77H - Met - Gly - Glu - Ala - His -Asn - Glu - Lys - OH84 )与SEQ ID NO: 1具有同样的活性。其中，可以对所述的乙型脑炎病毒JEVE蛋白中和性B细胞抗原表位的N端或 C端进行化学修饰。所述的化学修饰为多肽链N端的自然氨基化或乙酰化，或C端 的自然羧基化或酰胺化。本专利技术中所述的乙型脑炎病毒JEVE蛋白中和性B细胞抗原表位多肽可以通过 固相多肽合成方法合成得到，也可以通过基因工程技术制备得到，这些都为本领域 人员所通晓。本专利技术乙型脑炎病毒JEVE蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物可用于制备 免疫原，或将其免疫动物以产生免疫保护。也可将所述的乙型脑炎病毒JEVE蛋白 中和性B细胞抗原表位或其连接物制备成检测抗乙型脑炎病毒JEV抗体或抗乙型脑炎病毒JEV多肽抗体的试剂。将本专利技术所述的表位多肽制备成免疫原或疫苗，至少包括所述的一个或全部抗原表位，这些多肽通过自身连接、相互连接或与载体连接，并辅以T细胞抗原表位， 包括Thl和/或Th2表位多肽。这些T细胞抗原表位可以来源于JEV病毒蛋白或其 它动物蛋白中具有刺激机体细胞免疫活性的多肽序列。检测乙型脑炎病毒JEV可以针对E蛋白抗原表位的单克隆抗体或针对抗原表位 多肽的多克隆抗体，检测方法可以包括间接ELISA、双抗体夹心ELISA、直接免疫 荧光技术、间接免疫荧光技术，快速检测试纸条免疫膜层析技术等。检测乙型脑炎病毒JEV抗体，包括野毒感染产生抗体，疫苗免疫产生抗体，母 源抗体，抗JEV单克隆抗体等。检测方法可以包括间接ELISA、双抗体夹心ELISA, 快速检测试纸条免疫膜层析技术等。蛋白质抗原B细胞抗原表位鉴定的方法有多种，如基因工程定点突变表达抗原 蛋白分析法、噬菌体随机肽库筛选技术、合成多肽检测技术等。本项专利技术在鉴定抗 原表位中主要采用的是基因工程技术多肽融合重叠(overlapping)表达JEV E蛋白， 体外免疫反应检测多肽融合蛋白组与JEV抗血清的结合性鉴定抗原表位序列，进一 步缩短与突变表达表位融合蛋白，鉴定抗原表位的序列结构；再应用合成多肽技术 验证表位的正确性；用表位融合蛋白抗原免疫动物制备表位特异性单因子血清，分 才斤抗原表4立功 肯t。本专利技术的有益效果如下1. 将本专利技术的乙型脑炎病毒JEV E蛋白中和性B细胞抗原表位多肽作为免疫 原或疫苗免疫动物才几体后能够产生针对JEV的中和抗体，并能够在体内或体外中和 JEV,阻止病毒感染动物机体。2. 本专利技术的乙型脑炎病毒E蛋白中和性B细胞抗原表位多肽与载体连接或自 身连接或相互连接，能够免疫动物，在免疫动物后产生的抗多肽抗体或抗乙型脑炎 病毒抗体能够在体内外中和乙型脑炎病毒正v并产生免疫保护。3. 本专利技术的乙型脑炎病毒E蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物在免疫动物 是产生抗多肽或抗正V抗体能够检测JEV病毒或其多肽。4. 本专利技术的乙型脑炎病毒E蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物能够检测乙 型脑炎病毒JEV抗体或抗乙型脑炎病毒JEV多肽抗体。附图说明图1为乙型脑炎表位多肽序列与同一血清群其它黄病毒氨基酸序列的同源性 比较。图2为表位多肽SEQ NO:l和SEQ NO: 2以及其它突变多肽与GST融合表达 物与JEVE蛋白单克隆抗体4企测结果。图中从左至右依次为M，蛋白质分子量标 准；1， GST; 2, GST - 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乙型脑炎病毒Ｅ蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位多肽，其特征在于，其氨基酸序列为ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：华荣虹，步志高，童光志，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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