本发明专利技术属于分子免疫学领域，主要涉及鸡传染性法氏囊病病毒ＩＢＤＶ ＶＰ２蛋白的多肽片断，特别是涉及ＶＰ２蛋白中组成Ｂ细胞抗原表位的多肽片断，本发明专利技术同时涉及ＩＢＤＶ ＶＰ２蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位在制备免疫原、免疫动物、产生免疫保护上的应用以及在检测抗鸡传染性法氏囊病病毒ＩＢＤＶ抗体或抗鸡传染性法氏囊病病毒ＩＢＤＶ多肽抗体上的应用。由鸡ＩＢＤＶ ＶＰ２蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位设计的免疫原或疫苗免疫动物机体后能够产生针对ＩＢＤＶ的中和性抗体，并能够在体内或体外中和ＩＢＤＶ，阻止病毒感染动物机体，鸡ＩＢＤＶ ＶＰ２蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位表位疫苗能够预防鸡ＩＢＤ经典毒株、超强毒株或／和变异毒株的感染。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子的免疫学领域，特别是涉及一系列鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位及其应用。二.
技术介绍
鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的急性、高度接触性、杀淋巴细胞性的传染病。1957年在美国的Delaware州的Gumboro镇的肉鸡群中首次发生，又称甘布罗病。1962年Winterfield分离鉴定出IBDV。该病在美国及世界各国均有发生和流行。1988~1992年在我国大面积暴发流行，造成巨大的经济损失。研究发现，IBD是一种以体液免疫反应为主的免疫损伤性疾病。IBDV属于双RNA病毒科(Birnaviridae)，禽双RNA病毒属(avianbirnavirus)，该病毒有两个血清型，血清I型对鸡致病，II型仅感染火鸡但不致病。IBDV病毒粒子为单层衣壳，无囊膜，呈二十面体对称，直径为60-70nm，氯化铯中浮密度为1.31-1.34，对乙醚和氯仿不敏感，高度抗酸。鸡传染性法氏囊病病毒IBDV为双链RNA病毒，其基因组由A，B两个片段组成。A片段由3200-3300bp核苷酸组成，B片段由2800-2900核苷酸组成。A片段含有一个大的开放阅读框架(ORF)和一个小ORF。大ORF编码有1012个氨基酸组成的病毒前体多聚蛋白(polyprotein)，分子量约为110kD。该前体蛋白由VP2，VP4和VP3组成。小ORF编码分子量约17kD的VP5蛋白。B片断编码病毒蛋白VP1，该蛋白为RNA依赖性的RNA聚合酶，与病毒的复制和组装有关。VP2蛋白为IBDV的主要保护性抗原，含有中和性B细胞抗原表位。保护性抗原是作为疫苗使用的推荐抗原。在保护性抗原中具有中和作用的B细胞抗原表位在刺激中和性抗体产生中起重要作用。抗原表位又称抗原决定簇，是指能够被抗体、TCR/MHC复合物结合并识别的抗原片断。其中，能够被抗体结合并识别的抗原表位称为B细胞抗原表位；能够被TCR/MHC复合物结合并识别的抗原表位称为T细胞抗原表位。当病毒抗原进入机体后，保护性抗原与B淋巴细胞表面的抗原受体分子sIgM和IgD结合而导致B淋巴细胞活化和克隆化增值，并产生针对特异性B细胞抗原表位的抗体，发挥免疫保护作用。因此，B细胞抗原表位决定着机体产生抗体的特异性，是诱导体液免疫的基本单位。对特定病毒的蛋白质抗原来说，鉴定其B细胞抗原表位便是揭示病毒体液免疫的本质。蛋白质抗原B细胞抗原表位鉴定中常用的方法有基因工程定点突变表达抗原蛋白分析法、随机噬菌体肽库技术和合成多肽检测技术等。定点突变表达抗原蛋白方法是最常用的技术之一，该方法方便、简单、成本低，但是，该方法只能粗略地鉴定出蛋白质抗原中发挥抗原性的关键氨基酸位点，不能最终确定该抗原表位的最短氨基酸序列，也不能区分出该抗原表位是属于线性表位还是构像性表位。噬菌体肽库技术能够模拟表达与特异性配体结合的多肽序列，经过多轮筛选后可以测序分析出与某一抗原特定抗体结合的抗原表位，不仅可以测定线性抗原表位，而且还能模拟构像性抗原表位。合成多肽技术可以最明确地鉴定出某一蛋白抗原中特定的线性B细胞表位。本项专利技术应用基因工程技术重叠(overlapping)表达IBDV的VP2结构蛋白，用体外免疫反应初步确定VP2中与特异性中和性单抗结合的区域；然后，应用肽库技术和overlapping合成多肽技术确定该结构蛋白上的线性最短氨基酸序列及模拟构像表位；最后，再应用合成多肽技术验证表位的正确性。三.
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一系列鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位以及它们的应用。本专利技术的技术方案是一种鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位，其氨基酸序列为Seq No 1327H-Trp-Ser-Ala-Arg-Gly-Ser-Leu-Ala-Val-Thr-Ile-His-Gly-OH339。所述的鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位，其氨基酸序列向C端依照鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白氨基酸序列扩展，扩展后的氨基酸序列为Seq No 2327H-Trp-Ser-Ala-Arg-Gly-Ser-Leu-Ala-Val-Thr-Ile-His-Gly-Gly-Asn-Tyr-Pro-Gly-Ala-Leu-Arg-Pro-Val-Thr-Leu-Val-OH352。所述的鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位为合成多肽。所述的鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位在N端或C端进行化学修饰。所述的化学修饰为多肽链N端的自然氨基化或乙酰化，或C端的自然羧基化或酰胺化。所述的鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物在制备免疫原，或免疫动物，或产生免疫保护上的应用。所述的鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物在检测抗鸡传染性法氏囊病病毒IBDV抗体或抗鸡传染性法氏囊病病毒IBDV多肽抗体上的应用。本专利技术涉及的由表位多肽组成的免疫原或疫苗，至少包括权利要求中提及的一个抗原表位至全部抗原表位，这些多肽通过自身连接、相互连接或与载体连接，并辅以T细胞抗原表位，包括Th1和/或Th2表位多肽。这些T细胞抗原表位可以来源于IBDV病毒蛋白或其它动物蛋白中具有刺激机体细胞免疫活性的多肽序列。检测鸡IBDV病毒可以应用针对VP2的单克隆抗体或者应用针对VP2多肽抗体，检测方法可以包括琼脂扩散试验、间接ELISA、双抗体夹心ELISA、快速检测试纸条免疫膜层析技术等。检测鸡IBDV抗体，包括母源抗体、疫苗免疫抗体、野毒感染产生抗体、抗鸡IBDV单克隆抗体等。检测方法可以包括琼脂扩散试验、间接ELISA、双抗体夹心ELISA、快速检测试纸条免疫膜层析技术等。本专利技术的积极有益效果是 1.由鸡传染性法氏囊病病毒IBDV VP2蛋白中和性B细胞抗原表位设计的免疫原或疫苗免疫动物机体后能够产生针对IBDV的中和性抗体，并能够在体内或体外中和IBDV，阻止病毒感染动物机体。2.由本专利技术的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位设计的免疫原或疫苗能够预防鸡IBD经典毒株、超强毒株或/和变异毒株的感染。3.本专利技术的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位与载体连接或自身连接或相互连接，能够免疫动物，在免疫动物时产生的抗多肽抗体或抗鸡传染性法氏囊病病毒抗体能够在体内外中和鸡传染性法氏囊病病毒IBDV病毒并产生免疫保护。4.本专利技术的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物在免疫动物时产生的抗多肽抗体或抗IBDV抗体能够检测IBDV病毒或其多肽。5.本专利技术的鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位或其连接物能够检测抗鸡传染性法氏囊病病毒IBDV抗体或抗鸡传染性法氏囊病病毒IBDV多肽抗体。四.附图说明图1为表位多肽Seq No 1和Seq No 3检测鸡IBDV血清抗体和单克隆抗体结果图中从左至右依次为IBDV阳性血清1、阳性血清2、IBDV单抗、BSA对照、阴性血清对照。五.具本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鸡传染性法氏囊病病毒ＩＢＤＶＶＰ２蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位，其氨基酸序列为ＳｅｑＮｏ１：３２７Ｈ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ａｌａ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ－Ｇｌｙ－ＯＨ３３９。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王选年，张改平，李培庆，王三虎，王自良，保银梅，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]
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