微生物高效中和抗原的筛选和鉴定方法技术

微生物高效中和抗原的筛选和鉴定方法，其特征在于所说的微生物高效中和抗原的筛选和鉴定方法的具体步骤如下：　　　　１）２－Ｄ电泳分离微生物蛋白质：将微生物收集后，超声波破碎，加入裂解液，离心处理２次，然后进行双向电泳（２－Ｄ）；　　　　２）Ｗｅｓｔｅｒｎ　　ｂｌｏｔｔｉｎｇ：２－Ｄ电泳后，进行免疫转印，分别采用抗目的微生物的特异性抗体和酶标抗体为第一和第二抗体，用ＤＡＢ或ＥＣＬ显色，阳性点即为具有免疫原性的蛋白质；　　　　３）中和抗原及其中和能力的确定：根据Ｗｅｓｔｅｒｎ　　ｂｌｏｔｔｉｎｇ的结果，取出具有免疫原性的全部蛋白质，累积收集，每种蛋白点免疫一组易感试验动物，７－１０天后，加强免疫１－２次，每次间隔７－１０天，然后取５０倍半数致死量的微生物进行免疫保护性攻毒试验，根据保护率确定具有中和抗原的蛋白点及其保护效果；　　　　４）中和抗原的定性：取出具有中和原性的全部蛋白质，按质谱样品处理方法进行分析样品制备，然后进行质谱和生物信息分析，以确定抗原的蛋白质种类。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种筛选和鉴定微生物高效中和抗原蛋白的方法。(2)
技术介绍
人类和动物的传染病是由微生物所引起，可以通过免疫接种来预防。目前，预防用疫苗的发展趋势是增强免疫效果、简化接种程序、提高预防接种效益。研制疫苗必须获得具有免疫保护作用的高效中和蛋白。但采用常规方法从全部微生物蛋白质中鉴定全部具有免疫中和功能的蛋白质，并比较其免疫保护效率十分困难。目前主要采用的方法包括热灭活法、福尔马林灭活法、减毒活疫苗法、用细菌生物膜制备法等，热灭活或福尔马林灭活后对有效成分进行提取、超声波制备分离有效成分，上述方法并非在对所有保护性抗原进行比较的基础上，优选出最佳中和抗原进行制备。另外，为了尽可能减少接种后的副作用，往往利用DNA重组技术制备仅含中和原性的纯化疫苗，这就需要先选定病原体编码的具有高效中和原性的基因片段。但采用常规方法从全部微生物蛋白质中鉴定免疫原性蛋白十分困难，且并非所有免疫原性蛋白均具有中和原性。蛋白质组学(proteomics)具有高通量筛选的特征，是功能基因组研究的重要平台，通过由蛋白质组学与Western blotting技术相结合而发展起来的免疫蛋白质组学(im本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭宣宪，陈子珺，王三英，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：