本发明专利技术公开了乙型脑炎病毒Ｅ蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位多肽，还公开了该抗原表位多肽在防治和诊断乙型脑炎病毒中的应用，属于分子免疫学领域。本发明专利技术所述的抗原表位多肽的氨基酸序列选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４所示的其中任意一种氨基酸序列。将本发明专利技术ＪＥＶ Ｅ蛋白中和性Ｂ细胞抗原表位多肽作为免疫原或疫苗免疫动物机体后能够产生针对ＪＥＶ的中和性抗体，并能够在体内或体外中和ＪＥＶ，阻止病毒感染动物机体。本发明专利技术抗原表位多肽或其连接物能够作为检测乙型脑炎病毒抗体或抗乙型脑炎病毒多肽抗体的试剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗原表位多肽，尤其涉及乙型脑炎病毒E蛋白中和性B细胞抗原表 位多肽，本专利技术还涉及该抗原表位多肽在防治和诊断乙型脑炎病毒中的应用，属于 分子免疫学领域。
技术介绍
流行性乙型脑炎乙型脑炎是由乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis virus，正V)引 起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病。该病毒首先于1953年在日本从患者脑组织 中分离获得，因此称日本脑炎病毒，所致疾病在日本称日本乙型脑炎。在我国最早 于1940年分离此病毒，为了与甲型脑炎相区别，定名为流行性乙型脑炎，简称乙 脑。在世界范围内每年有30,000-50，000例乙脑病例，约25%-30%死亡，50%导致永 久性中枢神经系统后遗症。我国近年每年的乙脑病例大于5000例，死亡200例以 上。对于流行性乙型脑炎病毒多种动物易感，但除人、马和猪外通常不呈现临床症 状。对人主要引起中枢神经系统的急性感染，人感染临床上以高热、意识障碍、抽 搐、呼吸衰竭及脑膜刺激征为特征。母猪感染可引起流产、产死胎或木乃伊胎，公 猪感染导致睾丸肿大影响繁殖性能为特征，少数猪只感染可能呈现发热和神经症状: 而其他猪则大多数不呈显症状。给养猪业造成巨大的经济损失。马属动物易感染， 少数引起脑炎与神经症状，马是终末宿主。蚊是JEV的主要传播媒介，猪是该病毒 在自然界中最重要的贮存与增殖宿主。乙型脑炎病毒主要在亚洲流行，而最近发现 在南半球也有报道，这说明流行性乙型脑炎可能在世界范围内威胁着人类健康。乙型脑炎病毒属黄病毒科，黄病毒属，为单链正链RNA病毒。基因组约llkb, 包含一个大的开放阅读框架(ORF),两端是5，端和3，端非编码区(UTR)。基因组 5，端有帽子结构，但在3，端没有poly (A)尾。ORF编码含3 432个氨基酸的前体 蛋白，在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工为IO个成熟蛋白，包含3个结构蛋 白(C, prM， E)， 7个非结构蛋白(NS1, NS2A, NS2B, NS3， NS4A， NS4B, NS5)。病毒粒子呈球形，直径约30nm，有嚢膜。JEV只有一个血清型，在抗原性 上与西罗病毒、墨罗河谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒等属同一血清群，存在抗原交叉反应。病毒囊膜糖蛋白具有血凝特性，能凝集鹅、鴒、雏鸡等动物红细胞。病毒对热抵抗力弱，56°C 30分钟或IOO'C 2分钟即可灭活，但对低温和干燥的抵抗力很 强。乙醚、1: 1000去氧胆酸钠以及常用消毒剂均可灭活病毒。在酸性条件下不稳 定，适宜pH8.5 9.0。采用疫苗进行预防接种是控制该病流行的有效措施。对乙型脑炎病毒抗原表位 的研究是开发有效基因工程疫苗以及研究基于抗原表位的诊断检测试剂的理论基 础。E蛋白是乙脑病毒粒子表面的一种重要的结构蛋白，是重要的免疫保护性抗原。要作用。正确而详细地鉴定抗原表位对疾病的诊断、设计无毒副作用的人工疫苗以 及免疫治疗剂等有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一提供乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位多肽。 本专利技术的目的之二是将所述的乙型脑炎病毒正V E蛋白B细胞抗原表位多肽应用于治疗或预防乙型脑炎病毒，或者将其用于制备成诊断或检测乙型脑炎病毒的试剂。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的一种乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位多肽，其氨基酸序列选自SEQ ID NO: 1 、 SEQ ID NO: 2、 SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 4所示的任意一种氨基断列。其中，可以对所述的乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位的N端或C端 进行化学修饰。所述的化学修饰为多肽链N端的自然氨基化或乙酰化，或C端的自 然g化或酰胺化。本专利技术中所述的乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位可以通过固相多肽 合成方法合成得到，也可以通过基因工程技术制备得到，这些都为本领域人员所通 晓。本专利技术乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位或其连接物可用于制备免疫 原，或将其免疫动物以产生免疫保护。也可将所述的乙型脑炎病毒JEVE蛋白B细 胞抗原表位或其连接物制备成检测抗乙型脑炎病毒正V抗体或抗乙型脑炎病毒JEV 多肽抗体的试剂。将本专利技术所述的表位多肽制备成免疫原或疫苗，至少包括所述的一个或全部抗 原表位，这些多肽通过自身连接、相互连接或与载体连接，并辅以T细胞抗原表位，包括Thl和/或Th2表位多肽。这些T细胞抗原表位可以来源于JEV病毒蛋白或其 它动物蛋白中具有刺激机体细胞免疫活性的多肽序列。检测乙型脑炎病毒JEV可以针对E蛋白抗原表位的单克隆抗体或针对抗原表位 多肽的多克隆抗体，检测方法可以包括间接ELISA、双抗体夹心ELISA、直接免疫 荧光技术、间接免疫荧光技术，快速检测试纸条免疫膜层析技术等。检测乙型脑炎病毒正V抗体，包括野毒感染产生抗体，疫苗免疫产生抗体，母 源抗体，抗JEV单克隆抗体等。检测方法可以包括间接ELISA、双抗体夹心ELISA， 快速检测试纸条免疫膜层析技术等。蛋白质抗原B细胞抗原表位鉴定的方法有多种，如基因工程定点突变表达抗原 蛋白分析法、噬菌体随机肽库筛选技术、合成多肽检测技术等。本项专利技术在鉴定抗 原表位中主要釆用的是基因X程技术多肽融合重叠(overlapping)表达正VE蛋白， 体外免疫反应检测多肽融合蛋白组与JEV抗血清的结合性鉴定抗原表位序列，进一 步缩短与突变表达表位融合蛋白，鉴定抗原表位的序列结构；再应用合成多肽技术 验证表位的正确性；用表位融合蛋白抗原免疫动物制备表位特异性单因子血清，分 才斤抗原表4立功本专利技术的有益效果如下1. 由乙型脑炎病毒JEV E蛋白B细胞抗原表位设计的免疫原或疫苗免疫动物 机体后能够产生针对正V的抗体，利用针对E蛋白抗原表位的单克隆抗体或多克隆 抗体可以才企测乙型脑炎病毒JEV或乙型脑炎病毒E蛋白。2. 本专利技术的乙型脑炎病毒E蛋白B细胞抗原表位与载体连接或自身连接或相 互连接，能够免疫动物，在免疫动物后产生的抗多肽抗体或抗乙型脑炎病毒抗体能 够在体内外中和乙型脑炎病毒JEV并产生免疫保护。3. 本专利技术的乙型脑炎病毒E蛋白B细胞抗原表位或其连接物能够检测乙型脑 炎病毒JEV抗体或抗乙型脑炎病毒JEV多肽抗体。附图说明图1为表位多肽SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 4与GST融合表达蛋白与抗JEV 血清Western blot检测结果。图中从左至右依次为M,蛋白质分子量标准；1, GST -SEQ ID NO: 1; 2， GST - SEQ ID NO: 2; 3, GST - SEQ ID NO: 3; 4， GST-SEQ ID NO: 4; 5, GST对照。图2为表位多肽抗体体外中和乙型脑炎病毒实验结果。1,阴性血清对照；2,抗表位多肽Seq No 3血清。具体实施方式实施例1 重叠( over lapping)多肽融合表达系歹U JEV E蛋白抗原多肽片段并 进行间接ELISA筛选JEV E蛋白B细胞抗原表位根据JEV E蛋白氨基酸序列，设计一总数为36个的系列多肽，这些多肽相互 重叠，且覆盖正V E蛋白1-296氨基酸残基区域，该区域包含E蛋白结构域I (Domain I )和结构域II (Domain II )。根本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种乙型脑炎病毒ＪＥＶ Ｅ蛋白Ｂ细胞抗原表位多肽，其特征在于：其氨基酸序列选自ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４所示的其中任意一种氨基酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：华荣虹，童光志，步志高，
申请(专利权)人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，
类型：发明
国别省市：93[中国|哈尔滨]
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