免疫原性组合产品制造技术

本公开提供了免疫原性组合产品，其包含a)免疫原性组分，其含有呼吸道病原体的肽或多肽抗原；和b)免疫原性组分，其含有编码该相同呼吸道病原体的抗原的核酸，其中所述这些免疫原性组分被配制成用于同时（例如，共定位的）施用。更具体地讲，所述呼吸道病原体是呼吸道合胞病毒（RSV）。本公开还提供了此类免疫原性组合产品的用途，以及施用此类免疫原性组合产品以诱发特异于所述呼吸道病原体的免疫应答的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫原性组合产品本专利文件公开内容的一部分包含受版权保护的材料。该版权所有人不反对任何人以其在专利和商标局的专利文件或记录中的形式复制本专利文件或本专利公开，但保留所有版权权利。
技术介绍
本公开涉及免疫学领域。更具体地讲，本公开涉及用于诱发免疫应答以对抗呼吸道病原体的方法。由于呼吸道直接接触环境并且暴露于大量空气中的生物体，所以呼吸道是最频发病原生物体感染的部位。此类感染可以导致症状和从普通感冒到支气管炎、毛细支气管炎和肺炎的疾病以及严重和慢性状况。常见的呼吸道感染致病原既包括病毒（如鼻病毒、冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒及其它副粘病毒、腺病毒）也包括细菌（如链球菌、白喉棒杆菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌和结核分枝杆菌）。已经生产了有效疫苗以保护儿童和成人免受许多这些呼吸道病原体侵害。然而，已经证明，开发能有效对抗其它呼吸道病原体的疫苗具有挑战性。因此，能有效对抗呼吸道病原体的安全有效的疫苗的新策略对于尤其是保护幼儿、老人及其它脆弱个体而言是必要的。专利技术简述本公开涉及免疫原性组合产品，其包含a)免疫原性组分，其含有呼吸道病原体的肽或多肽抗原；和b)免疫原性组分，其含有编码该相同呼吸道病原体的抗原的核酸，其中所述这些免疫原性组分被配制成用于同时（例如，共定位的）施用。更具体地讲，所述呼吸道病原体是呼吸道合胞病毒（RSV）。本公开还涉及此类免疫原性组合产品的用途，以及施用此类免疫原性组合产品以诱发特异于所述呼吸道病原体的免疫应答的方法。附图简述图1是根据各种方案免疫后RSVA中和滴度的图示。图2是根据各种方案免疫后干扰素-γ(IFNγ)产量的图示。图3是根据各种方案免疫后RSVA中和滴度的图示。图4是根据各种方案免疫后RSVM2-1-特异性CD8+T细胞的图示。图5是根据各种方案免疫后中和滴度的图示。图6是根据各种方案免疫后肺部RSV滴度的图示。图7是根据各种方案免疫后Th1与Th2T细胞的比率的图示。图8是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后肺部粘液分泌细胞的数量的图示。图9是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后支气管肺泡灌洗(BAL)液中嗜酸性粒细胞的数量的图示。图10是根据各种方案免疫后RSVA中和滴度的图示。图11是根据各种方案免疫后RSVM2-1-特异性CD8+T细胞的图示。图12是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后肺部病毒滴度的图示。图13是根据各种方案免疫后Th1与Th2T细胞的比率的图示。图14是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后RSVM2-1-特异性CD8+T细胞的图示。图15是在对根据各种方案免疫的个体进行攻毒后肺部粘液分泌细胞的数量的图示。专利技术详述引言开发针对某些呼吸道病原体的安全有效的疫苗已经被证明颇具挑战性。本公开涉及具有提高的免疫原性功效的改善的组合物及方法。更具体地讲，本公开提供了用于同时并且优选地共定位施用的免疫原性组合产品，其诱发强力的B和T细胞应答，从而提高针对呼吸道病原体的免疫原性、安全性，并最终提高保护。本公开的一个方面涉及免疫原性组合产品，其包含：a)至少第一免疫原性组分，其包含呼吸道病原体的肽或多肽抗原；和b)至少第二免疫原性组分，其包含编码该相同呼吸道病原体的抗原的核酸；其中所述第一免疫原性组分和所述第二免疫原性组分被配制用于同时施用。在某些实施方案中，所述呼吸道病原体是病毒，如副粘病毒。在一个特定的实施方案中，所述呼吸道病原体是呼吸道合胞病毒（RSV）。在此类实施方案中，所述抗原可以选自RSV抗原，包括：融合蛋白（F）、附着蛋白（G）、基质蛋白（M2–其可包括M2-1（在本文中可写作M2.1）和M2-2基因产物之一或两者）和核蛋白（N）。在特定的实施方案中，所述多肽抗原组分含有F蛋白抗原，该F蛋白抗原在构象上被限制为融合前或融合后的构象。在所述免疫原性组合产品的某些实施方案中，所述第一组分的抗原和由所述第二组分的核酸编码的抗原共享充分的序列同一性，如约70%的序列。在示例性实施方案中，所述免疫组合包含：第一组分，其包含具有下列氨基酸序列的多肽；和/或第二组分，其包含编码具有下列氨基酸序列的多肽的核酸：a)包含SEQIDNO:2的多肽；b)与SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含对应于天然存在的RSV毒株的RSVF蛋白多肽的氨基酸序列；或c)与SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含不对应于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述第一免疫原性组分含有而第二免疫原性组分编码同源抗原。此类同源抗原可能在序列上相同或不相同。例如，所述抗原可以具有部分相同的氨基酸序列。优选地，此类抗原包含一个或多个相同或重叠的免疫原性表位。例如，用于诱发特异于RSV的免疫应答的一个示例性免疫原性组合产品包含：第一免疫原性组分，其含有具有RSVF蛋白的至少约500个氨基酸的多肽；第二免疫原性组分，其含有编码相同或不相同多肽（例如，具有RSVF蛋白的至少约500个氨基酸）的核酸。当不相同时，RSVF蛋白多肽在F1和F2结构域内具有至少80%的序列同一性。优选地，所述第一免疫原性组分的多肽和/或由所述第二免疫原性组分编码的多肽包含或是RSVF蛋白的胞外结构域(FTM-)。在某些实施方案中，所述第一免疫原性组分和/或所述第二免疫原性组分含有（例如，呼吸道病原体的，特别是RSV的）多种抗原。如上所述，所述第一免疫原性组分含有呼吸道病原体的肽或多肽（或其片段）抗原。此类肽或多肽可以任选地为颗粒形式，如VLP或病毒颗粒，或纳米级生物颗粒。同样，如上所述，所述第二免疫原性组分含有编码呼吸道病原体的抗原的核酸。脱氧核糖核酸和核糖核酸都是合适的。优选地，所述核酸是除质粒DNA之外的核酸。所述核酸可以被包含在DNA或RNA载体，如可复制载体（例如，病毒复制子、自扩增核酸）中，或在病毒（例如，活的减毒病毒）或病毒载体（例如，复制型或复制缺陷型病毒载体）中。合适的病毒载体包括但不限于：腺病毒、改良安卡拉痘苗病毒（MVA）、副粘病毒、新城疫病毒、甲病毒、逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒（AAV）、水疱性口炎病毒和黄病毒。任选地，所述病毒载体为复制缺陷型。在一个实施方案中，所述第一组分含有RSVF蛋白抗原，而所述第二组分含有编码RSVF抗原和RSVM及N抗原的核酸。更具体地讲，所述第一组分含有在构象上被限制为融合前构象的RSVF蛋白抗原，而所述第二组分含有编码RSVFΔTM抗原和RSVM2-1及N抗原的核酸，其中在所述RSVFΔTM抗原与所述RSVM2-1之间包含了自切割位点，而在所述RSVM2-1与N抗原之间包含了柔性接头。所述免疫原性组合产品的第一和第二免疫原性组分可以被配制（例如，连同药学上可接受的缓冲剂、载体、赋形剂和/或佐剂）在不同的组合物中。作为另外一种选择，所述第一和第二免疫原性组分可以被共配制在单一组合物中用于施用（在制造时，例如，在适于保存、分配和施用的稳定共制剂中，或在施用前递送时）。当所述第一和第二免疫原性组分被配制在不同组合物中时，优选地将它们共定位施用于相同部位或其附近。例如，所述第一和第二免疫原性组分可以通过注射而被胃肠外施用（例如，经由选自肌内、透皮、皮内、皮下的施用途径）于相同侧面或肢体（同侧施用）。作本文档来自技高网...

【技术保护点】
免疫原性组合产品，包含：a) 至少第一免疫原性组分，其包含呼吸道合胞病毒(RSV)的肽或多肽抗原；和b) 至少第二免疫原性组分，其包含编码呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原的核酸；其中所述第一免疫原性组分和所述第二免疫原性组分被配制成用于同时施用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.免疫原性组合产品，包含：a)至少第一免疫原性组分，其包含呼吸道合胞病毒(RSV)的肽或多肽抗原；和b)至少第二免疫原性组分，其包含编码呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原的核酸；其中所述第一免疫原性组分和所述第二免疫原性组分被配制成用于同时施用。2.权利要求1的免疫原性组合产品，其中所述第一免疫原性组分包含选自以下的肽或多肽抗原：融合蛋白(F)、附着蛋白(G)、基质蛋白(M2)和核蛋白(N)。3.权利要求1或权利要求2的免疫原性组合产品，其中所述第一免疫原性组分包含F蛋白抗原。4.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第一免疫原性组分包含构象上受限的F蛋白抗原，所述F蛋白抗原被限制为融合前或融合后构象。5.权利要求1-3中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第一抗原组分包含具有如下所示氨基酸序列的多肽：a)包含SEQIDNO:2的多肽；bv与SEQIDNO:2具有至少80%序列同一性的多肽，所述多肽包含对应于天然存在的RSV毒株的RSVF蛋白多肽的氨基酸序列；和c)与SEQIDNO:2具有至少95%序列同一性的多肽，所述多肽包含不对应于天然存在的RSV毒株的氨基酸序列。6.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第一和第二免疫原性组分的抗原是同源的。7.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第一和第二免疫原性组分的抗原包含一个或多个相同的免疫原性表位。8.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第一和第二免疫原性组分的抗原是相同的。9.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述至少第一和/或至少第二免疫原性组分包含多种抗原。10.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第二免疫原性组分包含编码RSVF蛋白(F∆TM)的胞外结构域的核酸。11.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第二免疫原性组分包含编码RSVF∆TM抗原和RSVM2-1及N抗原的核酸。12.权利要求11的免疫原性组合产品，其中在所述RSVF∆TM抗原与所述RSVM2-1之间包含自切割位点，而在所述RSVM2-1与N抗原之间包含柔性接头。13.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第二免疫原性组分包含SEQIDNO:3所示的核酸。14.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述第二免疫原性组分包含编码SEQIDNO:4所示氨基酸的核酸。15.前述权利要求中任一项的免疫原性组合产品，其中所述至少第二免疫原性组分包含载体，所述载体包含所述核酸。16.权利要求15的免疫原性组合产品，其中所述载体是病毒载体。17.权利要求16的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：AM斯特夫，JF图赛因特，A维特利，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE