OC22多肽的完全抗原及其制备方法和抗体技术

本发明专利技术涉及一种OC22多肽的完全抗原，所述OC22多肽的完全抗原由OC22多肽和交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成；其中，所述OC22多肽的序列为SEQ?ID?No.1所示的序列。这种OC22多肽的完全抗原具有较强的免疫原性，可以作为完全抗原投入使用。本发明专利技术还公开了一种上述OC22多肽的完全抗原的制备方法，以及与该OC22多肽的完全抗原特异性结合的OC22多肽的完全抗原的抗体。这种OC22多肽的完全抗原的抗体可以用于血清或组织中小鼠骨钙素蛋白质的检测。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种OC22多肽的完全抗原，所述OC22多肽的完全抗原由OC22多肽和交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成；其中，所述OC22多肽的序列为SEQ?ID?No.1所示的序列。这种OC22多肽的完全抗原具有较强的免疫原性，可以作为完全抗原投入使用。本专利技术还公开了一种上述OC22多肽的完全抗原的制备方法，以及与该OC22多肽的完全抗原特异性结合的OC22多肽的完全抗原的抗体。这种OC22多肽的完全抗原的抗体可以用于血清或组织中小鼠骨钙素蛋白质的检测。【专利说明】0C22多肽的完全抗原及其制备方法和抗体
本专利技术涉及免疫学领域，特别是涉及一种0C22多肽的完全抗原及其制备方法和抗体。
技术介绍
骨钙素蛋白质是由成骨细胞分泌的，其含量随着年龄的变化而变化，通过血清骨钙素的含量可以了解成骨细胞的状态，对于骨质疏松的判定等具有重要的意义。0C22多肽是小鼠骨钙素蛋白质分子中的一段保守序列，经过序列分析此段多肽具有抗原性的多肽。然而，0C22多肽自身的免疫原性较低，无法作为完全抗原投入使用。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种0C22多肽的完全抗原。此外，还有必要提供该0C22多肽的完全抗原的制备方法，以及与该0C22多肽的完全抗原特异性结合的抗体。一种0C22多肽的完全抗原，所述0C22多肽的完全抗原由0C22多肽和交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成；其中，所述0C22多肽的序列为SEQ ID No. I所示的序列，所述0C22多肽通过半胱氨酸与所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联。在一个实施例中，所述0C22多肽与所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白的摩尔比为800 ~1000 :1。在一个实施例中，所述交联剂为马来酰亚胺。一种0C22多肽的完全抗原的制备方法，包括如下步骤：提供交联剂活化的匙孔血蓝蛋白，并用磷酸钠缓冲液对所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白进行重构，得到重构后的交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液；提供0C22多肽，并将所述0C22多肽用偶联缓冲液或双蒸水溶解，得到0C22多肽溶液；将所述重构后的交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液和所述0C22多肽溶液混匀后充分反应，分离纯化后得到由所述0C22多肽和所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成0C22多肽的完全抗原，其中，所述0C22多肽的序列为SEQ ID No. I所示的序列，所述0C22多肽通过半胱氨酸与所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联。在一个实施 例中，所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液的浓度为5mg/mL ；所述0C22多肽溶液的浓度为8mg/mL。在一个实施例中，将所述重构后的交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液和所述0C22多肽溶液混匀的操作中，所述0C22多肽与所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白的摩尔比为800 ~1000 :1。在一个实施例中，所述交联剂为马来酰亚胺。在一个实施例中，分离纯化后得到由所述0C22多肽和所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成0C22多肽的完全抗原的操作为：用30mL含有质量百分数为0.01%的叠氮钠PBS缓冲液平衡S印hadex G-25M凝胶柱，接着向所述Sephadex G-25M凝胶柱加入反应液,用总体积IOmL的所述PBS缓冲液洗涤，收集洗出液，每次收集O. 5mL~1.0mL，在280nm下测量吸光度值，根据吸光度值收集含蛋白洗脱液。一种0C22多肽的完全抗原的抗体，所述0C22多肽的完全抗原的抗体与上述的0C22多肽的完全抗原特异性结合。一种0C22多肽的完全抗原的抗体，所述0C22多肽的完全抗原的抗体为上述的0C22多肽的完全抗原作为抗原被免疫系统识别后表达得到的抗体，所述0C22多肽的完全抗原的抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。在一个实施例中，所述0C22多肽的完全抗原的抗体为兔源的多克隆抗体。这种0C22多肽的完全抗原具有较强的免疫原性，可以作为完全抗原投入使用。这种0C22多肽的完全抗原的抗体可以用于血清或组织中小鼠骨钙素蛋白质的检测。【专利附图】【附图说明】图I为一实施方式的0C22多肽的完全抗原的制备方法的流程图；图2为交联剂活化的匙孔血蓝蛋白的结构示意图；图3为半胱氨酸盐酸盐一水物的结构示意图；图4为5，5’- 二硫双（2-硝基苯甲酸）的结构示意图；图5为ELISA法测定0C22多肽的完全抗原的多克隆抗体的效价得到的结果图。【具体实施方式】为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本专利技术的【具体实施方式】做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。一实施方式的0C22多肽的完全抗原，该0C22多肽的完全抗原由0C22多肽和交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成。 0C22多肽是小鼠骨钙素蛋白质分子中的一段保守序列，经过序列分析此段多肽具有抗原性的多肽。0C22多肽的序列为SEQ ID No. I所示的序列，0C22多肽通过半胱氨酸与交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联。匙孔血蓝蛋白（KLH)分子表面有大量的活性基团，最常用于偶联的是伯胺基团。小的多肽通常也带有不同基团可以用于偶联，常用的有伯胺基团，羧基和巯基。多肽与KLH的偶联就是利用这些基团，再通过交联剂（crosslinker)，将多肽上的巯基/羧基/伯胺与KLH上的伯胺相连，从而形成共价偶联，制备成完全抗原，用于免疫动物获得抗体。所以偶联的伯胺应该是来自于赖氨酸侧链和N端，而偶联的羧基则来自于天冬氨酸，谷氨酸和C端，巯基则来自于半胱氨酸。至于偶联上去的数量，和加入的肽段，交联剂，KLH的摩尔比例有关。通常一分子KLH上可能会偶联上百个肽段。本实施方式中，0C22多肽与匙孔血蓝蛋白的摩尔比为800~1000 :1。本实施方式中，交联剂为马来酰亚胺。如图I所示的上述的0C22多肽的完全抗原的制备方法，包括如下步骤：S10、提供交联剂活化的匙孔血蓝蛋白，并用磷酸钠缓冲液对交联剂活化的匙孔血蓝蛋白进行重构，得到重构后的交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液。交联剂活化的匙孔血蓝蛋白的结构示意如图2所示。本实施方式中采用的磷酸钠缓冲液pH为6. 6，ImL磷酸钠缓冲液中含有20mM磷酸钠、230mM NaCl、2mM EDTA 和 80mM 蔗糖。本实施方式中，交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液的浓度为5mg/mL。本实施方式中，交联剂为马来酰亚胺。S20、提供0C22多肽，并将0C22多肽用偶联缓冲液或双蒸水溶解，得到0C22多肽溶液。本实施方式中，0C22多肽溶液的浓度为8mg/mL。本实施方式中，偶联缓冲液可以为含有IOOmM的EDTA、80mM的蔗糖和230mM的NaCl的20mM的pH为6. 6的磷酸钠缓冲液。S30、将SlO得到的重 构后的交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液和S20得带的0C22多肽溶液混匀后充分反应，分离纯化后得到由0C22多肽和交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成0C22多肽的完全抗原。其中，所述0C22多肽的序列为SEQ ID No. I所示的序列，0C22多肽通过半胱氨酸与匙孔血蓝蛋白偶联。将重构后的交联剂活化的匙孔血蓝蛋白溶液和0C22多肽溶液混匀的操作中，0C本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种OC22多肽的完全抗原，其特征在于，所述OC22多肽的完全抗原由OC22多肽和交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联形成；其中，所述OC22多肽的序列为SEQ?ID?No.1所示的序列，所述OC22多肽通过半胱氨酸与所述交联剂活化的匙孔血蓝蛋白偶联。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：任培根，郭成志，李健，郭小勇，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：