【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性抗体产品的连续制造工艺
本专利技术涉及生物技术的方法，具体涉及制造双特异性抗体的连续制造工艺。
技术介绍
最快速和最有前景地发展中的治疗剂是基于蛋白质的药物，它已经在几乎所有医学领域中发挥重要作用，并且是临床(前)开发中且作为商业产品增长最快的治疗剂(Leader[前导序列],NatureReviewsDrugDiscovery[药物发现自然评论]2008年1月7日,21-39)。与小化学药物相比，蛋白质药物在相对低的浓度下具有高特异性和活性，并且通常提供诸如各种癌症、自身免疫疾病和代谢障碍等高影响疾病的疗法(Roberts,TrendsBiotechnol.[生物技术趋势]2014年7月；32(7):372-80，Wang,IntJPharm.[国际药剂学杂志]1999年8月20日；185(2):129-88)。由于商业规模纯化工艺的进展，现在可以在首次制造时以高纯度获得基于蛋白质的药物如重组蛋白质。然而，蛋白质仅略微稳定，并且即使在上游制造过程中也极易经受化学和物理降解。化学降解是指涉及共价键的修饰，如脱...
【技术保护点】
1.一种用于生产至少包含第一和第二结合结构域的双特异性抗体产品的连续上游制造工艺，其中与该第二结合结构域相比，该第一结合结构域结合不同的靶标，该工艺包括以下步骤：/n(i)在灌注生物反应器中提供包含至少一种哺乳动物细胞培养物的液体细胞培养基，其中该哺乳动物细胞培养物能够表达该双特异性抗体产品，并且其中这些细胞在该灌注生物反应器中接种时具有至少0.4×10^6个细胞/mL的浓度，/n(ii)通过应用灌注速率(D)以便以优选连续方式更换该液体细胞培养基、而不从生物反应器中移除细胞来培养该哺乳动物细胞培养物，其中该灌注速率最初对应于至少0.4个容器体积/天(vvd)，然后当达到生...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171211 US 62/597,2501.一种用于生产至少包含第一和第二结合结构域的双特异性抗体产品的连续上游制造工艺，其中与该第二结合结构域相比，该第一结合结构域结合不同的靶标，该工艺包括以下步骤：
(i)在灌注生物反应器中提供包含至少一种哺乳动物细胞培养物的液体细胞培养基，其中该哺乳动物细胞培养物能够表达该双特异性抗体产品，并且其中这些细胞在该灌注生物反应器中接种时具有至少0.4×10^6个细胞/mL的浓度，
(ii)通过应用灌注速率(D)以便以优选连续方式更换该液体细胞培养基、而不从生物反应器中移除细胞来培养该哺乳动物细胞培养物，其中该灌注速率最初对应于至少0.4个容器体积/天(vvd)，然后当达到生物量设定点时连续地、逐渐地或增量式地增加至至少1vvd，其中该生物量设定点等于至少35×10^6个细胞/mL的活细胞密度(VCD)，
(iii)当达到该生物量设定点时，通过应用灌注速率(D)以连续地或增量式地更换该液体细胞培养基、优选不从生物反应器中移除细胞来维持灌注培养，其中步骤(iii)中的灌注速率对应于至少1vvd，并且
(iv)任选地从该生物反应器排出额外细胞以维持该生物量设定点，其中
通过在步骤(ii)至(iv)从该液体细胞培养基连续收获该双特异性抗体产品，将该生物反应器中的双特异性抗体产品浓度保持为低于3.5g/L。
2.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(i)中这些细胞在该生物反应器中接种时具有至少1×10^6个细胞/mL的浓度。
3.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(ii)中该生物量设定点等于至少65×10^6个细胞/mL的VCD。
4.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(ii)中该生物量设定点等于至少71×10^6个细胞/mL的VCD。
5.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(ii)中培养该细胞培养物进行至少4天、优选至少7天、优选12天。
6.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(ii)中灌注速率(D)在0.4至7vvd的范围内。
7.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(iii)中灌注速率(D)在1至7vvd的范围内。
8.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(iii)中灌注速率(D)在2至6.4vvd的范围内、且优选等于2vvd、最优选2.01vvd。
9.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(iii)中灌注速率(D)是在0.01至0.15nL/细胞-天(每天nL/细胞)范围内、优选在0.015至0.035nL/细胞-天的范围内或在0.051至0.1nL/细胞-天的范围内的细胞特异性灌注速率(CSPR)。
10.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(v)中将该双特异性抗体产品浓度保持为低于1.2g/L、优选低于0.5g/L、最优选低于0.12g/L。
11.根据权利要求1所述的工艺，其中在步骤(v)中收获前该双特异性抗体产品在该生物反应器中的停留时间为至多2天、优选至多1天、最优选至多0.5天。
12.根据权利要求1所述的工艺，其中分离的双特异性抗体的单体含量百分比为至少50％、优选至少60％、更优选至少70％或至少80％、90％、93％或95％。
13.根据权利要求1所述的工艺，其中该双特异性抗体产品是双特异性全长抗体或非全长双特异性抗体构建体。
14.根据权利要求13所述的工艺，其中该双特异性抗体产品是双特异性全长抗体，其第一和/或第二结合结构域结合靶标和/或效应细胞。
15.根据权利要求13所述的工艺，其中该双特异性抗体构建体包含半衰期延长部分、优选源自IgG抗体的基于Fc的半衰期延长部分、最优选scFc半衰期延长部分。
16.根据权利要求13所述的工艺，其中该双特异性抗体构建体是双特异性T细胞衔接物
17.根据权利要求1所述的工艺，其中该双特异性抗体产品的该第一结合结构域结合选自下组的至少一种靶细胞表面抗原，该组由以下组成：CD19、CD33、EGFRvIII、MSLN、CDH19、FLT3、DLL3、CDH3、BCMA和PSMA。
18.根据权利要求1所述的工艺，其中该双特异性抗体产品的该第二结合结构域结合CD3。
19.根据权利要求1所述的工艺，其中该第一结合结构域包含含有CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的VH区和含有CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的VL区，该CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3以及CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3选自由以下组成的组：
(a)如SEQIDNO:1所示的CDR-H1、如SEQIDNO:2所示的CDR-H2、如SEQIDNO:3所示的CDR-H3、如SEQIDNO:4所示的CDR-L1、如SEQIDNO:5所示的CDR-L2以及如SEQIDNO:6所示的CDR-L3，
(b)如SEQIDNO:29所示的CDR-H1、如SE...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·古德尔，R·德什潘德，N·戈麦斯，H·巴克赫达瑞恩，Y·王，
申请(专利权)人：安进公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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