组合利用特异性琼胶酶制备高纯度新琼二糖的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种组合利用内切型和外切型琼胶酶降解琼脂或或粗琼胶(红藻多糖提取物)获得高纯度新琼二糖的方法。本发明专利技术涉及一种琼胶酶AgaA和一种双功能酶AgaB，其中AgaA为内切型琼胶酶，能够迅速降解琼脂或琼脂糖产生新琼二糖、四糖和六糖，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；AgaB为双功能外切型琼胶酶，同时具有降解琼脂糖和紫菜多糖(即硫酸酯化的琼脂糖)的活性，能够降解琼脂或粗琼胶(红藻多糖提取物)或其寡糖产生单一产物新琼二糖，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。同时本发明专利技术还公开了利用基因工程技术重组表达和制备琼胶酶的方法。本发明专利技术所涉及的制备高纯度新琼二糖的方法及特异性琼胶酶(或紫菜多糖酶)，在制备琼胶寡糖领域有着广阔的应用前景。

Preparation and application of high purity neoqiong disaccharide by combination of specific agarase

【技术实现步骤摘要】
组合利用特异性琼胶酶制备高纯度新琼二糖的方法及应用
本专利技术属于酶工程和基因工程
，具体涉及利用特异性琼胶酶制备新琼寡糖的方法，特别是组合使用内切型琼胶酶和外切型双功能琼胶酶制备高纯度新琼二糖的方法。
技术介绍
琼胶又叫琼脂、洋菜、冻粉、寒天、燕菜等，因其独特的天然性质和丰富的营养价值被广泛应用在各大工业领域。琼胶是从石花菜科和龙须菜科红藻类细胞壁中提取的水溶性多糖物质，由琼脂糖和琼脂胶两部分组成，其中琼脂糖是由(1-3)-O-β-D-半乳糖和(1-4)-O-3,6-内醚-α-L-半乳糖交替组成的线形链状分子，琼脂胶成分较复杂主要由长短不一的半乳糖残基的多糖链组成。琼胶具有良好的稳定性及凝胶性，常被用作微生物培养基、琼脂糖凝胶电泳、和色谱支持材料，也被认为是一种安全的食品添加剂，用于糖衣、釉料、加工奶酪、果冻糖等。但近年来随着琼胶自身应用的局限性，琼胶寡糖逐渐成为研究热点。目前降解琼胶的方法主要有化学法和酶促降解法，尽管化学法成本较低，但存在操作条件难控制、产物不均一、产物分析和回收难等问题，而利用酶解法制备琼胶寡糖,不仅反应条件温和，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备高纯度新琼二糖的方法，其特征在于，该方法组合利用内切型琼胶酶和外切型双功能琼胶酶降解琼脂或琼脂糖或粗琼胶(红藻多糖提取物)或相应寡糖获得高纯度新琼二糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备高纯度新琼二糖的方法，其特征在于，该方法组合利用内切型琼胶酶和外切型双功能琼胶酶降解琼脂或琼脂糖或粗琼胶(红藻多糖提取物)或相应寡糖获得高纯度新琼二糖。


2.如权利要求1所述的内切型琼胶酶，其特征在于,所述琼胶酶从内部水解琼脂或琼脂糖或粗琼胶，产生新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖等新琼寡糖产物。


3.如权利要求2所述的内切型琼胶酶，其特征在于,该酶包含如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。


4.如权利要求3所述的内切型琼胶酶，其特征在于,编码该琼胶酶的核苷酸序列，优选为如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列。


5.如权利要求1所述的外切型双功能琼胶酶，其特征在于，该酶同时具有降解琼脂糖和紫菜多糖(即硫酸酯化的琼脂糖)的活性。


6.如权利要求1所述的外切型双功能琼胶酶，其特征在于，所述琼胶酶从琼脂或琼脂糖或粗琼胶(红藻多糖提取物)或相应寡糖的某一末端进行水解，产生新琼二糖产物。


7.如权利要求5和权利要求6所述的外切型双功能琼胶酶，其特征在于，该酶包含如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。


8.如权利要求7所述的外切型双功能琼胶酶，其特征在于，编码该琼胶酶的核苷酸序列，优选为如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列。


9.如权利要求1中所述的制备高纯度新琼二糖的方法，其特征在于，内切型琼胶酶和外切型双功能琼胶酶可以同时加入，或先加入内切型琼胶酶再加入外切型双功能琼胶酶，或先加入外切型双功能琼胶酶再加入内切型琼胶酶，优选地，先加入内切型琼胶酶将琼脂或琼脂糖或粗琼胶(红藻多糖提取物)液化，再加入外切型双功能琼胶酶进一步降解产生高纯度新琼二糖。


10.如权利要求9中所述的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱玥明，闫军军，陈朋，曾艳，孙媛霞，
申请(专利权)人：中国科学院天津工业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12