一种磷酸二酯酶4抑制剂在制备新型抗炎药物方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种磷酸二酯酶4抑制剂在制备新型抗炎药物方面的应用。本发明专利技术发现，朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素为有效的磷酸二酯酶4抑制剂，庐山香料素C抑制作用不明显。朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素中以异防己内酯的抑制作用最强，接近于阳性药咯利普兰。

Application of a phosphodiesterase 4 inhibitor in the preparation of new anti-inflammatory drugs

The invention discloses a phosphodiesterase 4 inhibitor used in the preparation of a novel anti-inflammatory drug. The present invention has found that labial diprolactone, isotetrandrinolide, Lushan spice A and didentate spice are effective phosphodiesterase 4 inhibitors, while Lushan spice C has no obvious inhibitory effect. Isotranolactone had the strongest inhibitory effect among the three kinds of spices, which was close to the positive drug, clenbuterol.

【技术实现步骤摘要】
一种磷酸二酯酶4抑制剂在制备新型抗炎药物方面的应用
本专利技术属于医药领域，涉及已知化合物用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途，进而可以开发成新型抗炎药物。
技术介绍
磷酸二酯酶4广泛存在于多种炎性细胞内，与细胞内的多种炎症密切相关，作为唯一降解环腺苷酸的同功酶，可通过调整磷酸二酯酶4的浓度，进而调整炎症细胞内环腺苷酸的浓度水平，起到抗炎效果。因此，磷酸二酯酶4抑制剂对于开发新型抗炎药物具有重要意义(参考文献：汤慧芳等，磷酸二酯酶4作为抗炎药物靶点的研究现状及未来发展方向，中国药科大学学报，2006年01期)。朱唇二内酯(CAS登录号：85564-00-7)、异防己内酯(CAS登录号：471-54-5)、庐山香料素A(CAS登录号：135650-34-9)、二齿香料素(CAS登录号：134981-85-4)、庐山香料素C(CAS登录号：135650-35-0)为从植物中分到的已知天然化合物，结构式如下。现有技术没有报道过朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素、庐山香料素C与磷酸二酯酶4的相关报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供已知化合物用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途，进而开发成抗炎药物。本专利技术上述目的通过如下技术方案实现：朱唇二内酯用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途。朱唇二内酯用作磷酸二酯酶4抑制剂进而用于制备抗炎药物的医药用途。异防己内酯用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途。异防己内酯用作磷酸二酯酶4抑制剂进而用于制备抗炎药物的医药用途。庐山香料素A或二齿香料素用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途。庐山香料素A或二齿香料素用作磷酸二酯酶4抑制剂进而用于制备抗炎药物的用途。有益效果：本专利技术发现，朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素为有效的磷酸二酯酶4抑制剂，庐山香料素C抑制作用不明显。朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素中以异防己内酯的抑制作用最强，接近于阳性药咯利普兰。附图说明图1为各化合物对磷酸二酯酶4抑制作用的IC50值。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。按照文献方法(刘军锋等，RP-HPLC测定苦木生物碱体外对磷酸二酯酶4的抑制活性，中国现代中药，2009年03期)测定朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素、庐山香料素C对磷酸二酯酶4的抑制作用。一、实验材料和仪器朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素和庐山香料素C自制或购买，纯度不低于98％。cAMP、阳性药咯利普兰购自Sigma公司。淋巴细胞分离液购自南京建成生物。血液样品采集自生猪屠宰场健康商品猪，肝素抗凝(35U/L)。pH值为7.4的PBS缓冲液、钙镁磷酸盐缓冲液、pH值为6.6的50mM磷酸盐缓冲液按照文献方法配制。液相色谱仪采用Agilent1100，色谱柱采用DiscoveryC18(250×4.6mm，5μm)。二、实验方法1、磷酸二酯酶4酶样的制备参照文献方法制备猪嗜中性粒细胞，粒细胞用钙镁磷酸盐缓冲液稀释至约1011个/L，再将该稀释液在冰浴中用玻璃匀浆器制成匀浆，显微镜下确认细胞被粉碎均匀，即得富含磷酸二酯酶4的酶样。2、色谱条件色谱柱：DiscoveryC18(250×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-pH值为6.6的50mM磷酸盐缓冲液(体积比1:9)；柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：254nm；进样量：20μL。3、磷酸二酯酶4的活性测定cAMP以钙镁磷酸盐缓冲液配制成100μM的溶液，每管加80μL，分别加入酶样10、20、30、40、50、60μL，对照管不加酶样，各管用钙镁磷酸盐缓冲液定容至180μL，加样过程在冰浴中进行。加样后各管置35℃中恒温孵育30min，然后于100℃水浴中2～3min终止反应，各管于4℃、15000rpm离心30min，取上清80μL，用超纯水稀释10倍，HPLC进样20μL，254nm波长下检测。磷酸二酯酶4的活性以底物的水解百分率表示：磷酸二酯酶4活性(％)＝(对照管底物浓度-测定管底物浓度)/对照管底物浓度×100％。结果表明，酶样在10～60μL与活性呈线性关系，Y＝0.8705X-0.4002(r＝0.9991)4、待测化合物对磷酸二酯酶4活性抑制率的测定酶反应在钙镁磷酸盐缓冲液中进行，cAMP以钙镁磷酸盐缓冲液配制成100μM的溶液，待测样品适量溶于钙镁磷酸盐缓冲液。空白对照管加入50μL的cAMP溶液、30μL灭活的酶样；对照管加入50μL的cAMP溶液、30μL酶样；样品管加入50μL的cAMP溶液、30μL酶样、10μL待测样品，阳性药管加入10μL咯利普兰。各管用钙镁磷酸盐缓冲液定容至100μL。加样过程在冰浴中进行。加样后各管置35℃中恒温孵育30min，然后于100℃水浴2～3min终止反应，各管于4℃、15000rpm离心30min，取上清80μL，用超纯水稀释10倍，HPLC进样20μL，254nm波长下检测，计算磷酸二酯酶4活性及各化合物抑制率，计算IC50值。磷酸二酯酶4活性(％)＝(空白对照管底物浓度-对照管或样品管底物浓度)/空白对照管底物浓度×100％抑制率(％)＝(对照管磷酸二酯酶4活性-样品管磷酸二酯酶4活性)/对照管磷酸二酯酶4活性×100％5、数据处理采用SPSS19.0统计软件进行数据分析，结果采用均值±标准差表示。多组样本均数间比较采用One-wayANOVA检验，P＜0.05为差异有统计学意义。三、实验结果朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素、庐山香料素C以及阳性药咯利普兰的IC50值如表1和图1所示。表1各化合物对磷酸二酯酶4抑制作用的IC50值上述结果表明，朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素为有效的磷酸二酯酶4抑制剂，庐山香料素C抑制作用不明显。朱唇二内酯、异防己内酯、庐山香料素A、二齿香料素中以异防己内酯的抑制作用最强，接近于阳性药咯利普兰。上述实施例的作用在于具体介绍本专利技术的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本专利技术的保护范围局限于该具体实施例。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.异防己内酯用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途。

【技术特征摘要】
1.异防己内酯用作磷酸二酯酶4抑制剂的用途。2.异防己内...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡艳，
申请(专利权)人：胡艳，
类型：发明
国别省市：江苏,32