本发明专利技术一种ASBEL抑制剂及其在治疗三阴性乳腺癌药物中的应用，具体为一种抑制人BTG3基因天然反义转录物ASBEL的反义寡聚核苷酸及其应用。该抑制剂特异性结合天然反义转录物ASBEL，解除其对BTG3蛋白表达的抑制作用，从而有效抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖和迁移等。本发明专利技术的抑制剂不仅限于所述的修饰方法，任何可以有效防止其降解的修饰方法都是有效的。
【技术实现步骤摘要】
：本专利技术涉及一种ASBEL抑制剂及其在制备治疗三阴性乳腺癌药物中的应用。本专利技术还涉及含有该抑制剂的药物组合物。
技术介绍
：癌症是一种恶性疾病。由于各种致癌因素的作用，机体细胞发生增殖调控的异常，一旦其无法得到有效地控制，就可能导致癌症的发生。这些致癌因素多种多样，有些来自机体自身的基因突变，有些来自于环境中的有毒有害物质，还有一些来自于其他疾病，等等。细胞内基因表达量出现紊乱被证实是癌细胞的一大特征，而人为地对某些关键基因表达量进行控制，可能会恢复癌细胞的凋亡过程或抑制其增殖的能力，从而使癌症得到控制。三阴性乳腺癌是一种以ER(雌激素受体)、PR(孕激素受体)以及HER2(人表皮胜正因子受体2)均为阴性为特征的乳腺癌亚型。三阴性乳腺癌恶性度很高，易发生转移，预后差，且当前没有特有的针对性治疗指南。目前主要的治疗手段仍然是放疗、化疗及手术切除治疗，复发风险较大。乳腺癌已经成为当今世界上女性癌症发病率最高的一种，而三阴性乳腺癌又是乳腺癌各个亚型中最为危险的。从基因的角度找到能治疗三阴性乳腺的全新的有效药物，具有十分重要的意义。人类全基因组中只有2％的DNA序列编码蛋白，而其余的大部分DNA序列，可以转录出非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。这些ncRNA对于细胞信号的传递，代谢及增殖水平调控，蛋白表达量的控制等等方面都有着重要的作用。ncRNA的种类多种多样，其中长度在200nt以上的被称为长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)。目前已经发现的lncRNA已经有超过三千种，它们的作用机制不尽相同，可以通过表观遗传调节，转录 调节和转录后调节等方式去调控靶点的活性。lncRNA中有一类被称为天然反义转录物(nature antisense transcripts,NATs)，它们一般从基因的反义链上转录，并通过与信使RNA(message RNA，mRNA)形成杂交而抑制mRNA的翻译过程。ASBEL(antisense ncRNA in the ANA/BTG3locus)是NATs类别中的一种，长度约为2kb，基因位于人21号染色体。它通过与BTG3的mRNA形成杂交，阻止其出细胞核进入胞浆，从而降低了细胞中抑癌蛋白BTG3的表达量(Satoshi Yanagida,Kenzui Taniue,Hironobu Sugimasa,et al.ASBEL,an ANA/BTG3antisense transcript required for tumorigenicity of ovarian carcinoma[J].Scientific Reports,2013；3:1305.)。研究表明，癌细胞的增殖、代谢、迁移、侵袭等过程的失调与lncRNA的表达异常有关。针对表达异常的lncRNA进行人为纠正，可能会恢复癌细胞的程序性凋亡或抑制其生长，从而对癌细胞的发展进行有效地控制。当前对于lncRNA的研究还不够全面和深入，而针对lncRNA的癌症治疗将是一个很有发展前景的方向。
技术实现思路
：本专利技术提供了一种ASBEL抑制剂在制备治疗三阴性乳腺癌药物中的应用。1.一种ASBEL抑制剂，其特征在于，所述ASBEL抑制剂具有与天然反义转录物ASBEL有16个连续的核苷酸互补的序列。2.所述抑制剂为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者肽核酸。3.所述抑制剂为脱氧核糖核苷酸时，序列为-CGGTCTGGGCCGCCGA-3’；所述抑制剂为核糖核苷酸时，序列为5’-CGGUCUGGGCCGCCGA-3’。4.所述抑制剂进一步被修饰。所述修饰选自核糖修饰、碱基修饰和磷酸骨架修饰中的一种或几种的组合。5.所述修饰选自硫代修饰、2‘-甲氧基修饰、锁核酸修饰和胆固醇修 饰中的一种或几种。6.所述的抑制剂用于制备治疗与BTG3低表达相关疾病的药物的用途。7.所述抑制剂可与其他治疗药物联合施用。例如阿霉素。8.所述BTG3低表达相关疾病为乳腺癌，优选为三阴性乳腺癌。9.一种药物组合物，含有所述的抑制剂以及药学上可接受的载体。例如脂质体类纳米载体。本专利技术中所述ASBEL抑制剂(命名为antago34)为一条长度为16nt的反义寡脱氧核苷酸链，序列为5’-CGGTCTGGGCCGCCGA-3’。所述ASBEL抑制剂用于制备治疗三阴性乳腺癌药物。进一步，所述三阴性乳腺癌为三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231。本专利技术设计的反义寡脱氧核苷酸antago34，其序列具有特异性生物学活性，所以任何增加反义寡脱氧核苷酸稳定性的修饰都可以适用。本专利技术中所述antago34在其5’端和3’端分别进行3个碱基的硫代磷酸化修饰。本专利技术的上述antago34被转染进入MDA-MB-231细胞中后，能有效的诱导细胞凋亡，且可观察到细胞增殖减慢，迁移率下降。附图说明：图1A表明ASBEL抑制剂(antago34)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。其中，antagoNC组为阴性对照，siASBEL组为靶向ASBEL的siRNA，Lipo组为转染时只加入lipo，Blank组为不做任何处理的空白对照。 1B图表明PS(硫代磷酸化修饰)和LNA(锁核酸修饰)修饰的antago34，在不同浓度下对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。图2A、B表明antago34对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中BTG3基因的mRNA和蛋白水平的影响。其中，GAPDH为蛋白内参。图3A、B表明antago34对人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响。图4表明antago34对人乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力的影响。具体实施方式：下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但列举这些实施例只是起说明作用，本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例1：合成ASBEL抑制剂、阴性对照及siRNA反义寡脱氧核苷酸链ASBEL抑制剂(即antago34)，由上海生工生物工程股份有限公司合成，其序列为5’-CGGTCTGGGCCGCCGA-3’，其中第1、2、3、14、15、16位碱基间进行硫代磷酸化修饰。阴性对照(antagoNC)的碱基修饰方式完全一样，其序列为5’-TCCACGCGCAGTACAA-3’。上述序列均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。锁核酸修饰的antago34，由上海辉睿生物科技有限公司合成，其序列、阴性对照的序列以及修饰的位置和数量，与上述硫代磷酸化修饰完全相同。靶向ASBEL的siRNA序列为5’-GCAAACGTTTCTAGGAACA-3’，由广州市锐博生物科技有限公司合成。实施例2：ASBEL抑制剂对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用在96孔板中培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231，细胞培养基为添加了10％胎牛血清(Gibco)(指胎牛血清在培养基中所占体积为10％，下同)的DMEM培养基(Gibco)。待细胞汇合度在40％(指每孔中贴壁细胞所占面积占底面积40％，下同)时，使用lipofectamine2000(Invitrogen)进行转染，ASBEL抑制剂(即antago34)、阴性对照antagoNC以及siASBEL的浓度均为100nM，以每孔本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种ASBEL抑制剂，其特征在于，所述ASBEL抑制剂具有与天然反义转录物ASBEL有16个连续的核苷酸互补的序列。
【技术特征摘要】
1.一种ASBEL抑制剂，其特征在于，所述ASBEL抑制剂具有与天然反义转录物ASBEL有16个连续的核苷酸互补的序列。2.如权利要求1所述的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者肽核酸。3.如权利要求2所述的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为脱氧核糖核苷酸时，序列为5’-CGGTCTGGGCCGCCGA-3’；所述抑制剂为核糖核苷酸时，序列为5’-CGGUCUGGGCCGCCGA-3’。4.如权利要求1～3中任一项所述的抑制剂，其特征在于，所述抑制剂进一步被修饰。5.如权利要求4所述的抑制剂，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛望，夏阳，邓雄威，肖向茜，张芳，周韶梅，曾毅，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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