本发明专利技术涉及一种源于酪蛋白的具有血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)和DPP-IV双重抑制活性的多肽。其氨基酸序列为Pro-Pro-Phe-Leu-Gln-Pro-Glu-Val-Met。多肽PPFLQPEVM具有ACE抑制活性以及降血压活性，同时还具有DPP-IV抑制活性以及降血糖活性，作为高血压、心脏病和心血管病、糖尿病、肥胖症、肾病、免疫紊乱等疾病的保健品和药物先导化合物具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽PPFLQPEVM在制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、二肽基肽酶—IV(DPP-IV)抑制剂以及降血压、降血糖药物和保健品。
技术介绍
1.ACE抑制活性高血压是一种常见的心血管疾病，发病率高，是引发心、脑、肾和血管等各种并发症和导致中风、促进动脉粥样硬化、冠心病的一个重要危险因子。世界各国的平均发病率为10％-20％，我国高血压患者已超过1.6亿人口，治疗和预防高血压是当前社会十分重要的课题。肽是一类重要的降血压药物，肽类化合物降血压的作用靶点是抑制血管紧张素转化酶(angiotensin-convertingenzyme,ACE)的活性(文献1：VanessaVermeirssen，JohnVanCamp，WillyVerstraete，BritishJournalofNutrition2004，92：357-366)。血管紧张素转化酶可将不具活性的十肽血管紧张素I转化为具有强烈收缩血管作用的八肽血管紧张素II，从而使血压升高，因此抑制ACE活性可有效控制高血压。多肽是一类重要的ACE抑制剂，天然蛋白质的酶解肽是ACE抑制剂肽的主要来源(文献2：LieselotVercruysse,JohnVanCamp,GuySmagghe,J.Agric.FoodChem2005,53:8106-8115)。血管紧张素转化酶对于机体血压和心血管功能起着重要的调节作用，因此抑制ACE活性的药物在心血管、心力衰竭等疾病的治疗中发挥重要作用。多肽类的ACE抑制剂在降血压的同时不会引起常见降压药物的干咳等副作用。2.DPP-IV抑制活性二肽基肽酶—IV(dipeptidylpeptidase-IV，DPP-IV)(EC3.4.14.5)是一种丝氨酸蛋白酶，广泛分布于人体内。DPP-IV通过对多肽的剪切使其失活，从而达到调节生理功能的作用。DPP-IV优先水解N-末端第二位上具有脯氨酸(Pro)或丙氨酸(Ala)的蛋白质。其作用底物包括：胰高血糖素样肽-1(GLP217-36)、抑胃肽(GIP1-42)、神经肽(NPY)、YY肽(PYY)以及胰多肽家族(PP-family)等。这些物质的共同特点就是N-末端第二位的氨基酸残基或者是脯氨酸或者是丙氨酸残基。DPP-IV通过作用于以上多肽底物而在糖尿病、葡萄糖耐量、肥胖、食欲调节、高血脂症、骨质疏松、神经肽新陈代谢和T-细胞激活等相关疾病中起着重要的作用。因此，体内给予DPP-IV抑制剂可预防相关底物肽的N-末端降解，从而保障人体机能正常运行。DPP-IV将完整的GLP-1和GIP反应切断N-末端2个氨基酸残基后，使其失活从而影响GLP-1和GIP相关的血糖调节等生理反应。体内给予DPP-IV抑制剂可预防GLP-1和GIP的N-末端降解，使胰岛素分泌物增加从而改善葡萄糖耐量。鉴于DPP-IV抑制剂与血糖代谢的密切关系，DPP-IV抑制剂已成为新型2型糖尿病药物的研究热点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供多肽PPFLQPEVM在抑制ACE活性和降血压以及抑制DPP-IV活性和降血糖中的应用；多肽PPFLQPEVM具有ACE抑制活性、DPP-IV抑制活性以及降血压、降血糖活性，作为高血压、心脏病和心血管病、糖尿病、肥胖症、肾病、免疫紊乱等疾病的保健品和药物先导化合物具有良好的应用前景。为实现上述目的，本专利技术以所述多肽PPFLQPEVM为ACE抑制剂、DPP-IV抑制剂以及降血压、降血糖活性的有效成份。其具有序列表SEQIDNO：1中氨基酸序列；多肽PPFLQPEVM为ACE抑制剂、DPP-IV抑制剂以及降血压、降血糖药物和保健品的活性成分，其中可添加药物学上可接受的载体或辅料。具有ACE抑制活性、DPP-IV抑制活性以及降血压、降血糖活性的多肽PPFLQPEVM，氨基酸序列为Pro-Pro-Phe-Leu-Gln-Pro-Glu-Val-Met，为单链线性结构，白色粉末状，易溶于水，分子量为1057.5Da；对ACE活性具有较强抑制作用，IC50为34.63μM；对DPP-IV活性具有很强的抑制作用，IC50为0.44mM。多肽PPFLQPEVM具备ACE抑制剂所要求的特征：1.ACE抑制活性肽主要取决于C端氨基酸，C末端为芳香族氨基酸(Trp，Phe，Tyr)，或疏水氨基酸；而N端为疏水氨基酸的肽段具有较强的ACE抑制活性。多肽PPFLQPEVM的C末端二肽均为上述氨基酸，分别为Val(疏水)和Met(疏水)，N末端为疏水氨基酸Pro，因此完全满足要求。2.肽的疏水性氨基酸含量是影响其抑制活性的重要原因，抑制活性高的肽都含有较多的疏水氨基酸。多肽PPFLQPEVM的疏水氨基酸分别有Pro、Pro、Phe、Leu、Pro、Val和Met，含有较多的疏水氨基酸。本专利技术与现有技术相比，具有如下有益效果：本专利技术首次从酪蛋白中获得并确定了活性化合物的结构，化合物具有较好的抑制ACE和DPP-IV的活性，因此作为治疗高血压等心血管疾病以及糖尿病、心脏病、肥胖症、肾病、免疫紊乱等疾病的保健品和药物先导化合物具有良好的潜力和应用前景。具体实施方式实施例1多肽PPFLQPEVM的鉴定采用LC-MS/MS与Shotgun蛋白质组学技术相结合的方法。以牛奶酸奶为原料，经酶解蛋白，离心，超滤及LC-MS/MS分析，结合构效关系特征，筛选对ACE和DPP-IV具有抑制作用的肽段。其具体方法如下：样品与35mMNaCl溶液按照1：1的体积比混合，用1M盐酸调节pH为2.0，加入胃蛋白酶，加入量为胃蛋白酶：样品中蛋白质量比＝1:100，于37℃酶解1h。1MNaOH调节pH至7.0结束反应。酶解液酶解液于4℃、3000～10000g(3000～10000g均可)转速下离心20分钟10-60分钟均可)反应液，上清用截留分子量为10000的超滤膜(3000～10000均可)超滤，滤液用C18-SPE柱除盐。除盐后将酶解样品冻干，溶于质量浓度0.1％甲酸水中，LTQOrbitrapXL(离子阱回旋共振组合质谱仪)对样品进行质谱分析。肽序列搜库：将样品用LTQOrbitrapXL进行质谱分析，离子源为ESI，得到的数据在bovine.fasta库中进行检索，结合构效关系进行筛选，获得序列为PPFLQPEVM的多肽。实施例2多肽PPFLQPEVM的ACE抑制活性检测原理ACE在37℃、PH8.3的条件下催化分解血管紧张素I的模拟底物Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine(HHL)产生马尿酸，该物质在228nm处有特征紫外吸收峰。当加入ACE抑制物时，ACE对HHL的催化作用受到抑制，马尿酸的生成量会减少。通过测定加入抑制剂前后的马尿酸紫外吸收值可以计算出抑制活性的大小。反应体系缓冲液为0.05M，PH8.3硼酸盐缓冲液；底物为Hippuryl-L-Histidyl-L-Leucine(HHL)，MW429.47，用上述缓冲液配成5mM；ACE(angiotensin-convertingenzyme)用上述缓冲液配成0.1U/ml。ODA(对照组，为不存在抑制剂但存在酶时的吸光值)：50μl缓冲液+50ulHHL+50μl缓冲液于37℃水浴5本文档来自技高网...
【技术保护点】
具有ACE和DPP‑IV双重抑制活性的九肽，其特征在于：所述九肽为PPFLQPEVM，具有序列表SEQ ID NO：1中氨基酸序列；该多肽的氨基酸序列具体为Pro‑Pro‑Phe‑Leu‑Gln‑Pro‑Glu‑Val‑Met。
【技术特征摘要】
1.具有ACE和DPP-IV双重抑制活性的九肽，其特征在于：所述九肽为PPFLQPEVM，具有序列表SEQIDNO：1中氨基酸序列；该多肽的氨基酸序列具体为Pro-Pro-Phe-Leu-Gln-Pro-Glu-Val-Met。2.一种权利要求1所述九肽在制备ACE抑制剂或降血压药物、以及在制备DPP-IV抑制剂或降血糖药物中一种或二...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹汉法，靳艳，于洋，晏嘉泽，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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