结合DLL3和CD3的双特异性抗体构建体制造技术

本发明专利技术涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人DLL3的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本发明专利技术提供了一种编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本发明专利技术提供了一种用于产生本发明专利技术的所述抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医疗用途和包含所述抗体构建体的试剂盒。

Dual specific antibody construction combined with DLL3 and CD3

The present invention relates to a dual specific antibody construction containing the first binding domain of human DLL3 binding to the surface of the target cell and a second binding domain of human CD3 binding to the surface of the T cell. In addition, the present invention provides a kind of polynucleotide that encodes the antibody construction body, a carrier containing the polynucleotide, and a host cell that is converted or transfected by the said polynucleotide or carrier. In addition, the present invention provides a method for producing the antibody construction of the present invention, the medical use of the antibody construction body and a kit containing the body of the antibody.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合DLL3和CD3的双特异性抗体构建体本专利技术涉及一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人DLL3的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域。此外，本专利技术提供一种编码所述抗体构建体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体和用所述多核苷酸或载体转化或转染的宿主细胞。此外，本专利技术提供一种用于产生本专利技术的所述抗体构建体的方法、所述抗体构建体的医疗用途和包含所述抗体构建体的试剂盒。小细胞肺癌(SCLC)是具有不良预后和有限的治疗选项的肺癌的侵袭性形式，其占所有新近诊断的肺癌的约15％且每年在美国出现约25,000例新病例，并且在全世界范围内出现180,000例新病例。在过去几十年，存活率保持较低，其中仅5％SCLC患者存活五年，大部分归因于缺乏可对抗此肺癌形式的新疗法。大部分患者具有广泛期疾病，而约三分的一患者具有局限期疾病，此由仅一侧胸腔中存在肿瘤且适合单辐射场来定义。这些阶段影响可用的治疗方案，其中局限期疾病用化学疗法和辐射来治疗，而广泛期疾病用单独的化学疗法治疗。具有淋巴瘤样特征的散播性、转移性肿瘤为SCLC的标志。SCLC患者的第一例已知诊断将其描述为淋巴系统疾病，在1926年以前并未识别为肺癌，而其强调SCLC肿瘤与其他实体瘤相比的一些独特性质。患者通常对当前一线疗法响应良好，该一线疗法包括依托泊苷和顺铂，但始终快速复发，而产生化疗抗性疾病，对此，目前没有可用的治疗选项。复发性难治性情形中的预后极差，其中存在快速疾病进展和不到六个月的短中值存活期。此外，SCLC患者具有高共病率，包括高血压、心脏病、糖尿病和副肿瘤综合征。与SCLC患者的通常较高的年龄一起，这些共病影响患者忍受苛刻的化疗方案的能力，从而进一步限制了治疗选项。包含识别在T细胞上表达的CD3的scFv和识别肿瘤相关抗原的另一scFv的双特异性抗体形式已展示出有前景的临床功效，在诸如难治性B-ALL的恶性血液病中具有高响应率(Topp，M.S.等人Blood，2012.120(26)：第5185-5187页)，从而使Blincyto获得批准。尽管在实体瘤适应症中尚未证明T细胞接合性(Tcell-engagingtherapy)的功效，但鉴于疾病的散播性，SCLC可代表CD3x肿瘤靶标双特异性抗体形式的有前景的实体瘤适应症。因此，引导T细胞针对特异性肿瘤抗原的双特异性T细胞接合体(engager)带来了作为SCLC治疗中的新治疗选项的新机会。通过下一代测序，对一组原发性患者肿瘤和一大批正常组织中DLL3mRNA的普遍性进行比较，当前将DLL3鉴定为SCLC特异性肿瘤抗原。SCLC肿瘤中的DLL3表达水平为适中的，但极普遍，其中通过RNA-seq测得所分析的肿瘤中的约90％展示出DLL3表达的证据。与SCLC肿瘤相反，正常组织展示出极低的DLL3转录物表达，其中在睪丸、视神经和小脑中检测到少量表达。通过RNA-seq进行的SCLC细胞系与肿瘤的比较显示出类似的表达水平，而SCLC细胞系上DLL3表达的细胞表面定量指示表达水平低于5000DLL3/细胞，其中典型表达水平低于2000DLL3/细胞。通过IHC确认了DLL3蛋白质的表达，其中86％的SCLC肿瘤显示出DLL3阳性染色，具有均质和膜性染色图案。除小脑中的极暗淡的染色以外，所有其他正常组织均对DLL3染色呈阴性。DLL3为非典型Notch配体，以细胞自发方式发挥抑制Notch信号传导的功能，顺式结合到Notch，由此阻断细胞与细胞的相互作用和靶细胞中Notch的内化(典型Notch信号传导的标志)。DLL3的主要作用是在胚胎发育期间的体节发生。DLL3敲除小鼠在中轴骨和颅脑及神经元发育中展示节段性缺损。也在具有某些种系DLL3突变的人中发现体节模式形成缺陷(Somiticpatterningdefect)，引起称为脊椎肋骨发育不全的病状。先前已在使用抗体-药物偶联物(ADC)的诊断和治疗除SCLC以外的胶质瘤的方法中提出DLL3(WO2013/126746)。鉴于细胞表面上蛋白质的低表达水平以及低表达情况下ADC降低的针对靶标的性能，将基于ADC的方法用于DLL3可能具有局限。此外，ADC分子通常显示与自由弹头(freewarhead)有关的毒性(可能为接头降解的结果)，从而导致最大耐受剂量限制和对与针对抗体所选择的靶标无关的功效的潜在影响。鉴于T细胞对其靶标的所需敏感性，这对于T细胞接合性双特异性分子(经工程改造以同时接合DLL3和CD3)不大可能成为问题，且已在每个细胞表达数百种靶标蛋白质的细胞系上显示出强效的体外细胞毒性。此外，由于DLL3和CD3靶标的更有效接合，双特异性T细胞接合性抗体构建体相对于正常抗体(全长IgG)而言通常较小的尺寸就可改善组织渗透并增强效能，从而引起T细胞与靶标肿瘤细胞之间改善的突触形成。SCLC仍为远未满足的医学需求，且需要新的治疗选项以改善此相当大的患者群体的展望。上文论述的双特异性抗体形式得到了临床验证，且因此靶向DLL3和CD3的抗体构建体代表治疗SCLC的有前景的新的可能和改善罹患此适应症的患者的存活的机会。由于仍需要用于治疗与DLL3的过表达有关的肿瘤或癌症疾病的其他可用选项，在此提供以双特异性抗体构建体的形式解决此问题的手段和方法，所述双特异性抗体构建体具有针对DLL3的一个结合结构域和针对T细胞上的CD3的第二结合结构域。因此，在第一方面，本专利技术提供双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人DLL3的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3的第二结合结构域，其中第一结合结构域结合到如SEQIDNO：260所描绘的区域内所含的DLL3的表位。必须注意，如本文所用，除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个/种”和“该/所述”包括复数个提及物。因此，例如，对“一种试剂”的提及包括此类不同试剂中的一者或多者，且对“该方法”的提及包括本领域的普通技术人员已知的可针对本文所述的方法进行修改或代替的等效步骤和方法的提及。除非另外指示，否则在一系列要素之前的术语“至少”应理解为指该系列中的每一要素。本领域的技术人员将认识到或能够仅使用常规实验就能确定本文所述的本专利技术的特定实施方案的许多等效形式。本专利技术旨在涵盖此类等效形式。每当在本文中使用时，术语“和/或”包括“和”、“或”和“由所述术语连接的要素的所有或任何其他组合”的含义。如本文所用，术语“约”或“大致”意指在给定值或范围的±20％内，优选±15％内，更优选±10％内且最优选±5％内。在本说明书通篇和随后的权利要求中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”和诸如“包括(comprises)”和“含有(comprising)”的变化形式应理解为暗示包括所述整数或步骤或整数或步骤的组，但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤的组。在本文中使用时，术语“包含”可被术语“含有”或“包括”代替，或有时在本文中使用时，被术语“具有”代替。当在本文中使用时，“由......组成”排除所主张要素中未规定的任何要素、步骤或成分。当在本文中使用时，“基本上由......组成”不排除并不实质性影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。在本文中的各种情况下，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人DLL3的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3和至少猕猴CD3的第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合到如SEQ ID NO：260所描绘的区域内所含的DLL3的表位。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.07.31 US 62/199,930;2016.02.03 US 62/290,8961.一种双特异性抗体构建体，其包含结合到靶细胞表面上的人DLL3的第一结合结构域和结合到T细胞表面上的人CD3和至少猕猴CD3的第二结合结构域，其中所述第一结合结构域结合到如SEQIDNO：260所描绘的区域内所含的DLL3的表位。2.根据权利要求1所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域进一步结合到猕猴DLL3，优选结合到食蟹猴DLL3。3.根据权利要求1或2所述的抗体构建体，其中所述第二结合结构域结合到人CD3ε并且结合到普通狨、棉顶狨或松鼠猴CD3ε。4.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述抗体构建体呈选自以下的形式：(scFv)2、scFv-单结构域mAb、双功能抗体和上述形式的寡聚物。5.根据前述权利要求中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域结合到如SEQIDNO：258所描绘的区域内所含的DLL3的表位。6.根据权利要求5所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区含有选自以下项的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区含有选自以下项的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：a)如SEQIDNO：31所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：32所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：33所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：34所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：35所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：36所描绘的CDR-L3；b)如SEQIDNO：41所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：42所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：43所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：44所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：45所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：46所描绘的CDR-L3；c)如SEQIDNO：51所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：52所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：53所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：54所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：55所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：56所描绘的CDR-L3；d)如SEQIDNO：61所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：62所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：63所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：64所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：65所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：66所描绘的CDR-L3；e)如SEQIDNO：71所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：72所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：73所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：74所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：75所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：76所描绘的CDR-L3；f)如SEQIDNO：81所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：82所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：83所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：84所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：85所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：86所描绘的CDR-L3；g)如SEQIDNO：91所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：92所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：93所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：94所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：95所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：96所描绘的CDR-L3；h)如SEQIDNO：101所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：102所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：103所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：104所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：105所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：106所描绘的CDR-L3；和i)如SEQIDNO：111所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：112所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：113所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：114所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：115所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：116所描绘的CDR-L3。7.根据权利要求5或6所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含选自以下项中所描绘的VH区的VH区：SEQIDNO：37、SEQIDNO：47、SEQIDNO：57、SEQIDNO：67、SEQIDNO：77、SEQIDNO：87、SEQIDNO：97、SEQIDNO：107、SEQIDNO：117、SEQIDNO：435和SEQIDNO：529。8.根据权利要求5至7中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含选自以下项中所描绘的VL区的VL区：SEQIDNO：38、SEQIDNO：48、SEQIDNO：58、SEQIDNO：68、SEQIDNO：78、SEQIDNO：88、SEQIDNO：98、SEQIDNO：108、SEQIDNO：118、SEQIDNO：436和SEQIDNO：530。9.根据权利要求5至8中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区和VL区选自如以下项中所描绘的VH区和VL区的配对：SEQIDNO：37+38；SEQIDNO：47+48；SEQIDNO：57+58；SEQIDNO：67+68；SEQIDNO：77+78；SEQIDNO：87+88；SEQIDNO：97+98；SEQIDNO：107+108；SEQIDNO：117+118；SEQIDNO：435+436；和SEQIDNO：529+530。10.根据权利要求5至9中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含选自以下项中所描绘的多肽的多肽：SEQIDNO：39、SEQIDNO：49、SEQIDNO：59、SEQIDNO：69、SEQIDNO：79、SEQIDNO：89、SEQIDNO：99、SEQIDNO：109、SEQIDNO：119、SEQIDNO：437和SEQIDNO：531。11.根据权利要求5至10中任一项所述的抗体构建体，其包含选自以下项中所描绘的多肽的多肽：SEQIDNO：40、SEQIDNO：50、SEQIDNO：60、SEQIDNO：70、SEQIDNO：80、SEQIDNO：90、SEQIDNO：100、SEQIDNO：110、SEQIDNO：120、SEQIDNO：211、SEQIDNO：212、SEQIDNO：213、SEQIDNO：214、SEQIDNO：215、SEQIDNO：216、SEQIDNO：217、SEQIDNO：438和SEQIDNO：532。12.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域结合到如SEQIDNO：259所描绘的区域内所含的DLL3的表位。13.根据权利要求12所述的抗体构建体，其中所述第一结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区含有选自以下项的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区含有选自以下项的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3：a)如SEQIDNO：121所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：122所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：123所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：124所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：125所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：126所描绘的CDR-L3；b)如SEQIDNO：131所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：132所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：133所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：134所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：135所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：136所描绘的CDR-L3；c)如SEQIDNO：141所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：142所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：143所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：144所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：145所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：146所描绘的CDR-L3；d)如SEQIDNO：151所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：152所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：153所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：154所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：155所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：156所描绘的CDR-L3；e)如SEQIDNO：161所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：162所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：163所描绘的CDR-H3、如SEQIDNO：164所描绘的CDR-L1、如SEQIDNO：165所描绘的CDR-L2和如SEQIDNO：166所描绘的CDR-L3；f)如SEQIDNO：131所描绘的CDR-H1、如SEQIDNO：439所描绘的CDR-H2、如SEQIDNO：133所描绘的CDR-H3、...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·劳姆，P·库弗，J·彭泽莱克，C·布鲁麦尔，C·达尔霍夫，P·霍夫曼，R·路特布斯，E·纳赫沃尔德，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE