包含分选酶缀合环的重组免疫球蛋白重链及其缀合物制造技术

本公开涉及重组免疫球蛋白重链，其包含VH‑结构域、CH1结构域、向下至中间铰链区的最C‑末端半胱氨酸的铰链区、分选酶缀合环、CH2结构域和CH3结构域，其中所述分选酶缀合环a)由位于中间铰链区的最C‑末端半胱氨酸和免疫球蛋白重链CH2‑结构域的N‑末端处的VFX1FPP (SEQ ID NO:2；其中X1是L或I)共有序列之间的至少16个氨基酸组成，b)包含由氨基酸序列LPX1TX2 (SEQ ID NO:01)组成的分选酶识别基序，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A，c)在(b)的序列的N‑末端包含至少两个氨基酸，d)在(b)的序列的C‑末端包含至少6个氨基酸，且e) 其中在(b)的序列的C‑和N‑末端的氨基酸不是半胱氨酸，以及涉及其在基于酶分选酶的定点缀合中的用途。

Recombinant immunoglobulin heavy chain containing its sorting loop and its conjugates

The present disclosure involves the recombinant immunoglobulin heavy chain, which includes the VH domain, the CH1 domain, the hinges of the most C terminal cysteine, the sorting enzyme conjugation ring, the CH2 domain, and the CH3 domain, in which the sorting enzyme conjugates ring a) is the most C terminal cysteine and immunization at the intermediate hinge region. The VFX1FPP (SEQ ID NO:2; X1 is L or I) at at least 16 amino acids between the VFX1FPP (SEQ ID NO:2; X1 is L or I). The terminal end of N contains at least two amino acids, d) at the C terminal end of the (b) sequence containing at least 6 amino acids, and E) in which the amino acid of the sequence of (b) and the amino acid at the terminal of N is not cysteine, and involves its use in the fixed-point binding of the enzyme based enzyme separation enzyme.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含分选酶缀合环的重组免疫球蛋白重链及其缀合物本专利技术涉及包含分选酶缀合环的重组免疫球蛋白重链，通过使用酶分选酶缀合和/或标记此类重组免疫球蛋白重链的方法，以及经由所述方法获得的缀合物/标记的产物。专利技术背景蛋白的位点特异性修饰是有挑战性的问题，特别是对于用于诊断或治疗应用的抗体。在工业规模上经济且适用的位点特异性多肽修饰的可靠方法是非常重要的。蛋白官能化的早期方法通过使蛋白与过量的硫醇或胺反应性试剂诸如马来酰亚胺或N-羟基琥珀酰亚胺酯分别反应来利用半胱氨酸或赖氨酸残基的反应性。它们丰富，分布广泛，并且由于适当偶联化学的可用性而容易修饰。然而，“赖氨酸-标记”策略，当例如用于标记抗体或其抗原结合片段时具有几个缺点：a)其经常导致抗原结合活性(在抗原结合位点中或其附近的赖氨酸)的显著降低；b)单标记的缀合物，甚至在相同的1：1化学计量下，也由包含经由多肽内的赖氨酸中的不同赖氨酸附接的标记物的混合物组成，以及c)期望的1:1产物的产率相当低。近期最重要的位点特异性蛋白标记方法之一是经由酶促反应将生物正交官能团并入蛋白。对于关于“蛋白的酶促标记”的最近综述，参见M.Rashidian等人本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.重组免疫球蛋白重链，其包含VH‑结构域、CH1结构域、向下至中间铰链区的最C‑末端半胱氨酸的铰链区、分选酶缀合环、CH2结构域和CH3结构域，其中所述分选酶缀合环a) 由位于中间铰链区的最C‑末端半胱氨酸和免疫球蛋白重链CH2‑结构域的N‑末端处的VFX1FPP (SEQ ID NO:2；其中X1是L或I)共有序列之间的至少16个氨基酸组成，b) 包含由氨基酸序列LPX1TX2 (SEQ ID NO:01)组成的分选酶识别基序，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A，c) 在(b)的序列的N‑末端包含至少两个氨基酸，d) 在(b)的序列的C‑末端包含至少6个氨基酸，且e) 其中在(b)...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.09.25 EP 15186821.31.重组免疫球蛋白重链，其包含VH-结构域、CH1结构域、向下至中间铰链区的最C-末端半胱氨酸的铰链区、分选酶缀合环、CH2结构域和CH3结构域，其中所述分选酶缀合环a)由位于中间铰链区的最C-末端半胱氨酸和免疫球蛋白重链CH2-结构域的N-末端处的VFX1FPP(SEQIDNO:2；其中X1是L或I)共有序列之间的至少16个氨基酸组成，b)包含由氨基酸序列LPX1TX2(SEQIDNO:01)组成的分选酶识别基序，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A，c)在(b)的序列的N-末端包含至少两个氨基酸，d)在(b)的序列的C-末端包含至少6个氨基酸，且e)其中在(b)的序列的C-和N-末端的氨基酸不是半胱氨酸。2.权利要求1的重组免疫球蛋白重链，其中所述分选酶缀合环在序列LPX1TX2(SEQIDNO:01，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A)的C-末端包含至少9个氨基酸。3.权利要求1或2的重组免疫球蛋白重链，其中所述分选酶缀合环在序列LPX1TX2(SEQIDNO:01，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A)的N-末端包含至少5个氨基酸。4.权利要求1或2的重组免疫球蛋白重链，其中所述分选酶缀合环在序列LPX1TX2(SEQIDNO:01，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A)的N-末端包含至少8个氨基酸。5.根据权利要求1至3中任一项所述的重组免疫球蛋白重链，其中所述分选酶缀合环在序列LPX1TX2(SEQIDNO:01，其中X1可以是任何氨基酸残基且X2是G或A)的N-末端包含至少5个氨基酸，且在所述序列的C-末端包含至少9个氨基酸。6.根据权利要求1至3中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：A恩格尔，P库巴莱克，A尼希特尔，T厄尔施莱格尔，R施莱希特，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH