本发明专利技术涉及抗体领域，公开了一种能够结合肺特异X蛋白的抗体或抗体片段及其用途。本发明专利技术的抗体或抗体片段包括重链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6；或包括重链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。本发明专利技术的抗体或抗体片段能介导多种抗肿瘤机制，抗肿瘤效果较佳。本发明专利技术还得到了特异性和抗肿瘤活性仍保持在较佳水平的嵌合抗体。
Antibodies or antibody fragments that bind to lung specific X protein and their uses
The invention relates to the field of antibodies, and discloses an antibody or antibody fragment which can combine lung specific X protein and uses thereof. The antibody or antibody fragments of the present invention include the sequence of heavy chain CDR amino acid sequences SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2 and SEQ ID NO:3, and light chain CDR amino acid sequences. Amino acid sequences SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:5 and SEQ ID NO:6. The antibody or antibody fragment of the invention can mediate a variety of anti-tumor mechanisms and has better anti-tumor effect. The present invention also obtains chimeric antibodies with specific and anti-tumor activity still at a better level.
【技术实现步骤摘要】
能够结合肺特异X蛋白的抗体或抗体片段及其用途
本专利技术涉及抗体领域，具体地，涉及一种能够结合肺特异X蛋白的抗体或抗体片段及其用途。
技术介绍
21世纪以来，抗体治疗取得了突飞猛进的发展，已经成为恶性肿瘤治疗最成功和最重要的策略之一。单克隆抗体药物凭其特异性高和毒性低的优势而成为目前分子靶向治疗研究的热点，临床实践已经表明单克隆抗体卓著的疗效已经把肿瘤治疗推向一个前所未有的新阶段。肺癌是近年来发病率和致死率最高的恶性肿瘤之一，其5年存活率仅为13％，因此急需寻找有效的肺癌生物治疗靶标，从而有利于肺癌的靶向单克隆抗体药物的治疗。目前肺癌临床主要分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌，而其中85％以上为非小细胞肺癌。大量研究证实肺特异X蛋白(LunX)的mRNA可作为肺癌诊断的特异性生物标志物，主要表达于非小细胞肺癌表面，且阳性率达到90％，还发现LunX蛋白表达越高的患者呈现更差的病理分期、更低的分化状态和生存周期。另外，在正常外周肺组织以及乳腺、肝脏、卵巢等其它器官中都没有检测到LunX的表达(XiaohuZhengetal.,CancerRes；75(6)；1080-90.2015AACR；LynneBingleetal.,JPathol；2005；205:491-497)。肺特异X蛋白(LunX)，属于PLUNC家族，其基因是Iwao研究团队通过对人体13种不同组织中分离出来的RNA运用差异显示技术，于2001年发现的一种人肺组织特异性X蛋白。基因定位于20p11.1q12，全长1015bp，包括一个编码256个氨基酸的768个核苷酸的开放式阅读框。关于LunX在肺癌中过表达的功能，主要证实LunX促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，靶向干扰LunX能够明显抑制肿瘤的发生与发展。LunX作用于肿瘤相关蛋白14-3-3，通过促进14-3-3形成活化状态的同源或异源二聚体，进而活化下游的Erk1/2和JNK信号通路，最终导致肿瘤细胞的增殖和转移(XiaohuZhengetal.,CancerRes；75(6))。因此，针对LunX的靶向抗体可能是肺癌治疗的潜在药物。研究报道鼠源的单克隆抗体应用于人类将产生强的免疫原性，可引起对异种蛋白的排斥反应，产生人抗鼠抗体(Humananti-mouseantibody，HAMA)反应，多次使用可能导致病人过敏性休克，其它副作用还体现在鼠源抗体的体内快速清除、心脏毒性以及快速耐药等。鉴于此，可以利用抗体工程技术对抗体结构进行改造，将动物来源的单克隆抗体人源化(Monoclonalhumanization)，以降低其免疫原性，并同时保证抗体的特异性。目前针对肿瘤靶向抗原的单克隆抗体可以通过两种机制发挥抗肿瘤作用。一种是直接机制，主要是抗体与肿瘤细胞表面的抗原结合后，改变抗原的活化形式或抗原的降解，进而阻断其相应的下游促癌信号通路的活化，最终抑制肿瘤细胞的增殖和转移；另一种是间接机制，主要是通过活化免疫反应实现，包括抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(Antibody-DependentCell-MediatedCytotoxicity，ADCC)和补体依赖的细胞毒作用(ComplementDependentCytotoxicity，CDC)。为了获得更佳的抗肿瘤效果，都希望抗肿瘤药物能够通过上述多种机制发挥抗肿瘤作用，因此，开发能够介导多种抗肿瘤机制的抗LunX抗体显得尤为必要。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种能够介导多种抗肿瘤机制的抗体或抗体片段及其用途。为了实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种能够结合肺特异X蛋白的抗体或抗体片段，该抗体或抗体片段包括重链CDR氨基酸序列SEQIDNO：1、SEQIDNO：2和SEQIDNO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6；或者，包括重链CDR氨基酸序列SEQIDNO：1、SEQIDNO：7和SEQIDNO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQIDNO：8、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6。第二方面，本专利技术提供了一种组合物，该组合物含有第一方面所述的抗体或抗体片段以及药学上可接受的载体。第三方面，本专利技术提供了一种用于检测样品中肺特异X蛋白的试剂盒，该试剂盒含有第一方面所述的抗体或抗体片段。第四方面，本专利技术提供了第一方面所述的抗体或抗体片段在制备用于检测样品中肺特异X蛋白的试剂中的用途。第五方面，本专利技术提供了第一方面所述的抗体或抗体片段在制备用于抑制癌细胞的药物中的用途。第六方面，本专利技术提供了编码第一方面所述的抗体或抗体片段的核酸。第七方面，本专利技术提供了含有第六方面所述的核酸的重组载体或转化子。通过上述技术方案，本专利技术的抗体或抗体片段能够介导多种抗肿瘤机制，抗肿瘤效果较佳。而且，本专利技术的专利技术人进一步对所述抗体或抗体片段进行了人源化，所得嵌合抗体或人源化抗体或抗体片段的特异性和抗肿瘤活性仍保持在较佳水平。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。附图说明附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是本专利技术一种实施方式中的嵌和抗体的ELISA分析结果图；图2是本专利技术一种实施方式中的嵌合抗体结合肺癌细胞表面LunX蛋白的活性结果图；图3是流式细胞术检测嵌合抗体的抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用的结果图；图4是本专利技术一种实施方式中的嵌合抗体抑制肿瘤体内生长的活性结果图。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。在本专利技术中，在未作相反说明的情况下，使用的术语如“抗体片段”通常是指抗原结合性抗体片段，可以包括完整抗体的一部分，一般是抗原结合区或可变区，抗体片段的实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv，双抗体，线性抗体，单链抗体分子等。术语“互补决定区”或“CDR氨基酸序列”或“CDR序列”是指抗体中负责抗原结合的氨基酸序列，例如，通常包括：轻链可变区中23-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)附近，和重链可变区中31-35B(H1)、50-65(H2)和95-102(H3)附近的氨基酸残基(Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，5thEd.PublicHealthService，NationalInstitutesofHealth，Bethesda，MD.(1991))；和/或来自“高变环”(例如，轻链可变区中26-32(LI)、50-52(L2)和91-96(L3)，和重链可变区中26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)附近的氨基酸残基(Chothia和LeskJ.Mol.Bi本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够结合肺特异X蛋白的抗体或抗体片段，其特征在于，该抗体或抗体片段包括重链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6；或者，包括重链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。
【技术特征摘要】
1.一种能够结合肺特异X蛋白的抗体或抗体片段，其特征在于，该抗体或抗体片段包括重链CDR氨基酸序列SEQIDNO：1、SEQIDNO：2和SEQIDNO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6；或者，包括重链CDR氨基酸序列SEQIDNO：1、SEQIDNO：7和SEQIDNO：3以及轻链CDR氨基酸序列SEQIDNO：8、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6。2.根据权利要求1所述的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段能够结合SEQIDNO：9所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述的抗体或抗体片段，其中，所述抗体或抗体片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO：10或SEQIDNO：12所示；和/或，所述抗体或抗体片段的轻链可变区的...
【专利技术属性】
技术研发人员：田志刚，魏海明，郑小虎，孙汭，肖卫华，刘丹，王保如，
申请(专利权)人：合肥瑞达免疫药物研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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