一种马钱子碱的提取分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种马钱子碱的提取分离纯化方法，属于药物技术领域。该方法包括但不限于：取马钱子破碎成粗粉，乙醇提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，得马钱子总碱提取浓缩液；将马钱子总碱提取浓缩液酸化，加有机溶剂萃取除杂，萃余液碱化，加有机溶剂萃取，得萃取液；萃取液上硅胶层析柱，洗脱，收集洗脱液马钱子碱段，合并，浓缩，干燥，通过重结晶法纯化即可得到纯度95%以上的马钱子碱。

A method for extraction and purification of a kind of equine

The invention discloses a method for extracting, separating and purifying horse money base, and belongs to the field of medicine technology. The method includes, but is not limited to: crushing the semen Strychni into coarse powder, extracting ethanol, combining extraction liquid, filtering, concentrating and recovering ethanol to no alcohol taste, extracting concentrated liquid from the total alkaloid of semen Strychni, extracting the concentration solution of the total alkaloid of semen Strychni, adding organic solvent extraction, extracting liquid alkali and extracting organic solvent. In the extraction solution, the silica gel column, elution, and the eluant brucine segment were collected, combined, concentrated and dried, and the purity of brucine was more than 95% purity by recrystallization.

【技术实现步骤摘要】
一种马钱子碱的提取分离纯化方法
本专利技术涉及一种中药有效成分的提取方法，特别是涉及一种从中药马钱子中提取马钱子碱的方法，属于药物

技术介绍
马钱子又名番木鳖，始载于《本草纲目》，味苦，寒性，有大毒，归肝，脾经，功效为通络止痛，散结消肿。临床上用于风湿顽痹，麻木瘫痪，跌打损伤，痈疽肿痛，小儿麻痹后遗症，类风湿性关节炎等疾病；但具有剧毒的特性严重影响其在临床上的应用，所谓“毒药猛剂善起沉疴”。马钱子的治疗量为0.3-0.6g,过量易出现中毒，如何合理安全使用马钱子，成为近年的研究热点之一。研究表明，总生物碱是马钱子中最主要的有效部位，包括马钱子碱、士的宁、番木鳖次碱、马钱子新碱、番木鳖甙、依卡精等，其中的主要生物碱成分中马钱子碱具有抗炎、镇痛作用，士的宁则是中枢神经兴奋剂，主要在临床上治疗面瘫，神经麻痹等，同时也是主要的毒性成分，基本无抗炎、镇痛作用；文献报道小鼠灌服士的宁、马钱子碱、马钱子仁的LD50分别为3.27mg/kg、233mg/kg和234.5mg/kg；小鼠腹腔注射上述药物的LD50分别为1.53mg/kg、69.77mg/kg和76mg/kg，其口服中毒剂量成人为5～10mg,口服致死量为30mg。表明士的宁是马钱子中的主要毒性成分。有文献报道，分别用士的宁和马钱子碱给小鼠灌胃，两者的LD50分别为3.27mg/kg和233mg/kg，由此可以得知士的宁的安全性很低，如果能除去马钱子总生物碱中的部分士的宁，则既能降低其毒性，又能保留其原有的抗炎镇痛的药理活性，提高临床用药的安全性。因此，现代研究中需要一种能降低士的宁含量的马钱子总碱的提取方法。有文献报道，分别用士的宁和马钱子碱给小鼠灌胃，两者的LD50分别为3.27mg/kg和233mg/kg，由此可以得知士的宁的安全性很低，如果能除去马钱子总碱中的部分士的宁，则既能降低其毒性，又能保留其原有的抗炎镇痛的药理活性，提高临床用药的安全性。因此，现代研究中需要一种提高马钱子碱纯度的制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种安全性高、成本低、收率高的马钱子碱的提取分离纯化方法，主要是利用马钱子碱的特性及马钱子碱和士的宁的不同性质来提取分离纯化。本专利技术是通过以下技术方案实现的：（1）提取：取马钱子破碎成粗粉，加5-12倍量30-95%乙醇回流提取1-3次，每次0.5-2h，合并提取液，滤过，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，即得马钱子总碱提取浓缩液；（2）萃取：取步骤（1）中得到的马钱子总碱提取浓缩液，调至浓度为0.1-5g药材量/ml，酸化（酸化所用酸为盐酸、硫酸、磷酸中的一种），酸化后的酸浓度为0.1-10%，加0.5-4倍量有机溶剂（有机溶剂为乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、正丁醇中的一种）萃取1-4次，去除杂质，萃余液碱化（碱化所用碱为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙中的一种），碱化后pH值为9-13，加0.5-4倍量有机溶剂（有机溶剂为乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、甲苯、正丁醇中的一种）萃取1-4次，即得萃取液；（3）纯化：取步骤（2）中得到的萃取液，上硅胶层析柱，洗脱（洗脱所用洗脱溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇中的一种或几种，洗脱溶剂含水量的体积百分率为0-10%，用量为5-40倍量的硅胶层析柱的柱体积），收集洗脱液马钱子碱段，合并洗脱液，减压浓缩至适量，干燥，通过重结晶法纯化即可得到马钱子碱。该技术方案优选为：（1）提取：取马钱子破碎成粗粉，加10倍量50%乙醇回流提取2次，每次1.5h，合并提取液，滤过，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至适量，即得马钱子总碱提取浓缩液；（2）萃取：取步骤（1）中得到的马钱子总碱提取浓缩液，调至浓度为0.5g药材量/ml，酸化，酸化后的酸浓度为1%，加1倍量有机溶剂萃取1次，去除杂质，萃余液碱化，碱化后pH值约为11，加1倍量有机溶剂萃取2次，即得萃取液；（3）纯化：取步骤（2）中得到的萃取液，上硅胶层析柱，洗脱，收集洗脱液马钱子碱段，合并洗脱液，减压浓缩至适量，干燥，通过重结晶法纯化即可得到马钱子碱。以上技术方案的重结晶法为酸水溶解-碱水析出法与有机溶剂结晶法两种方法重复交替使用。其中，酸水溶解-碱水析出法的酸水为盐酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液、柠檬酸溶液中的一种；碱水为氢氧化钙溶液、氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液、稀氨水溶液中的一种；有机溶剂重结晶法的有机溶剂为乙酸乙酯、三氯甲烷、二氯甲烷、乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇中的一种。通过以上方法制得马钱子总碱中的马钱子碱纯度≥95%。本专利技术药物的活性成分可以加入药剂学上可接受的辅料按常规工艺制备成所需制剂。如可以制成常用的片剂（分散片、泡腾片、口腔崩解片、含片、咀嚼片、泡腾片）、胶囊剂（硬胶囊、软胶囊剂）、颗粒剂、丸剂（滴丸剂）、散剂等固体制剂形式的口服药物，也可以制成糖浆、口服液等液体制剂形式的口服药物；还可以制成膏剂、凝胶剂、软膏剂、巴布剂、贴膏剂、搽剂、洗剂、涂膜剂等外用制剂形式的外用药物。因此，该药物组合物中除有效成分外，还可以含有药学上可以接受的辅料。这里所述的辅料，可以根据不同的制剂有所不同，如在片剂、胶囊剂、颗粒剂等固体制剂中常用的稀释剂、崩解剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、表面活性剂、填充剂等；在糖浆、口服液等液体制剂形式中常用的表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂、助流剂等；在凝胶剂、软膏剂等外用制剂形式中常用的药用油性基质、水性基质、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、透皮吸收促进剂、表面活性剂等。其常用辅料如淀粉、乳糖、糊精、糖粉、微晶纤维素、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙、改良淀粉、山梨醇、聚乙烯吡咯酮、重质碳酸镁、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲淀粉钠、羟丙基纤维素、聚维酮K30、白陶土、预胶化淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、甜叶菊苷、甜菜碱、阿司帕坦、甘草甜素、糖精钠、枸橼酸、碳酸氢钠、碳酸钠、卡拉胶、琼脂、明胶、海藻酸钠、黄原胶、瓜耳豆胶、西黄耆胶、阿拉伯胶、槐豆胶、刺梧桐胶、硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、聚丙烯酰胺、交联型聚丙烯酸钠、聚乙烯醇、卡波姆、山梨酸、山梨酸钾、羟苯乙酯、苯甲醇、尼泊金、硫柳汞、二甲基亚砜、氮酮、三乙醇胺、氢氧化钠、甘油、丙二醇、BHT、BHA、十二烷基硫酸钠、吐温类、司盘类等。马钱子为马钱科植物马钱（Strychnosnux-vomicaL.）的干燥成熟种子经炮制所得制马钱子，具有通络止痛、消肿散结的功效，临床用于治疗风湿顽痹、麻木瘫痪、跌打损伤和痈疽肿痛等疾病。马钱子主要活性成分为总生物碱，其中生物碱成分中马钱子碱具有较好的抗炎镇痛的药理活性，是马钱子的主要有效成分，而另一含量较高的士的宁是强毒性成分，同时为无效成分，所以在提取过程中需要提高马钱子碱的含量，降低士的宁的含量。本专利技术与申请号为201110294731.8、201110300527.2、201110297528.6、201110408433.7的四个专利技术技术方案不同之处在于，通过优化萃取方法，制得高纯度的马钱子碱，且该纯化使用过的硅胶柱可以多次重复使用，大大降低了生产成本。本专利技术具体纯化方法是指在进行硅胶柱层析之前,采用先酸化后碱化的萃取工艺，去除马钱子总碱提取浓缩液中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种马钱子碱的提取分离纯化方法，其特征在于，步骤如下：（1）提取：取马钱子破碎成粗粉，加5‑12倍量30‑95%乙醇回流提取1‑3次，每次0.5‑2h，合并提取液，滤过，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，即得马钱子总碱提取浓缩液；（2）萃取：取步骤（1）中得到的马钱子总碱提取浓缩液，调至浓度为0.1‑5g药材量/ml，酸化，酸化后的酸浓度为0.1‑10%，加0.5‑4倍量有机溶剂萃取1‑4次，去除杂质，萃余液碱化，碱化后pH值为9‑13，加0.5‑4倍量有机溶剂萃取1‑4次，即得萃取液；（3）纯化：取步骤（2）中得到的萃取液，上硅胶层析柱，洗脱，收集洗脱液马钱子碱段，合并洗脱液，减压浓缩至适量，干燥，通过重结晶法纯化即可得到马钱子碱。

【技术特征摘要】
1.一种马钱子碱的提取分离纯化方法，其特征在于，步骤如下：（1）提取：取马钱子破碎成粗粉，加5-12倍量30-95%乙醇回流提取1-3次，每次0.5-2h，合并提取液，滤过，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，即得马钱子总碱提取浓缩液；（2）萃取：取步骤（1）中得到的马钱子总碱提取浓缩液，调至浓度为0.1-5g药材量/ml，酸化，酸化后的酸浓度为0.1-10%，加0.5-4倍量有机溶剂萃取1-4次，去除杂质，萃余液碱化，碱化后pH值为9-13，加0.5-4倍量有机溶剂萃取1-4次，即得萃取液；（3）纯化：取步骤（2）中得到的萃取液，上硅胶层析柱，洗脱，收集洗脱液马钱子碱段，合并洗脱液，减压浓缩至适量，干燥，通过重结晶法纯化即可得到马钱子碱。2.根据权利要求1所述的提取分离纯化方法，其特征在于，步骤如下：（1）提取：取马钱子破碎成粗粉，加10倍量50%乙醇回流提取2次，每次1.5h，合并提取液，滤过，滤液浓缩回收乙醇至无醇味，浓缩至适量，即得马钱子总碱提取浓缩液；（2）萃取：取步骤（1）中得到的马钱子总碱提取浓缩液，调至浓度为0.5g药材量/ml，酸化，酸化后的酸浓度为1%，加1倍量有机溶剂萃取1次，去除杂质，萃余液碱化，碱化后pH值约为11，加1倍量有机溶剂萃取2次，即得萃取液；（3）纯化：取步骤（2）中得到的萃取液，上硅胶层析柱，洗脱，收集洗脱液马钱子碱段，合并洗脱液，减压浓缩至适量，干燥，通过重结晶法纯化即可得到马钱子碱。3.根据权利要求1或2所述的提...

【专利技术属性】
技术研发人员：张保献，李艳英，吴珍珍，杨新涛，
申请(专利权)人：北京盈科瑞创新医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11