一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120，该菌株已于2016年11月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCC NO：60119。该罗伊乳杆菌HI120的亚油酸异构酶的表达水平比罗伊乳杆菌标准菌和其他益生菌高，能在体内和体外将亚油酸转化为共轭亚油酸。本发明专利技术还公开了一种含有上述罗伊乳杆菌HI120的微生物活菌制剂以及该微生物活菌制剂在制备具有预防和/或辅助治疗肥胖糖尿病功效以及具有预防和/或辅助治疗结肠直肠癌功效的食品添加剂、食品或药物中的应用。

Lactobacillus Roy HI120, a highly expressed linoleic acid isomerase LAI, and its application

The invention discloses a strain of Lactobacillus Roy HI120 with high expression of linoleic isomerase LAI, which has been preserved in the Guangdong microbial culture center in November 21, 2016 and its preservation is numbered as GDMCC NO:60119. The expression of linoleic isomerase of Lactobacillus royi HI120 is higher than that of Lactobacillus royi and other probiotics, and can convert linoleic acid into conjugated linoleic acid in vivo and in vitro. The invention also discloses a microbial active agent containing the HI120 of Lactobacillus royi and the microbial active agent in the preparation of food additives, food or drugs that have the efficacy of preventing and / or assisting in the treatment of obesity and having the efficacy of prevention and / or adjuvant therapy for colorectal cancer.

【技术实现步骤摘要】
一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120及其应用
本专利技术属于微生态活菌制剂
，具体涉及一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120及其应用。
技术介绍
肥胖、高血脂、脂肪肝等脂代谢异常所致的疾病严重威胁人类健康。长期的脂代谢异常不可避免会引发高血脂、高血压和高血糖等“三高”疾病，是进一步引发心脑血管意外、肝硬化、糖尿病和恶性肿瘤等严重疾病的主要因素，对人体健康危害极大。绝大多数的脂代谢异常都是由于不良的饮食结构和生活习惯所致，是能量的摄取和消耗不平衡造成的。其中，脂肪酸摄取过量和脂肪酸构成比例失调是最主要的因素。饮食中ω-6/ω-3脂肪酸(不饱和键位于甲基端第3/6碳原子上)的适当比例(5-8∶1)是保持身体健康的必要条件。ω-6脂肪酸摄入过多，或者ω-6/ω-3脂肪酸的比例失调都会导致脂代谢异常。动物油以饱和脂肪酸为主，长期食用容易引起肥胖等脂代谢异常。日常食用的植物油，如花生油、菜籽油、玉米油和豆油中，虽然以不饱和脂肪酸为主，但ω-6脂肪酸含量最多，ω-3脂肪酸含量极少。其中ω-6脂肪酸又以亚油酸(Linoleicacid，LA)含量最多，占总重量的35-70％，长期食用同样会引起肥胖等脂代谢异常。只有少数植物油，如亚麻籽油、紫苏油等含有一定量的ω-3脂肪酸α-亚麻酸(ALA)。但这些植物油由于植物种植面积小、出油率低，来源有限。深海鱼油、海藻油中富含20-30％二十二碳六烯酸(DHAC22:6)和二十碳五烯酸(EPAC20:5)等ω-3脂肪酸。但是，随着海洋资源的枯竭，深海鱼油来源有限，价格太高，也不能作为普通民众的常规食用油。ω-6脂肪酸是炎症介质合成的原料，在体内主要通过引起长期慢性炎症导致脂代谢异常及并发症。ω-6脂肪酸在体内主要转化为花生四烯酸(AA)，AA是合成前列腺素E2(PGE2)、血栓烷素A2(TXA2)和白三烯B4(LTB4)等最强炎症介质的原料。PGE2,LTA4、LTB4和TXA2、TXB2是体内活性最强的炎症介质，参与动脉粥样硬化、血栓形成、胰岛损伤和炎症发生等病理变化，并且有刺激细胞增殖，诱发肿瘤的作用。共轭亚油酸(CLA)具有很强的减肥降脂、降糖抗炎等功能作用。共轭亚油酸(CLA)是ω-6脂肪酸亚油酸(LA)的同分异构体，与LA结构相似，但功能作用却与LA绝然相反。CLA最初发现于牛奶中。反刍动物瘤胃中有些细菌，如溶纤维丁酸弧菌、埃氏巨球形菌有较高的LA异构酶(LAI)活性。LA化学结构中的双键都是顺式的。LAI可将LA中一个顺式双键变构为反式双键，形成共轭双键亚油酸，即CLA。最常见的CLA存在形式是cis-9,trans-11C18:2(c9t11)和trans-10,cis-12C18:2(t10c12)。许多益生菌，如罗伊氏乳酸杆菌、乳酸乳球菌和短双歧杆菌，基因组中都有LAI基因，但LAI活性不高，变构LA为CLA的效率很低。CLA在体内可最后转化生成为PGD3、TXA1/3、LTA5和前列环素I3(PGI3)等化合物，这些化合物与炎症介质PGE2、TXA2和LTB4等的结构相似，但作用刚好相反，起竞争抑制炎症反应的作用。比如，PGI3有扩张血管、减少血小板凝集的作用，可抑制血栓形成，降低心脑血管意外的风险。CLA还可以与核受体结合，直接进入细胞核调节一些基因的表达来发挥减肥、降脂的功能作用。CLA能与多种过氧化物酶体增殖子激活受体(PPAR)结合，调控一系列基因的表达：(1)抑制脂肪细胞的脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase)活性，阻止载脂蛋白B和A的降解，促进脂肪的转运和动员，抑制脂肪的合成，发挥降脂作用。(2)下调环氧化酶2(Cyclooxygenase2，COX-2)的表达。COX-2是催化花生四烯酸(AA)向PGE2转化的关键酶。下调COX-2表达可以抑制炎症反应。(3)上调一氧化氮合酶(iNOS)活性，促进PGF2α的生成，竞争抑制PGE2的作用。(4)上调P53、P21、P27等抑癌基因和促凋亡蛋白Bax表达，增强胱蛋白酶(caspase)3、9活性，下调周期素(cyclin)D、E和抗凋亡蛋白bcl-2的表达，抑制胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)的表达分泌。因而有抑制癌细胞增殖，促进细胞凋亡的作用。研究发现，CLA在体外能直接抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡。有研究显示，给肥胖(OB)小鼠喂食CLA，可显著上调脂肪细胞PPARγ表达，动员脂肪分解，改善胰岛素抵抗。临床试验显示，每天服用3-4g的混合CLA，正常成人、肥胖患者和中老年人的脂肪含量都有一定程度下降，糖尿病患者血糖降低，胰岛素的敏感性得到改善。虽然CLA早在2009年就被中国卫计委批准列入新食品名录。但是，化学合成或生物合成的CLA价格昂贵，不能作为普通民众的常规食品或食品添加剂。痤疮丙酸杆菌LAI基因可将LA变构为t10c12CLA。研究显示，口服痤疮丙酸杆菌LAI基因转化乳酸杆菌活菌可以显著改变小鼠脂肪组织和肝脏脂肪酸的组成，提高肠道和其他脂肪组织EPA和DHA等ω-3脂肪酸含量。但是，痤疮丙酸杆菌、溶纤维丁酸弧菌、埃氏巨球形菌等细菌是条件致病菌，还没有列入食用菌名录，活菌不能直接食用。而现有法规又不允许携带LAI基因的重组乳酸菌作为功能食品上市。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120，该罗伊乳杆菌HI120的亚油酸异构酶(LAI)的表达水平比罗伊乳杆菌标准菌和其他益生菌高，能在体内和体外将亚油酸(LA)转化为共轭亚油酸(CLA)。本专利技术的目的还在于提供一种微生物活菌制剂，该微生物制剂含有上述罗伊乳杆菌HI120，将该菌制备成活菌悬液、乳制品、活菌菌粉或菌片等活菌制剂，口服后能在人体肠道内增殖和富集，可将部分食物来源的LA转化为CLA。本专利技术的最后一个目的在于提供上述微生物活菌制剂在制备具有预防和/或辅助治疗肥胖糖尿病功效以及具有预防和/或辅助治疗结肠直肠癌功效的食品添加剂、食品或药物中的应用。本专利技术的第一个目的是通过以下技术方案来实现的：一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120，该菌株已于2016年11月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCCNO：60119。该罗伊乳杆菌HI120分离自健康幼儿的粪便，亚油酸异构酶(LAI)的表达水平比罗伊乳杆菌标准菌DSM20016(DSM)和长型双歧杆菌高6～10倍(如图2中所示)，能在体内和体外将亚油酸(LA)转化为共轭亚油酸(CLA)。具体的，该罗伊乳杆菌HI120的分类命名为：Lactobaccillusreuteri，保藏单位为：广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏日期为：2016年11月21日，保藏编号为：GDMCCNO：60119。本专利技术的第二个目的是通过以下技术方案来实现的：一种微生物活菌制剂，含有上述的高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120。该微生物活菌制剂可以为活菌悬液制剂、乳制品、活菌菌粉、冻干粉制剂、喷雾干燥肠溶活菌制剂、菌片等活菌制剂，口服后能在人体肠道内增殖和富集，可将部分食物来源的LA转化为CLA。本专利技术的第三个目的是通过以本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120，其特征是：该菌株已于2016年11月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCC NO：60119。

【技术特征摘要】
1.一株高表达亚油酸异构酶LAI的罗伊乳杆菌HI120，其特征是：该菌株已于2016年11月21日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其保藏编号为GDMCCNO：60119。2.一种微生物活菌制剂，其特征是：含有权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾位森，范宏英，孟晓静，吴军林，
申请(专利权)人：广州维生君生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44