高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域，公开了一株高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌，该菌株分类命名为橄榄产色链霉菌(Streptomyces olivochromogenes)，于2016年8月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.12831。在链霉菌基因组中插入一段AO基因，再通过抗性筛选和发酵培养重组链霉菌。将经密码子优化的AO基因，通过phic31整合酶整合入基因组，再通过抗性筛选和基因型筛选，得到重组链霉菌菌株。本发明专利技术整合入新的基因后，可提高18.7％葡萄糖异构酶基因的表达。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，涉及一株高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌及其应用。
技术介绍
葡萄糖异构酶(GlucoseIsomerase,GI)，编号：EC5.3.1.5(木糖异构酶)。具有将醛糖异构化为相应酮糖(比如转化葡萄糖成果糖)的活性。工业上普遍采用该酶，以葡萄糖浆为底物，将葡萄糖异构化为果糖后获得果葡糖浆产品。葡萄糖异构酶的生产菌株多样，诺维信报道用凝结芽孢杆菌和鼠灰链霉菌生产葡萄糖异构酶，杰能科报道用米苏西里游动放线菌和锈赤链霉菌进行生产葡萄糖异构酶。国内曾经投入生产的菌株以山东省食品发酵工业研究设计院贺家明等人筛选出来的7号淀粉酶链霉菌为基础，后经中国科学技术大学徐冲等人进行基因工程改造，在中科大易元生物技术有限公司产业化。用橄榄产色链霉菌生产葡萄糖异构酶早在1976年的US3957587里面已经提到，以橄榄产色链霉菌21114作为起始菌株，经紫外线照射诱变得到一系列的突变菌株，其中有几株菌株的产酶能力得到大幅提高。但是对于橄榄产色链霉菌的基因组测序和葡萄糖异构酶基因的测序一直未见报道，关于该菌株的基因工程也未见报道。phic31重组酶发现后，有多篇文章将其应用到链霉菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌株，该菌株分类命名为橄榄产色链霉菌(Streptomyces olivochromogenes)，于2016年8月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.12831。

【技术特征摘要】
1.一株高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌株，该菌株分类命名为橄榄产色链霉菌(Streptomycesolivochromogenes)，于2016年8月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCCNO.12831。2.权利要求1所述的高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌株在生产葡萄糖异构酶中的应用。3.一种构建高表达葡萄糖异构酶的重组链霉菌的方法，其特征在于在链霉菌基因组中插入一段AO基因得到重组链霉菌；优选的，所述的AO基因为一段经密码子优化的葡萄糖异构酶基因序列，其基因序列如SEQIDNO.2所示。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的AO基因用kasop和SF14两个链霉菌强启动子构成双启动子kasop-SF14或SF14-kasop，启动AO基因的表达。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的双启动子kasop-SF14的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。6.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明明，卢嫣红，杜华东，李峰，
申请(专利权)人：南京百斯杰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32